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    重庆时时彩世爵平台: 一种用于检测糖尿病尿液中DNA的提取方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201910036126

    申请日:

    20190115

    公开号:

    CN109652404A

    公开日:

    20190419

    当前法律状态:

    公开

    有效性:

    审中

    法律详情: 公开
    IPC分类号: C12N15/10 主分类号: C12N15/10
    申请人: 川北医学院
    发明人: 赵春艳
    地址: 637007 四川省南充市顺庆区涪江路234号
    优先权:
    专利代理机构: 11407 代理人: 彭丽芳
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201910036126

    授权公告号:

    法律状态公告日:

    20190419

    法律状态类型:

    公开

    摘要

    本发明公开了一种用于检测糖尿病尿液中DNA的提取方法,包括以下步骤,S1,分子标志物标记:取用糖尿病患者尿液,通过生物荧光剂对尿液中的分子标志物,红细胞和白细胞进行染色;S2,分子标志物检测:利用缓冲等张液鞘液的水动力聚集功能及流式细胞计数池的层压进行检测,可实现有形成分以尽量平铺不重叠的方式,最大剖面朝向显微镜镜头进行图像捕捉,S3,分子标志物分隔:通过流式细胞仪的自动粒子识别功能对图像中的有形成分进行分隔、特征分析及自动分类。本发明对DNA检测通过生物荧光蛋白结合红细胞和白细胞标记为分子标志物,通过流式细胞计对分子标志物捕捉分类,通过离心提取检测DNA含量分析推断出分子标志物的含量。

    权利要求书

    1.一种用于检测糖尿病尿液中DNA的提取方法,其特征在于,包括以下步骤: S1:分子标志物标记:取用糖尿病患者尿液,通过生物荧光剂对尿液中的分子标志物,红细胞和白细胞进行染色; S2:分子标志物检测:利用缓冲等张液鞘液的水动力聚集功能及流式细胞计数池的层压进行检测,可实现有形成分以尽量平铺不重叠的方式,最大剖面朝向显微镜镜头进行图像捕捉; S3:分子标志物分隔:通过流式细胞仪的自动粒子识别(APR)功能对图像中的有形成分进行分隔、特征分析及自动分类,对荧光标记的分子标志物的部分尿液进行提取区分; S4:离心提取分子标志物:采用尿液样本10ml左右,5000转离心10min,收集底部的沉淀a1,用枪小心吸走上方的液体,底部仍保留部分液体b1; S5:对分子标志物中DNA提?。憾詁1溶液中加入TE缓冲液1.5ml,混匀,8000转,离心5min,收集沉淀,重复上述步骤一次,加入450ul裂解液,10ul蛋白酶K,55度水浴1小时,接下来可以用分氯仿的方法进行抽提; S6:对提取DNA检测:通过品红醛试剂对DNA进行染色,通过DNA分析设备和显微镜进行观察分析。 2.根据权利要求1所述的一种用于检测糖尿病尿液中DNA的提取方法,其特征在于,所述S1中糖尿病患者的尿液为患者空腹且在8小时前未摄入大量糖分取得,尿液在结合荧光蛋白前进行中性处理,保证白细胞和红细胞不会溶胀。 3.根据权利要求1所述的一种用于检测糖尿病尿液中DNA的提取方法,其特征在于,所述S1中的生物荧光剂使用的是m-Cherry红色荧光蛋白,m-Cherry红色荧光蛋白可和红细胞和白细胞结合标记。 4.根据权利要求1所述的一种用于检测糖尿病尿液中DNA的提取方法,其特征在于,所述S2中的张液鞘液适配后续的流式细胞仪,流式细胞仪是通过流体聚焦对细胞逐一排队,通过激光监测点检测荧光蛋白结合标记物。 5.根据权利要求1所述的一种用于检测糖尿病尿液中DNA的提取方法,其特征在于,所述S5中的裂解液由Tris-HCL-8缓冲溶液、EDTA溶液和0.5%的SDS溶液制成。

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