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    彩乐乐重庆时时彩: 一种制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物的方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201910005859

    申请日:

    20190103

    公开号:

    CN109394843A

    公开日:

    20190301

    当前法律状态:

    实质审查的生效

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效
    IPC分类号: A61K36/634;A23L33/105;A23L29/00;A23L5/30 主分类号: A61K36/634;A23L33/105;A23L29/00;A23L5/30
    申请人: 重庆工商大学
    发明人: 张杰;冯春荣;王星敏;李伏坤;杜若愚
    地址: 400067 重庆市南岸区学府大道19号
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201910005859

    授权公告号:

    法律状态公告日:

    20190326

    法律状态类型:

    实质审查的生效

    摘要

    一种生产贯叶连翘提取物的方法,特别涉及制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物的方法。本发明以贯叶连翘全草干药材为原料,经酶活化、酶解、微波处理、乙醇提取、反渗透、冷冻干燥等生产得到富含金丝桃素的贯叶连翘提取物。本发明方法具有生产工艺简单、稳定、易于放大,产品收率高,设备投资成本低,生产成本低,贯叶连翘资源综合利用率高等特点。采用本发明方法制备出的贯叶连翘提取物具有金丝桃素含量高、性能稳定等特点。

    权利要求书

    1.一种制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物的方法,其特征在于具体方法步骤如下: (1)制备酶活化液 首先按照市售木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶的质量:纯化水的体积比为1 g:40~60 mL的比例,将木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶分散到纯化水中,再放入超声波处理器中,控制温度为35~45℃,进行超声处理10~15min;超声完成后,收集混合液,即为酶活化液,用作下一步处理; (2)制备贯叶连翘酶解提取物 第(1)步完成后,以市售贯叶连翘全草干药材为原料,先经粉碎机粉碎至40~80目,收集贯叶连翘粉末;再按照贯叶连翘粉末的质量:纯化水的体积比为1 g:6~10 mL的比例,将贯叶连翘粉末分散于纯化水中,完全浸透,在温度为50~60℃下,浸泡30~45min,再用0.1~0.5mol/L的盐酸溶液调节pH至4.4~4.8;最后再按照贯叶连翘粉末的质量:酶活化液的体积比为1 g:1~3 mL的比例,加入酶活化液,在温度为40~50℃下酶解处理5~7h,酶解结束后在温度为80~90℃下,酶灭活5~10min,收集混合物,即为贯叶连翘酶解提取物,用作下一步处理; (3)制备贯叶连翘微波提取物 第(2)步完成后,先将第(2)步收集得到的贯叶连翘酶解提取物置于微波反应器中,在温度为40~50℃、功率为300~400W的条件下,微波提取6~12min,再泵入真空过滤机中,进行真空过滤,分别收集过滤液和滤渣;对于收集的过滤液,即为贯叶连翘微波提取液,用作下一步处理;对于收集的滤渣,即为贯叶连翘微波提取物,用作下一步处理; (4)制备贯叶连翘提取液 第(3)步完成后,按照贯叶连翘粉末的质量:体积分数为70~95%乙醇的体积比为1 g:5~10 mL的比例,将70~95%乙醇加入到贯叶连翘微波提取物中,在搅拌速度为150~200r/min、温度为80~90℃的条件下提取2~3h,然后趁热泵入真空过滤机中,进行真空过滤,分别收集过滤液和滤渣;对于收集的过滤液,与第(3)步得到的贯叶连翘微波提取液合并,即为贯叶连翘提取液,用作下一步处理; (5)制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物 第(4)步完成后,将贯叶连翘提取液泵入反渗透浓缩器中,在0.15~0.25MPa下,进行反渗透浓缩,直到反渗透截留液的体积减少至原体积的10~15%为止,分别收集反渗透透过液和反渗透截留液;对于收集的反渗透截留液,置于-16~-18℃下,预冻2~3h,然后再放置于冷冻干燥机中,在5~7Pa、-50~-60℃下,进行冷冻干燥24~30h,就制备得到富含金丝桃素的贯叶连翘提取物;提取物中金丝桃素含量为1.2~1.4%,总金丝桃素含量为0.88~1.01%,贯叶连翘提取物提取率为82.1~84.4%,金丝桃素提取率为87.2~89.7%。

