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    重庆时时彩后3组6玩法: 基于超滤液相色谱质谱快速筛选药物活性成分的方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201910016264

    申请日:

    20190108

    公开号:

    CN109596749A

    公开日:

    20190409

    当前法律状态:

    公开

    有效性:

    审中

    法律详情: 公开
    IPC分类号: G01N30/02;G01N30/06 主分类号: G01N30/02;G01N30/06
    申请人: 西安科技大学
    发明人: 陈福欣;严贝贝;陈苏英;杨倩倩;白巧秀;杨雅雯;爱森·瓦卡斯;周安宁;龚频
    地址: 710054 陕西省西安市雁塔中路58号
    优先权:
    专利代理机构: 61200 代理人: 范巍
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201910016264

    授权公告号:

    法律状态公告日:

    20190409

    法律状态类型:

    公开

    摘要

    本发明公开了一种基于超滤?液相色谱?质谱快速筛选药物活性成分的方法:将中药提取物或其他来源的小分子混合物溶解于缓冲溶液中,加入酶共孵育;采用超速离心浓缩管过滤该溶液,反复多次,合并浓缩液,用缓冲溶液定容;采用液相色谱?质谱联用技术分析与酶共孵育后色谱峰的变化。本发明实验了利用超滤?UPLC?MS对中药降糖活性成分进行了筛选,实验结果表明该方法可以对复杂成分中天然来源的具有活性的小分子化合物进行初步的快速筛选。本发明具有操作简单,快速批量筛选,实验重现性好,实验数据直观可靠等特点,为中药或复方的药效物质基础研究提供新的思路和方法。

    权利要求书

    1.一种基于超滤-液相色谱-质谱快速筛选药物活性成分的方法,其特征在于:包括以下步骤: 1)将多成分样品用缓冲溶液溶解后分为相同的两份,以其中一份为结合前样品,向另一份中加入拟筛选药物靶点所对应的酶,得结合样品; 2)通过孵育使得结合样品中能够与所述酶稳定结合的化合物部分或全部由游离态转变为结合态,得孵育液;将孵育液超滤并收集滤液,将滤液用所述缓冲溶液定容,得分析样品; 3)将结合前样品按照与步骤2)相同的孵育、超滤和定容过程进行处理,得到对照样品,对分析样品和对照样品分别采用相同条件的液相色谱-质谱联用技术进行分析; 4)比较分析样品和对照样品的液相色谱-质谱分析结果中色谱峰的变化,将发生变化的色谱峰所对应的化合物作为初步筛选得到的与所述靶点对应的候选药物活性成分或先导化合物。 2.根据权利要求1所述一种基于超滤-液相色谱-质谱快速筛选药物活性成分的方法,其特征在于:所述多成分样品选自中药提取物、中药制剂、经分离手段得到的化合物或化合物的混合物;该样品在用缓冲溶液溶解时所需用量≥0.01mg。 3.根据权利要求1所述一种基于超滤-液相色谱-质谱快速筛选药物活性成分的方法,其特征在于:所述酶选自糖尿病靶点的酶。 4.根据权利要求1所述一种基于超滤-液相色谱-质谱快速筛选药物活性成分的方法,其特征在于:所述孵育的条件为:时间为5~60min,温度为25~40℃。 5.根据权利要求1所述一种基于超滤-液相色谱-质谱快速筛选药物活性成分的方法,其特征在于:所述超滤采用超滤离心管并结合离心分离实现对孵育液的过滤,若多次离心,则合并滤液,并且,进行下一次离心前先进行超声和静置处理。 6.根据权利要求5所述一种基于超滤-液相色谱-质谱快速筛选药物活性成分的方法,其特征在于:所述超滤离心管采用低蛋白质结合率的超滤膜,超滤离心管的分子截留量≥3000Da,离心分离采用的离心力≥8000g。 7.根据权利要求1所述一种基于超滤-液相色谱-质谱快速筛选药物活性成分的方法,其特征在于:所述缓冲溶液选自pH为4~10的挥发性盐类缓冲体系。 8.根据权利要求1所述一种基于超滤-液相色谱-质谱快速筛选药物活性成分的方法,其特征在于:所述定容的体积为0.1~10mL。 9.根据权利要求1所述一种基于超滤-液相色谱-质谱快速筛选药物活性成分的方法,其特征在于:所述液相色谱-质谱联用技术采用高效液相色谱或超高效液相色谱与质谱的联用设备。 10.根据权利要求1所述一种基于超滤-液相色谱-质谱快速筛选药物活性成分的方法,其特征在于:所述色谱峰的变化包括色谱峰组分的变化和/或相同保留时间色谱峰的强度变化。

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