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    重庆时时彩后一要怎么算中奖号码: 快速鉴定兰花细菌性褐腐病菌的特异性引物、试剂盒和检测方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201910019193

    申请日:

    20190109

    公开号:

    CN109517916A

    公开日:

    20190326

    当前法律状态:

    实质审查的生效

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效
    IPC分类号: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11 主分类号: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11
    申请人: 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
    发明人: 厉艳;魏晓棠;张京宣;静平;房保海;邵秀玲;封立平
    地址: 266002 山东省青岛市市南区瞿塘峡路70号
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201910019193

    授权公告号:

    法律状态公告日:

    20190419

    法律状态类型:

    实质审查的生效

    摘要

    本发明公开了一种用于快速鉴定兰花细菌性褐腐病菌的特异性引物、试剂盒和检测方法。引物序列如下:EcUP:5\u0027?TCAACGCCAAGCCGATTTCT?3\u0027;EcNP:5\u0027?ACGAATGAACCGTCGTCGGC?3\u0027。本发明建立了一种特异性检测兰花细菌性褐腐病菌的检疫鉴定方法,为检疫兰花细菌性褐腐病菌建立标准和依据,有助于加强口岸对兰花细菌性褐腐病菌的寄主植物检验检疫,杜绝兰花细菌性褐腐病菌通过口岸传入我国,避免其在我国境内扩散。本发明的建立的方法比传统的鉴定方法更快速,特异性更强,灵敏度更高,引物鉴定的DNA灵敏度约为0.01ng/μl。

    权利要求书

    1.快速鉴定兰花细菌性褐腐病菌的特异性引物,其特征在于,引物序列如下: EcUP:5\u0027- TCAACGCCAAGCCGATTTCT -3\u0027; EcNP:5\u0027- ACGAATGAACCGTCGTCGGC -3\u0027。 2.快速鉴定兰花细菌性褐腐病菌的试剂盒,其特征在于,包括P CR扩增反应液、阳性对照D N A两部分: P C R扩增反应液总体积为25μL,其中含:2μL的样品DNA 10μg/mL-100μg/mL,10 μM上EcNP各1 μL,5U/μL Taq DNA聚合酶0.5μl,10μmol/L dNTP 2μL,10×PCR缓冲液2.5μL,水补足至总体积25μL; 涉及的PCR扩增检测用的引物序列如下: EcUP:5\u0027- TCAACGCCAAGCCGATTTCT -3\u0027; EcNP:5\u0027- ACGAATGAACCGTCGTCGGC -3\u0027; 阳性对照DNA为含有兰花细菌性褐腐病菌的DNA提取液。 3.快速检测兰花细菌性褐腐病菌的方法,其特征在于,依次包括下列步骤: (1)待检样品DNA的提取 采用改良的CTAB法或适用的商品化试剂盒进行DNA提??; (2)PCR扩增 A. 采用25 μL PCR反应体系: PCR Premix(2X) 12.5 μL,H2O 8.5 μL,10 μM引物各1 μL,DNA模板2.0 μL; PCR Premix里面包括的成分:0.1U Taq polymerase/μL,500μM DNTP each,20mM Tris-HCL(PH8.3) ,100Mm KCl,3mMgCl; B. 将PCR反应管放入PCR仪,按下述反应条件完成PCR扩增: PCR反应条件:98℃,2min;(变性:98℃,10s;退火:59.4℃,10s;延伸:72℃,10s)35循环;延伸:72℃,3min。

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