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    重庆时时彩以小搏大: 大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201910015538

    申请日:

    20190108

    公开号:

    CN109628392A

    公开日:

    20190416

    当前法律状态:

    公开

    有效性:

    审中

    法律详情: 公开
    IPC分类号: C12N5/0775 主分类号: C12N5/0775
    申请人: 深圳市第二人民医院
    发明人: 段莉;王大平;梁宇杰;徐晓;李兴福;欧阳侃
    地址: 518000 广东省深圳市福田区华富街道笋岗西路3002号
    优先权:
    专利代理机构: 11531 代理人: 马金华
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201910015538

    授权公告号:

    法律状态公告日:

    20190416

    法律状态类型:

    公开

    摘要

    本发明属于生物技术领域,公开了大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体,该方法包括以下步骤:S1:获取细胞沉淀,首先抽取病人膝关节积液,离心获得细胞沉淀,留取备用;S2:培养间充质干细胞,在符合GMP的要求下利用无血清培养基对人关节来源的间充质干细胞进行培养,留取备用;S3:生物反应器的预处理;S4:接种培养间充质干细胞;S5:培养获得外泌体。该发明所制备的外泌体具有较好的稳定性、生物相容性、生物稳定性,且制作步骤简单,降低了相应的生产成本,可大规模进行生产,直接提取细胞沉淀中的间充质干细胞,然后进行培养,培养完成后将上清液高速离心后即可获得所需的外泌体,适合推广。

    权利要求书

    1.大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体,其特征在于:该方法包括以下步骤: S1:获取细胞沉淀,首先抽取病人膝关节积液,离心获得细胞沉淀,留取备用; S2:培养间充质干细胞,在符合GMP的要求下利用无血清培养基对人关节来源的间充质干细胞进行培养,留取备用; S3:生物反应器的预处理,将生物反应器清洗干净,然后风干,留取备用; S4:接种培养间充质干细胞,将人关节液来源的间充质干细胞接种到微载体上,进行三维(3D)细胞培养,生物反应器的外部培养瓶不间断地提供细胞养分,细胞通过分子量截留膜和微载体保留于细胞生物反应室中; S5:培养获得外泌体,对S4中得到的上清液进行差异超速离心分离获取外泌体,并进行洗涤步骤从培养上清液中富集纯净的外泌体。 2.根据权利要求1所述的大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体,其特征在于:所述步骤S2中,无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊椎动物细胞以制备单克隆抗体,病毒抗原和重组蛋白等。 3.根据权利要求1所述的大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体,其特征在于:所述步骤S3中,生物反应器是指利用自然存在的微生物或具有特殊降解能力的微生物接种至液相或固相的反应系统。 4.根据权利要求1所述的大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体,其特征在于:所述步骤S5中,对S4中得到的上清液进行差异超速离心处理所使用的是离心机。 5.根据权利要求4所述的大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体,其特征在于:所述离心机的类型分为:超高速离心机。 6.根据权利要求1所述的大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体,其特征在于:所述步骤S2中,间充质干细胞从细胞沉淀中提取。 7.根据权利要求1所述的大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体,其特征在于:所述步骤S3中,生物反应器清洗10-15分钟即可。

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