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    怎样看重庆时时彩走势: 一种小麦抗黄矮病性表型鉴定方法.pdf

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    一种 小麦 抗黄矮病性 表型 鉴定 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201410135693.5

    申请日:

    2014.04.08

    公开号:

    CN103960009A

    公开日:

    2014.08.06

    当前法律状态:

    终止

    有效性:

    无权

    法律详情: 未缴年费专利权终止 IPC(主分类):A01G 1/00申请日:20140408授权公告日:20150812终止日期:20180408|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):A01G 1/00申请日:20140408|||公开
    IPC分类号: A01G1/00; A01G31/00; A01G7/00; A01K67/033 主分类号: A01G1/00
    申请人: 山西省农业科学院小麦研究所
    发明人: 曹亚萍; 范绍强; 武银玉; 张姝敏; 张娟; 张明义; 乔合心; 刘文生
    地址: 041000 山西省临汾市幽并街33号
    优先权:
    专利代理机构: 太原晋科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 14110 代理人: 郑晋周
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410135693.5

    授权公告号:

    |||||||||

    法律状态公告日:

    2019.03.29|||2015.08.12|||2014.09.03|||2014.08.06

    法律状态类型:

    专利权的终止|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    一种小麦抗黄矮病性表型鉴定方法,其目的是可一次性鉴定小麦材料对当地黄矮病毒所有流行株系的抗耐性,针对性强,检测效率高,准确性好。本发明方法是室外麦苗种植,室内麦苗种植,在早播麦田采集附有麦二叉蚜的小麦叶片,轻放于营养钵内种植的麦苗上,麦二叉蚜会自动转移至新鲜小麦幼苗上;翌年室外低温稳定在0℃以上时,将室内繁殖的麦二叉蚜转接至拱棚内麦苗上;待室外低温保持在10℃以上时,将拱棚内小麦叶片剪成1.5cm-2.0cm小段,抖落拱棚内麦苗上的蚜虫,投放在剪好的小麦叶段上,轻轻搅动使小麦叶段上蚜虫分布均匀,每段叶片5-8头;用镊子夹起准备好的附有麦二叉蚜的小麦叶段,轻放于待鉴定小麦植株茎基部,分单株接种,每单株接种蚜量5-8头。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种小麦抗黄矮病性表型鉴定方法,其特征是:
    (1)室外麦苗种植:拱棚选择田间避风向阳处,按常规操作整地施肥;于小麦适播期直播小麦种子;待鉴定材料种植于试验田,行长2m,行距0.25 m ?0.30 m,每行30?40粒,均匀播种;
    (2)室内麦苗种植:以珍珠岩为吸水介体,将小麦种子种植在12 cm×12 cm营养钵内,每钵均匀种植40?60粒;将营养钵放于平底托盘内,向托盘内注水,供珍珠岩充分吸水,以利种子萌发和麦苗生长;当麦苗露出后,即种植下一批,保证室内麦苗的连续性;
    (3)小麦分蘖初期,选择天气晴朗无风日的中午13:00?15:00时,在早播麦田采集附有麦二叉蚜的小麦叶片,轻放于营养钵内种植的麦苗上,麦二叉蚜会自动转移至新鲜小麦幼苗上;当蚜虫吸食麦苗汁液致使叶片黄化面积影响麦苗生长时,将麦二叉蚜转接至生育期处于一叶一心至二叶期的新鲜麦苗上;随着转接次数的增加,麦二叉蚜数量逐渐上升,营养钵的种植数量需相应增多;
    (4)翌年室外低温稳定在0℃以上时,将室内繁殖的麦二叉蚜转接至拱棚内麦苗上;
    (5)待室外低温保持在10℃以上时,选择晴朗无风日,将拱棚内小麦叶片剪成1.5 cm?2.0 cm小段,放入保鲜盒内,抖落拱棚内麦苗上的蚜虫,投放在剪好的小麦叶段上,轻轻搅动使小麦叶段上蚜虫分布均匀,每段叶片5?8头;
    (6)田间接种:试验田待鉴定小麦材料叶片上的露水蒸发后,用镊子夹起准备好的附有麦二叉蚜的小麦叶段,轻放于待鉴定小麦植株茎基部,分单株接种,每单株接种蚜量5?8头;接种10天以后,全田喷药灭蚜。

    2.  如权利要求1所述的小麦抗黄矮病性表型鉴定方法,其特征是拱棚麦苗种植面积5 m2?10 m2;拱棚高1.0 m ?1.2 m,冬季小麦停止生长后,用塑料布覆盖拱棚保温,四周底部用土压实。

