• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 7
    • 下载费用:20 金币  

    重庆时时彩骗局时时彩走势图: 一种产谷氨酸消旋酶的重组菌及其构建方法和应用.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201910021544

    申请日:

    20190110

    公开号:

    CN109576200A

    公开日:

    20190405

    当前法律状态:

    公开

    有效性:

    审中

    法律详情: 公开
    IPC分类号: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/61;C12P13/14;C12R1/19 主分类号: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/61;C12P13/14;C12R1/19
    申请人: 鲁东大学
    发明人: 冯志彬;张娟
    地址: 264025 山东省烟台市芝罘区红旗中路186号
    优先权:
    专利代理机构: 11427 代理人: 彭友谊
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201910021544

    授权公告号:

    法律状态公告日:

    20190405

    法律状态类型:

    公开

    摘要

    本发明公开了一种产谷氨酸消旋酶的重组菌及其构建方法和应用,属于生物技术领域,所述重组菌包含藤黄轮丝链霉菌HY61的谷氨酸消旋酶基因MurI,载体为pET32a,宿主菌为E.coliBL21(DE3),进而利用重组菌发酵的谷氨酸消旋酶催化L?谷氨酸消旋生产DL?谷氨酸,反应完成后,经过滤、脱色、等电结晶、抽虑、干燥得DL?谷氨酸产品。本发明生产方法原料易得,生产工艺简单,反应条件温和,降低了DL?谷氨酸的生产成本。

    权利要求书

    1.一种产谷氨酸消旋酶的重组菌,其特征在于所述重组菌包含藤黄轮丝链霉菌HY61的谷氨酸消旋酶基因MurI,载体为pET32a,宿主菌为E.coli BL21(DE3)。 2.权利要求1所述重组菌的构建方法,其特征在于所述方法包括如下步骤: (1)克隆藤黄轮丝链霉菌HY61的谷氨酸消旋酶基因MurI,其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示; (2)将SEQ ID No.1所示核苷酸序列与载体pET32a双酶切并连接,筛选阳性克隆得到重组载体pET32a-MurI; (3)将重组载体pET32a-MurI转化到宿主菌E.coli BL21(DE3)中,得到产谷氨酸消旋酶的重组菌E.coli BL21(DE3)/pET32a-MurI。 3.利用权利要求1或2所述重组菌发酵生产谷氨酸消旋酶的方法,所述方法具体步骤如下: (1)将构建的重组菌接入LB斜面培养基,37℃培养14~24h; (2)将斜面培养基培养的重组菌接种于LB液体种子培养基,37℃、200r/min振荡培养6~12h; (3)发酵罐中装入发酵培养基,种子液以体积比5~10%种量接入发酵培养基,初始转速200r/min,初始通气流量为1.5L/min,维持溶氧值在20%以上,调节pH值稳定在7.0,37℃培养6~10h后降温至24~30℃表达;发酵过程中维持葡萄糖浓度在3~5g/L;发酵结束后8000r/min、4℃离心10min收集菌体,无菌生理盐水洗涤菌体两次。 4.利用权利要求3所述步骤生产的谷氨酸消旋酶转化L-谷氨酸生产DL-谷氨酸的方法,具体步骤如下:将菌体投入转化液中进行转化,其转化条件为:配制浓度为100~200g/L L-谷氨酸溶液,调节pH为7.0,加入湿菌体至湿菌体的终浓度为L-谷氨酸溶液浓度的1/20~1/10,湿菌体的终浓度单位为g/L,温度30~40℃,在发酵罐上转化生产DL-谷氨酸,发酵过程中不断取样测定反应体系的旋光度,至旋光度为零时反应结束;发酵液用陶瓷膜过滤去除菌体细胞,然后用超滤膜过滤去除蛋白,升温至50~70℃,加入10g/L的粉末活性炭,60~80r/min搅拌脱色20~40min,过滤去除碳粉,使用硫酸调节pH至3.0~3.2,并降温至10~15℃结晶,抽滤并烘干晶体称重,并测定晶体的旋光度。 5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于所述的LB斜面培养基的成分及终浓度:酵母浸粉5g/L,蛋白胨10g/L,NaCl 5g/L,氨苄西林100mg/L,琼脂20g/L;LB斜面培养基制备方法:调节斜面培养基的pH7.0~7.2,然后121℃高压蒸汽灭菌20min。 6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于所述的LB液体种子培养基的成分及终浓度:酵母浸粉5g/L,蛋白胨10g/L,NaCl 5g/L,氨苄西林100mg/L;制备方法:调节斜面培养基的pH7.0~7.2,121℃高压蒸汽灭菌20min。 7.根据权利要求3所述的方法,其特征在于所述的发酵培养基的成分及终浓度:葡萄糖20g/L,蛋白胨10g/L,酵母浸粉12g/L,MgSO4 5g/L,KH2PO4 10g/L,(NH4)2SO4 5g/L,丁二酸2g/L;发酵培养基的制备方法:调节斜面培养基的pH7.2~7.4,121℃高压蒸汽灭菌20min。

    关 键 词:
    一种 谷氨酸 消旋酶 重组 及其 构建 方法 应用
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    0条评论

    还可以输入200字符

    暂无评论,赶快抢占沙发吧。

    关于本文
    本文标题:一种产谷氨酸消旋酶的重组菌及其构建方法和应用.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-6153753.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03