    说明书


    一种制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物的方法
    技术领域


    本发明属于生产贯叶连翘提取物的技术领域,特别涉及一种制备富含金丝桃素的
    贯叶连翘提取物的方法。


    背景技术


    贯叶连翘(
    Hypericum perforatumL.),又名贯叶金丝桃、千层楼、上天梯、赶山草
    鞭、小过路黄和圣约翰草(St. John’s wort)等,属藤黄科金丝桃属多年生草本植物,其全
    草或带根的全草具有抗抑郁、抗菌、抗病毒和抗肿瘤等较为广泛的药理作用,目前它已经成
    为世界上最为畅销的植物性药材之一。


    传统中医认为贯叶连翘是清烦心明视力、调经络活气血、解百毒消炎症的良药。现
    代大量中药药理学实验证明,它具有收缩血管进而升高血压、利胆通便、抗菌消炎等作用,
    被用来治疗黄疸、尿路感染。贯叶连翘中含有多种生物活性物质,其植物提取物已被美国
    FDA批准为食品添加剂,并收入德国、英国、法国等国药典。金丝桃素(C
    30H
    16O
    8,hypericin)属
    于二蒽酮类化合物,被认为是贯叶连翘提取物中最具有生物活性的物质,具有抗病毒、抗抑
    郁等作用。国内外已完成了金丝桃素抗艾滋病的Ⅱ期临床试验,治疗恶性神经胶质瘤的临
    床研究也在进行之中。现代人们对天然药物和天然保健品的需求日益增长,以及人民生活
    水平的提高和人民对贯叶连翘认识的加强,推动了对贯叶连翘系列产品的需求。


    现有生产贯叶连翘提取物的方法,如2016年5月25日公布的公布号为CN
    105596387A“一种贯叶连翘提取物的生产方法”的发明专利,该专利公开的方法是:以贯叶
    连翘地上部分为原料,经原料预处理、碱性溶剂与提取剂提取、乙酸乙酯萃取、真空浓缩、喷
    雾干燥等步骤得到贯叶连翘提取物。该方法存在的缺点有:①使用了大量的碱性溶剂提取
    与有机溶剂萃取,生产周期长、污染严重,增加了生产成本;②采用传统提取法生产,工艺提
    取率低,造成贯叶连翘资源的严重浪费;③该生产过程中的提取、浓缩等加热工艺操作时间
    较长,导致部分活性成分长时间受热氧化变质,产品品质低。


    发明内容


    本发明的目的是针对现有生产贯叶连翘提取物方法的不足之处,提供一种制备富
    含金丝桃素的贯叶连翘提取物的方法,该方法具有生产工艺简单、稳定、易于放大,产品收
    率高,设备投资成本低,生产成本低,贯叶连翘资源综合利用率高等特点。采用本发明方法
    制备出的贯叶连翘提取物具有金丝桃素含量高、性能稳定等特点。


    本发明的机理是:贯叶连翘中大多生物活性成分存在于细胞内,少量存在于细胞
    间隙。植物细胞壁主要是由纤维素、半纤维素、果胶质等大分子组成,植物中小分子化学成
    分渗透到溶液中,必须穿透植物细胞壁的障碍。新鲜贯叶连翘经干燥后,组织内的水分蒸
    发,细胞逐渐萎缩。这时,在细胞液泡中溶解的活性成分等物质呈结晶或无定形状态沉积于
    细胞内,使细胞形成空腔,细胞质膜的半透性丧失,导致了细胞内的成分溶出障碍。采用生
    物酶解技术,在提取中加入生物酶(木聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、蛋白酶等),从而降解植物
    细胞壁以及细胞间质当中的成分,破坏细胞渗透阻力,减小成分扩散阻力,不仅增加成分的
    提取率,还可以缩短提取时间,这对于降低生产能耗和药材成本是非常有利的。经酶解后,
    继续使用微波技术处理,加速细胞壁破裂或溶解,达到增强提取效率和收率的目的。将酶解
    与微波技术耦合,在显著提高提取率的同时,可降低后续提取温度、提取时间,使提取物中
    的金丝桃素得以溶出而不氧化,保持其药用功效。


    本发明的目的是这样实现的:一种制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物的方法,
    以贯叶连翘全草干药材为原料,经酶活化、酶解、微波处理、乙醇提取、反渗透、冷冻干燥等
    生产得到富含金丝桃素的贯叶连翘提取物。其具体的方法步骤如下:


    (1)制备酶活化液


    首先按照市售木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶的质量(g):纯化水的体积(mL)比为1:40
    ~60的比例,将木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶分散到纯化水中,再放入超声波处理器中,控
    制温度为35~45℃,进行超声处理10~15min,用于对木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶的活化
    与分散。超声完成后,收集混合液,即为酶活化液,用作下一步处理。


