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    重庆时时彩神圣胆: 一种检测土壤中ΒD葡萄糖苷酶活性的分析方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201910035291

    申请日:

    20190108

    公开号:

    CN109557065A

    公开日:

    20190402

    当前法律状态:

    实质审查的生效

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效
    IPC分类号: G01N21/64 主分类号: G01N21/64
    申请人: 吉林省农业科学院
    发明人: 孟凡钢;张伟;闫晓艳;赵婧;邱强;张鸣浩;于德斌;饶德民;闫日红;丛博韬;颜秀娟;李明姝;王新风
    地址: 130033 吉林省长春市生态大街1363号
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201910035291

    授权公告号:

    法律状态公告日:

    20190426

    法律状态类型:

    实质审查的生效

    摘要

    本发明公开了一种检测土壤中β?D?葡萄糖苷酶活性的分析方法,属于酶活性检测技术领域。该装置包括如下步骤:酶活性=[(RS?BU)*(SA?SC)/(QS?SC)]?(NC?BU)]*b*2*3000/(0.3*W*200),其中,SC为上清液+50μl的醋酸缓冲液所测荧光强度值,QS为上清液+50μl的标样液所测荧光强度值,SA为上清液+50μl的4?甲基伞形酮?β?D?葡萄糖苷底物溶液所测荧光强度值,BU为200μl的醋酸缓冲液+50μl醋酸缓冲液所测荧光强度值,RS为200μl的醋酸缓冲液+50μl的标准品溶液所测荧光强度值,NC为200μl的醋酸缓冲液+50μl的4?甲基伞形酮?β?D?葡萄糖苷底物溶液所测荧光强度值。本发明可以减小背景值,能排除样品与荧光基团互作的背景值,排除缓冲液对标准品的背景值,提高测量结果的准确性,样品及药品用量少。

    权利要求书

    1.一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法,其特征在于,包括如下步骤: 配制50mM醋酸缓冲液,取4.1g醋酸钠、161μl冰醋酸和无菌去离子水水定容至1000ml并调节PH至5.5; 配制200μM的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液,称取6.762mg的4-甲基伞形酮和30μl二甲基亚砜溶解溶解,加无菌去离子水稀释定容至100ml; 配制10μM标准品溶液,称取1.762mg的4-甲基伞形酮和30μl二甲基亚砜溶解,再定容至1000ml,制得10μM标准品溶液; 将标准品溶液用蒸馏水分别稀释成浓度为0、0.025μM、0.05μM、0.125μM、0.25.0μM、0.5μM的标准溶液,制得标样液,分别用移液枪吸取50μl至96孔板中,后分别加入200μl醋酸缓冲液,再分别加入20μl的1M NaOH溶液,然后进行荧光检测,如此重复制作3条标准曲线; 称取2份0.3g的土壤鲜样于5ml离心管中,其中1份用于烘干测土壤含水量W,另1份加入3mL醋酸缓冲液均质混匀,在涡旋仪上高速震荡5分钟,再4℃低温4000R离心5分钟; 吸取3份容量为200μl的经离心后的土壤鲜样与醋酸缓冲液混合物的上清液至96黑孔板中,其中一份再加50μl醋酸缓冲液,一份加50μl的10μM的标样液,另一份加50μl的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液; 在37℃培养2h后向黑孔板中每孔加入20μl的1M的NaOH溶液,终止反应; 在荧光检测仪读板温度37℃、酶标板震荡时间1min、激发波长350nm、发射波长450nm的条件下,测定每孔的荧光强度值; 以标样液浓度和测定的吸光值A制作标准曲线,得到斜率b; 通过如下公式计算得酶活性: 酶活性=[(RS-BU)*(SA-SC)/(QS-SC)]-(NC-BU)]*b*2*3000/(0.3*W*200), 其中,SC为上清液+50μl的醋酸缓冲液所测荧光强度值,QS为上清液+50μl的标样液所测荧光强度值,SA为上清液+50μl的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液所测荧光强度值,BU为200μl的醋酸缓冲液+50μl醋酸缓冲液所测荧光强度值,RS为200μl的醋酸缓冲液+50μl的标准品溶液所测荧光强度值,NC为200μl的醋酸缓冲液+50μl的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷底物溶液所测荧光强度值。 2.如权利要求1所述的一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法,其特征在于,1M的NaOH溶液通过20gNaOH+蒸馏水定容至50ml制得。

    关 键 词:
    一种 检测 土壤 葡萄 糖苷酶 活性 分析 方法
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