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    重庆时时彩控制不住: 数字微流控芯片及基于其的病原体免疫检测方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201910030200

    申请日:

    20190114

    公开号:

    CN109557150A

    公开日:

    20190402

    当前法律状态:

    实质审查的生效

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效
    IPC分类号: G01N27/26;G01N27/327;G01N21/64;B01L3/00 主分类号: G01N27/26;G01N27/327;G01N21/64;B01L3/00
    申请人: 大连大学
    发明人: 王云华;郑国侠;卢玲
    地址: 116622 辽宁省大连市经济技术开发区学府大街10号
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201910030200

    授权公告号:

    法律状态公告日:

    20190426

    法律状态类型:

    实质审查的生效

    摘要

    本发明涉及微流控芯片技术领域,具体涉及一种数字微流控芯片及基于其的病原体免疫检测方法,包括如下步骤:(1)制作数字微流控芯片;所述数字微流控芯片包括上样孔、形成试剂储池的试剂电极、形成液滴运行通道的输运电极以及形成检测区的检测电极;(2)在所述数字微流控芯片的检测区修饰抗原;(3)加入样本并运行数字微流控芯片,通过荧光检测系统CCD拍照检测荧光信号并进行定量分析。该数字微流控芯片及基于其的病原体免疫检测方法,反应时间短,检测灵敏度高,外围设备简单,灵活性强,能耗低;能够满足社区医院、远程诊疗等场合的需求,适于构建便携式分析平台;既可以批量分析,也可以分析单个样本,对样本量的适应性强。

    权利要求书

    1.一种病原体免疫检测方法,其特征在于,包括如下步骤: (1)制作数字微流控芯片;所述数字微流控芯片包括上样孔、形成试剂储池的试剂电极、形成液滴运行通道的输运电极以及形成检测区的检测电极; (2)在所述数字微流控芯片的检测区修饰抗原; (3)加入样本并运行数字微流控芯片,通过荧光检测系统CCD拍照检测荧光信号并进行定量分析。 2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述制作数字微流控芯片的具体步骤包括: 步骤1:制作下层微流控芯片: (1)在基底层上设置电极层;所述电极层包括形成试剂储池的试剂电极、形成液滴运行通道的输运电极以及形成检测区的检测电极; (2)所述电极层上设置SiO2绝缘层; 步骤2:制作上层微流控芯片: (1)所述上层微流控芯片采用ITO导电玻璃,在所述ITO导电玻璃上开设有上样孔,所述上样孔与所述液滴运行通道相通; (2)所述上层微流控芯片上设置试剂储池口,所述试剂储池口和试剂电极共同形成试剂储池; 步骤3:将所述上层微流控芯片和下层微流控芯片上下叠合在一起。 3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中所设置的电极层包括形成废液储池的废液电极和形成PBS池的PBS电极,所述上层微流控芯片上设置有废液储池口和PBS池口,所述废液储池口和所述废液电极共同形成所述废液储池,所述PBS池口和所述PBS电极共同形成所述PBS池;所述废液储池、PBS池分别与所述液体运行通道相通。 4.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述在所述数字微流控芯片的检测区修饰抗原,包括: (1)采用多层微纳加工技术,在检测电极上的绝缘层表面沉积金膜,并利用湿法刻蚀技术进行图案化; (2)在沉积有金膜的检测电极上包被抗原。 5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述在沉积有金膜的检测电极上包被抗原或抗体,包括, (1)将抗原用PBS缓冲液稀释至0.1mg/ml; (2)取2.0mg盐酸硫醇亚胺溶于1.0ml蒸馏水中,得到浓度为2.0mg/ml的巯基化试剂; (3)将1.0ml上述步骤(1)的抗原溶液和25μl上述步骤(2)的巯基化试剂混合,室温条件下搅拌反应0.5h; (4)用20mM的PBS缓冲液,其中含0.15M NaCl和1.0mM EDTA,pH为7.2,对步骤(3)所得到的反应液透析48h,期间每2h更换一次透析液,得到巯基化抗原溶液; (5)将镀有金膜的芯片洗净并晾干,在待包被金膜表面滴加3μl步骤(4)中所获得的巯基化抗原溶液,使其完全覆盖金膜表面,37℃温育1h。 6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述加入样本并运行数字微流控芯片,通过荧光检测系统CCD拍照检测荧光信号并进行定量分析,具体为: (3.1)将血清样品由上样孔的位置处加入,血清样品经由输运电极形成的液体运行通道输送至其中一个检测区,血清样品在相应检测区与邻近电极间往复运动,使血清中的抗体与检测区修饰的抗原充分反应; (3.2)由试剂储池产生的荧光标记二抗液滴输运至检测区,与吸附在检测区表面的抗体反应,该抗体为一抗,孵育时液滴在检测区与相邻电极间间歇往复运动,促进抗体的识别与结合; (3.3)通过荧光检测系统CCD拍照检测荧光信号并进行定量分析。 7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述数字微流控芯片上还包括形成废液储池的废液电极和形成PBS池的PBS电极,所述加入样本并运行数字微流控芯片的步骤(3.1)和步骤(3.2)之间,还包括步骤: (a)从PBS池生成PBS液滴,清洗上样孔处的残留样品,废液排出到废液池; (b)反应后的废液经输运电极运至废液池,经注射器手动抽出; (c)由PBS储池产生的一个PBS液滴输运至检测区,同样进行往复运动,洗去残留血清,废液排至废液池,重复2-3次; 所述步骤(3.2)和步骤(3.3)之间还包括步骤: (d)废液排出后用PBS液滴润洗,重复2-3次。 8.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述检测区修饰的抗原为core、NS3、NS4混合抗原,所述二抗使用Dylight-488标记IgG。 9.一种数字微流控芯片,其特征在于,所述权利要求1-8任意一项中所述的病原体免疫检测方法采用所述数字微流控芯片,所述数字微流控芯片包括上下叠合设置的下层微流控芯片和上层微流控芯片,所述下层微流控芯片上设有多个电极(5),所述多个电极(5)包括对应形成试剂储池(10)的试剂电极、形成检测区(12)的检测电极以及形成液滴运行通道的输运电极(13);所述上层微流控芯片上设有贯通所述上层微流控芯片的上样孔(11)。 10.根据权利要求9所述的数字微流控芯片,其特征在于,所述微流控芯片包括基底层(1),所述多个电极间隔平铺于所述基底层表面,所述电极上形成有绝缘层(2),所述检测电极上的绝缘层表面沉积有金膜(6)。

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    数字 微流控 芯片 基于 病原体 免疫 检测 方法
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