    (2)制备贯叶连翘酶解提取物


    第(1)步完成后,以市售贯叶连翘全草干药材为原料,先经粉碎机粉碎至40~80目,收
    集贯叶连翘粉末。再按照贯叶连翘粉末的质量(g):纯化水的体积(mL)比为1:6~10的比例,
    将贯叶连翘粉末分散于纯化水中,完全浸透,在温度为50~60℃下,浸泡30~45min,再用
    0.1~0.5mol/L的盐酸溶液调节pH至4.4~4.8。最后再按照贯叶连翘粉末的质量(g):酶活
    化液的体积(mL)比为1:1~3的比例,加入酶活化液,在温度为40~50℃下酶解处理5~7h,
    酶解结束后在温度为80~90℃下,酶灭活5~10min,收集混合物,即为贯叶连翘酶解提取
    物,用作下一步处理。


    (3)制备贯叶连翘微波提取物


    第(2)步完成后,先将第(2)步收集得到的贯叶连翘酶解提取物置于微波反应器中,在
    温度为40~50℃、功率为300~400W的条件下,微波提取6~12min,再泵入真空过滤机中,进
    行真空过滤,分别收集过滤液和滤渣。对于收集的过滤液,即为贯叶连翘微波提取液,用作
    下一步处理;对于收集的滤渣,即为贯叶连翘微波提取物,用作下一步处理。


    (4)制备贯叶连翘提取液


    第(3)步完成后,按照贯叶连翘粉末的质量(g):体积分数为70~95%乙醇的体积(mL)比
    为1:5~10的比例,将70~95%乙醇加入到贯叶连翘微波提取物中,在搅拌速度为150~
    200r/min、温度为80~90℃的条件下提取2~3h,然后趁热泵入真空过滤机中,进行真空过
    滤,分别收集过滤液和滤渣。对于收集的滤渣,可用于制备天然复合絮凝剂或制备提高动物
    免疫力的饲料添加剂;对于收集的过滤液,与第(3)步得到的贯叶连翘微波提取液合并,即
    为贯叶连翘提取液,用作下一步处理。


    (5)制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物


    第(4)步完成后,将贯叶连翘提取液泵入反渗透浓缩器中,在0.15~0.25MPa下,进行反
    渗透浓缩,直到反渗透截留液的体积减少至原体积的10~15%为止,分别收集反渗透透过液
    和反渗透截留液。对于收集的反渗透透过液为乙醇和纯化水的混合液,经减压蒸馏回收乙
    醇,调配后可继续使用;对于收集的反渗透截留液,置于-16~-18℃下,预冻2~3h,然后再
    放置于冷冻干燥机中,在5~7Pa、-50~-60℃下,进行冷冻干燥24~30h,就制备得到富含金
    丝桃素的贯叶连翘提取物;提取物中金丝桃素含量为1.2~1.4%,总金丝桃素含量为0.88~
    1.01%,贯叶连翘提取物提取率为82.1~84.4%,金丝桃素提取率为87.2~89.7%。


    本发明采用上述技术方案后,主要有以下效果:


    1、本发明在生产过程中,方法步骤简单、产品收率高、资源综合利用率高,非常便于工
    业化生产。


    2、本发明在生产过程中,采用酶解技术,大大提高了金丝桃素及其它有效成分的
    溶出率,同时提高提取率,缩短提取时间,进而提高产量,节约成本。


    3、本发明中酶解与微波技术耦合,集成解决了传统植提技术中强酸(碱)、高温
    (压)导致的高能耗、高污染等问题,而且改善了活性成分长时间受热导致的氧化变质,为构
    建清洁、稳定、高品质天然产物提取生产提供技术支撑。


    4、本发明在生产过程中避免使用有毒有害溶剂,使用乙醇、纯化水等无毒物质,且
    回收循环利用。


    5、本发明得到的贯叶连翘提取物中金丝桃素含量高、稳定性较好。


    采用本发明方法制备的产品,可广泛应用于医药、保健品、食品和日化等行业。


    具体实施方式


    下面结合具体实施方式,进一步说明本发明。


    实施例1


    一种制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物的方法,具体方法步骤如下:


    (1)制备酶活化液


    首先按照市售木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶的质量(g):纯化水的体积(mL)比为1:40
    的比例,将木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶分散到纯化水中,再放入超声波处理器中,控制温
    度为35℃,进行超声处理10min,用于对木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶的活化与分散。超声
    完成后,收集混合液,即为酶活化液,用作下一步处理。


