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    重庆时时彩后三杀奇偶: 一种基于海胆状空心银铂钯三金属纳米粒子的免疫传感器的制备方法及应用.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201910021988

    申请日:

    20190110

    公开号:

    CN109406602A

    公开日:

    20190301

    当前法律状态:

    实质审查的生效

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效
    IPC分类号: G01N27/327;G01N33/68;G01N33/574 主分类号: G01N27/327;G01N33/68;G01N33/574
    申请人: 山东理工大学
    发明人: 刘青;董慧;刘会;颜芹;谭召灵;董云会
    地址: 255086 山东省淄博市高新技术开发区高创园A座313室
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201910021988

    授权公告号:

    法律状态公告日:

    20190326

    法律状态类型:

    实质审查的生效

    摘要

    本发明属于新型纳米材料、免疫分析和生物传感技术领域,提供了一种基于海胆状空心银铂钯三金属纳米粒子的免疫传感器的制备方法及应用,以及由该方法构建的电化学免疫传感器在检测癌胚抗原中的应用,具有检测范围宽、检测下限低、灵敏度高、操作简单、检测速度快等优点,并且具有良好的重现性、稳定性和选择性,构建此电化学免疫传感器的研究对癌胚抗原的检测具有十分重要的意义。

    权利要求书

    1.一种基于海胆状空心银铂钯三金属纳米粒子的免疫传感器的制备方法,其特征包括以下几个步骤: (1)将直径为3.0 ~ 5.0 mm的玻碳电极用氧化铝抛光粉抛光成镜面,在无水乙醇中超声清洗干净; (2)取6.0 μL、0.5 ~ 4.0 mg/mL的多壁碳纳米管/壳聚糖分散液滴加到电极表面,室温下晾干,用超纯水冲洗电极表面,晾干; (3)继续将6.0 μL、5.0 ~ 15.0 μg/mL的癌胚抗原捕获抗体滴加到电极表面,4 ℃冰箱中干燥; (4)继续将3.0 μL、1.0 ~ 2.0 wt%的BSA溶液滴加到电极表面,用以封闭电极表面上非特异性活性位点,pH = 6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面,4 ℃冰箱中晾干; (5)滴加6.0 μL、0.000001 ~ 1 ng/mL的一系列不同浓度的癌胚抗原溶液,pH = 6.98磷酸盐缓冲液冲洗电极表面,4 ℃冰箱中晾干; (6)将6.0 μL、3.0 ~ 8.0 mg/mL的空心银铂钯三金属纳米粒子标记的癌胚抗原检测抗体分散液滴涂于电极表面,静置于4 ℃冰箱中30 ~ 40 min,用pH = 6.98的磷酸盐缓冲液冲洗,置于4 ℃冰箱中晾干,制得一种检测癌胚抗原的电流型免疫传感器的工作电极。 2.如权利要求1所述的一种基于海胆状空心银铂钯三金属纳米粒子的免疫传感器的制备方法,所述多壁碳纳米管的制备,步骤如下: (1)制备羧基化多壁碳纳米管分散液 将0.5 g多壁碳纳米管置于500 mL锥形瓶中,加入200 mL体积比为3:1的浓硫酸和浓硝酸混合酸,随后在60 ℃超声反应2 h形成均匀的黑色溶液,高速离心(6000 rpm,5 min)洗涤溶液至中性,然后将产物置于100 ℃真空烘箱中干燥8 h,得到羧基化碳纳米管分散液。 3.如权利要求1所述的一种基于海胆状空心银铂钯三金属纳米粒子的免疫传感器的制备方法,所述壳聚糖纳米粒子及多壁碳纳米管/壳聚糖分散液的制备,步骤如下: (1)制备壳聚糖纳米粒子 在室温下,取75 mg壳聚糖粉末溶于2%的乙酸,磁力搅拌器10 min,以5 mL/min的速率加入到20%的硫酸钠溶液中,超声震荡1 h,离心(3000 r/min)四次,用超纯水洗涤后得到壳聚糖纳米粒子; (2)制备多壁碳纳米管/壳聚糖分散液 取30 ~ 50.0 mg羧基化碳纳米管溶解于50 mL去离子水中,将50.0 mg壳聚糖纳米粒子溶解于乙酸溶液(50 mL,1%)中,超声处理30 min后加入到羧基化碳纳米管溶液中,磁力搅拌4 h,然后,多壁碳纳米管/壳聚糖用超纯水离心分离,用1%的乙酸溶液洗去未反应的壳聚糖,得到多壁碳纳米管/壳聚糖分散液用铝箔包裹避光保存,并储存在4 ℃的冰箱中。 4.如权利要求1所述的一种基于海胆状空心银铂钯三金属纳米粒子的免疫传感器的制备方法,所述海胆状空心银铂钯三金属纳米粒子标记的癌胚抗原检测抗体分散液的制备,步骤如下: (1)制备银纳米立方体分散液 将10 mL的乙二醇加入50 mL烧杯中,在140 ℃磁力搅拌下加热1 h,接着将盐酸溶液(2.1 mL,3.016 mM)快速注入乙二醇中持续加热10 min,然后,将硝酸银溶液(6 mL,94 mM)和聚乙烯吡咯烷酮(6 mL,147 mM)混合以0.6 mL/min的速率加入到反应混合物中,在140 ℃的温度下持续加热搅拌36 h,用超纯水离心洗涤除去过量的聚乙烯吡咯烷酮,所得到的沉淀重新分散于20 mL超纯水,得到银纳米立方体分散液用铝箔包裹并储存在4 ℃的冰箱中; (2)制备海胆状空心银铂钯三金属纳米分散液 首先将盐酸溶液(0.5 mL,10 mM)与四氯钯酸钾(0.25 mL,5 mM)、氯铂酸(0.25 mL,5 mM)混合2 h,接着向制备好的银立方体纳米分散液中加入聚乙烯吡咯烷酮(0.5 mL,100 mM),将混合液置于油浴锅中加热5 min,再以2 mL/min的速率注入含有盐酸、四氯钯酸钾和氯铂酸的溶液中,所得溶液反应1 h,用饱和的氯化钠以及硝酸铁溶液(10 mL,50 mM)离心洗涤,收集黑色沉淀物,将其分散在1.0 mL超纯水中进一步使用; (3)制备海胆状空心银铂钯三金属纳米粒子标记的癌胚抗原检测抗体分散液 取3.0 ~ 8.0 mL海胆状空心银铂钯纳米分散液分散到1.0 mL、pH = 6.98的磷酸盐缓冲液中,加入1.0 ~ 2.0 mL、10.0 ~ 20.0 μg/mL的癌胚抗原检测抗体分散液,置于4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化8 ~ 12 h后,在1500 rpm转速下离心0.5 ~ 2.0 min,得到下层沉淀,加入1.0 mL、pH = 6.98的磷酸盐缓冲溶液离心洗涤1次,将下层沉淀重新分散于1.0 mL、pH = 6.98的磷酸盐缓冲溶液中,得到海胆状空心银铂钯纳米粒子标记的癌胚抗原检测抗体分散液,置于4 ℃下保存。 5.如权利要求1所述的一种基于海胆状空心银铂钯三金属纳米粒子的免疫传感器的制备方法,用于癌胚抗原的检测,检测步骤如下: (1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的传感器为工作电极,在10 mL的pH值为6.98的磷酸盐缓冲溶液中进行测试; (2)用时间-电流法对分析物进行检测,输入电压为-0.4 V,取样间隔0.1 s,运行时间400 s; (3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向的磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液,记录电流变化。

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