    (2)制备贯叶连翘酶解提取物


    第(1)步完成后,以市售贯叶连翘全草干药材为原料,先经粉碎机粉碎至40目,收集贯
    叶连翘粉末。再按照贯叶连翘粉末的质量(g):纯化水的体积(mL)比为1:6的比例,将贯叶连
    翘粉末分散于纯化水中,完全浸透,在温度为50℃下,浸泡30min,再用0.1mol/L的盐酸溶液
    调节pH至4.4。最后再按照贯叶连翘粉末的质量(g):酶活化液的体积(mL)比为1:1的比例,
    加入酶活化液,在温度为40℃下酶解处理5h,酶解结束后在温度为80℃下,酶灭活5min,收
    集混合物,即为贯叶连翘酶解提取物,用作下一步处理。


    (3)制备贯叶连翘微波提取物


    第(2)步完成后,先将第(2)步收集得到的贯叶连翘酶解提取物置于微波反应器中,在
    温度为40℃、功率为300W的条件下,微波提取6min,再泵入真空过滤机中,进行真空过滤,分
    别收集过滤液和滤渣。对于收集的过滤液,即为贯叶连翘微波提取液,用作下一步处理;对
    于收集的滤渣,即为贯叶连翘微波提取物,用作下一步处理。


    (4)制备贯叶连翘提取液


    第(3)步完成后,按照贯叶连翘粉末的质量(g):体积分数为70%乙醇的体积(mL)比为1:
    5的比例,将70%乙醇加入到贯叶连翘微波提取物中,在搅拌速度为150r/min、温度为80℃的
    条件下提取2h,然后趁热泵入真空过滤机中,进行真空过滤,分别收集过滤液和滤渣。对于
    收集的滤渣,可用于制备天然复合絮凝剂或制备提高动物免疫力的饲料添加剂;对于收集
    的过滤液,与第(3)步得到的贯叶连翘微波提取液合并,即为贯叶连翘提取液,用作下一步
    处理。


    (5)制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物


    第(4)步完成后,将贯叶连翘提取液泵入反渗透浓缩器中,在0.15MPa下,进行反渗透浓
    缩,直到反渗透截留液的体积减少至原体积的10%为止,分别收集反渗透透过液和反渗透截
    留液。对于收集的反渗透透过液为乙醇和纯化水的混合液,经减压蒸馏回收乙醇,调配后可
    继续使用;对于收集的反渗透截留液,置于-16℃下,预冻2h,然后再放置于冷冻干燥机中,
    在5Pa、-50℃下,进行冷冻干燥24h,就制备得到富含金丝桃素的贯叶连翘提取物;提取物中
    金丝桃素含量为1.2%,总金丝桃素含量为0.88%,贯叶连翘提取物提取率为82.1%,金丝桃素
    提取率为87.2%。


    实施例2


    一种制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物的方法,具体方法步骤如下:


    (1)制备酶活化液


    首先按照市售木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶的质量(g):纯化水的体积(mL)比为1:50
    的比例,将木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶分散到纯化水中,再放入超声波处理器中,控制温
    度为40℃,进行超声处理12min,用于对木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶的活化与分散。超声
    完成后,收集混合液,即为酶活化液,用作下一步处理。


    (2)制备贯叶连翘酶解提取物


    第(1)步完成后,以市售贯叶连翘全草干药材为原料,先经粉碎机粉碎至60目,收集贯
    叶连翘粉末。再按照贯叶连翘粉末的质量(g):纯化水的体积(mL)比为1:8的比例,将贯叶连
    翘粉末分散于纯化水中,完全浸透,在温度为55℃下,浸泡40min,再用0.3mol/L的盐酸溶液
    调节pH至4.6。最后再按照贯叶连翘粉末的质量(g):酶活化液的体积(mL)比为1:2的比例,
    加入酶活化液,在温度为45℃下酶解处理6h,酶解结束后在温度为85℃下,酶灭活8min,收
    集混合物,即为贯叶连翘酶解提取物,用作下一步处理。


    (3)制备贯叶连翘微波提取物


    第(2)步完成后,先将第(2)步收集得到的贯叶连翘酶解提取物置于微波反应器中,在
    温度为45℃、功率为350W的条件下,微波提取10min,再泵入真空过滤机中,进行真空过滤,
    分别收集过滤液和滤渣。对于收集的过滤液,即为贯叶连翘微波提取液,用作下一步处理;
    对于收集的滤渣,即为贯叶连翘微波提取物,用作下一步处理。


    (4)制备贯叶连翘提取液


    第(3)步完成后,按照贯叶连翘粉末的质量(g):体积分数为85%乙醇的体积(mL)比为1:
    8的比例,将85%乙醇加入到贯叶连翘微波提取物中,在搅拌速度为180r/min、温度为85℃的
    条件下提取2.5h,然后趁热泵入真空过滤机中,进行真空过滤,分别收集过滤液和滤渣。对
    于收集的滤渣,可用于制备天然复合絮凝剂或制备提高动物免疫力的饲料添加剂;对于收
    集的过滤液,与第(3)步得到的贯叶连翘微波提取液合并,即为贯叶连翘提取液,用作下一
    步处理。


    (5)制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物


    第(4)步完成后,将贯叶连翘提取液泵入反渗透浓缩器中,在0.20MPa下,进行反渗透浓
    缩,直到反渗透截留液的体积减少至原体积的12%为止,分别收集反渗透透过液和反渗透截
    留液。对于收集的反渗透透过液为乙醇和纯化水的混合液,经减压蒸馏回收乙醇,调配后可
    继续使用;对于收集的反渗透截留液,置于-17℃下,预冻2.5h,然后再放置于冷冻干燥机
    中,在6Pa、-55℃下,进行冷冻干燥28h,就制备得到富含金丝桃素的贯叶连翘提取物;提取
    物中金丝桃素含量为1.3%,总金丝桃素含量为0.96%,贯叶连翘提取物提取率为83.5%,金丝
    桃素提取率为88.5%。


    实施例3


    一种制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物的方法,具体方法步骤如下:


    (1)制备酶活化液


    首先按照市售木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶的质量(g):纯化水的体积(mL)比为1:60
    的比例,将木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶分散到纯化水中,再放入超声波处理器中,控制温
    度为45℃,进行超声处理15min,用于对木聚糖酶或果胶酶或纤维素酶的活化与分散。超声
    完成后,收集混合液,即为酶活化液,用作下一步处理。


    (2)制备贯叶连翘酶解提取物


    第(1)步完成后,以市售贯叶连翘全草干药材为原料,先经粉碎机粉碎至80目,收集贯
    叶连翘粉末。再按照贯叶连翘粉末的质量(g):纯化水的体积(mL)比为1:10的比例,将贯叶
    连翘粉末分散于纯化水中,完全浸透,在温度为60℃下,浸泡45min,再用0.5mol/L的盐酸溶
    液调节pH至4.8。最后再按照贯叶连翘粉末的质量(g):酶活化液的体积(mL)比为1:3的比
    例,加入酶活化液,在温度为50℃下酶解处理7h,酶解结束后在温度为90℃下,酶灭活
    10min,收集混合物,即为贯叶连翘酶解提取物,用作下一步处理。


    (3)制备贯叶连翘微波提取物


    第(2)步完成后,先将第(2)步收集得到的贯叶连翘酶解提取物置于微波反应器中,在
    温度为50℃、功率为400W的条件下,微波提取12min,再泵入真空过滤机中,进行真空过滤,
    分别收集过滤液和滤渣。对于收集的过滤液,即为贯叶连翘微波提取液,用作下一步处理;
    对于收集的滤渣,即为贯叶连翘微波提取物,用作下一步处理。


    (4)制备贯叶连翘提取液


    第(3)步完成后,按照贯叶连翘粉末的质量(g):体积分数为95%乙醇的体积(mL)比为1:
    10的比例,将95%乙醇加入到贯叶连翘微波提取物中,在搅拌速度为200r/min、温度为90℃
    的条件下提取3h,然后趁热泵入真空过滤机中,进行真空过滤,分别收集过滤液和滤渣。对
    于收集的滤渣,可用于制备天然复合絮凝剂或制备提高动物免疫力的饲料添加剂;对于收
    集的过滤液,与第(3)步得到的贯叶连翘微波提取液合并,即为贯叶连翘提取液,用作下一
    步处理。


    (5)制备富含金丝桃素的贯叶连翘提取物


    第(4)步完成后,将贯叶连翘提取液泵入反渗透浓缩器中,在0.25MPa下,进行反渗透浓
    缩,直到反渗透截留液的体积减少至原体积的15%为止,分别收集反渗透透过液和反渗透截
    留液。对于收集的反渗透透过液为乙醇和纯化水的混合液,经减压蒸馏回收乙醇,调配后可
    继续使用;对于收集的反渗透截留液,置于-18℃下,预冻3h,然后再放置于冷冻干燥机中,
    在7Pa、-60℃下,进行冷冻干燥30h,就制备得到富含金丝桃素的贯叶连翘提取物;提取物中
    金丝桃素含量为1.4%,总金丝桃素含量为1.01%,贯叶连翘提取物提取率为84.4%,金丝桃素
    提取率为89.7%。


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