    3.  如权利要求1或2所述的小麦抗黄矮病性表型鉴定方法,其特征是采集当地感染大麦黄矮病毒并且未拔节的自生麦苗移栽于拱棚麦苗的行间,约0.5 m2一株病苗。

    4.  如权利要求1或2所述的小麦抗黄矮病性表型鉴定方法,其特征是室内和拱棚内温度保持在10?25℃。

    5.  如权利要求4所述的小麦抗黄矮病性表型鉴定方法,其特征是室内和拱棚内最适宜温度为20℃。

    说明书

    说明书一种小麦抗黄矮病性表型鉴定方法
    技术领域
    本发明属于小麦抗病性鉴定技术领域,具体涉及抗病种质资源筛选、品种抗耐性鉴定以及小麦抗黄矮病育种的世代选择。
    背景技术
    小麦黄矮病是一种由蚜虫介导大麦黄矮病毒(BYDV)引起的病毒病,主要分布于华北、西北、东北等麦区,该病的流行难以预测,发病后又不可治愈,被称为“小麦癌症”。小麦感病后造成生理功能紊乱、有效分蘖减少、叶片黄化、植株矮化、结实率和千粒重降低、品质下降,一般年份减产5~10%,流行年份减产20~30%,严重时达50%以上,对小麦生产构成极大威胁。不同种质或品种对大麦黄矮病毒的抗耐性具有差异,筛选对大麦黄矮病毒抗耐性好的种质资源,培育抗耐性小麦品种,在黄矮病高发区种植对大麦黄矮病毒有一定抗耐性的品种,是可持续控制小麦黄矮病最有效的途径。在我国,小麦黄矮病在生产上造成危害的主要有3个株系,GAV株系主要传毒蚜虫为麦二叉蚜和麦长管蚜,GPV株系为麦二叉蚜和禾缢管蚜,PAV株系为禾缢管蚜、麦长管蚜和麦二叉蚜。以GPV和GAV株系流行最广,PAV株系发生量极少,抗性鉴定应以当地流行株系为病毒接种体。
    目前鉴定小麦抗黄矮病性主要有两种方法。一是用堆测法分病毒株系进行田间接种鉴定,小麦黄矮病在不同生态区域其流行株系具有差异,而同一生态区域往往是几种株系混合发生,用该方法鉴定出抗GAV株系的小麦材料,对其余株系(如GPV)的抗性却不得而知,如要鉴定出对该区域所有流行株系的抗性,势必要加大工作量;另外,该方法仅局限于稳定的小麦品系,不能应用于抗病育种研究的世代分离和选择,而这却是培育抗黄矮病小麦品种最关键的环节。二是基于PCR的分子标记鉴定,目前导入普通小麦的抗黄矮病基因有多个,应用分子标记可准确鉴定小麦材料是否含有抗黄矮病基因,但是,由于基因之间的互作和基因本身的表达差异,所含抗病基因的表达有时会受到抑制或干扰,因而用该方法鉴定的含抗黄矮病基因的材料,其在生产应用中可能会表现出感病特性。
    发明内容
    本发明目的是为克服上述已有技术的不足,提供一种针对性强、检测效率高、准确性好、简便易行的可全面检测小麦抗黄矮病性的表型鉴定方法。
    本发明采用营养钵室内继代饲养麦二叉蚜、室外塑料拱棚保存病苗和麦苗、试验田接种大麦黄矮病毒的方法进行小麦抗黄矮病性表型鉴定;具体操作步骤是:
    (1)室外麦苗种植:拱棚选择田间避风向阳处,按常规操作整地施肥;于小麦适播期直播小麦种子;冬季小麦停止生长后,用塑料布覆盖拱棚保温。待鉴定材料种植于试验田,行长2 m,行距0.25?0.30 m,每行30?40粒,均匀播种。
    (2)室内麦苗种植:以珍珠岩或蛭石为吸水介体,将小麦种子种植在12 cm×12 cm营养钵内,每钵均匀种植40?60粒;将营养钵放于平底托盘内,向托盘内注水,供珍珠岩充分吸水,以利种子萌发和麦苗生长。当麦苗露出后,即种植下一批,保证室内麦苗的连续性。
    (3)蚜虫采集:小麦分蘖初期,选择天气晴朗无风日的中午13:00?15:00时,在早播麦田采集附有麦二叉蚜的小麦叶片,轻放于营养钵内种植的麦苗上,麦二叉蚜会自动转移至新鲜小麦幼苗上。当蚜虫吸食麦苗汁液致使叶片黄化面积影响麦苗生长时,将麦二叉蚜转接至生育期处于一叶一心至二叶期的新鲜麦苗上。随着转接次数的增加,麦二叉蚜数量逐渐上升,营养钵的种植数量需相应增多。
    (4)翌年室外低温稳定在0℃以上时,将室内繁殖的麦二叉蚜转接至拱棚内麦苗上。
    (5)待室外低温保持在10 ℃以上时,选择晴朗无风日,将拱棚内小麦叶片剪成1.5 cm?2.0 cm小段,放入保鲜盒内,抖落拱棚内麦苗上的蚜虫,投放在剪好的小麦叶段上,轻轻搅动使小麦叶段上蚜虫分布均匀,每段叶片5?8头。
    (6)田间接种:试验田待鉴定小麦材料叶片上的露水蒸发后,用镊子夹起准备好的附有麦二叉蚜的小麦叶段,轻放于待鉴定小麦植株茎基部,分单株接种,每单株接种蚜量5?8头。接种10天以后,全田喷药灭蚜。
    所述拱棚麦苗种植面积5 m2?10 m2;室外拱棚高1.0?1.2 m;冬季小麦停止生长后,用塑料布覆盖拱棚保温,四周底部用土压实。营养钵直径10?12 cm,内装珍珠岩以便吸水;试验田待鉴定材料行距25?30 cm,株距5?7 cm,每株接种5?8头带毒麦二叉蚜。
    采集当地感染大麦黄矮病毒并且未拔节的自生麦苗移栽于拱棚麦苗的行间,约0.5 m2一株病苗。室内和拱棚内温度保持在10?25℃,最适宜温度为20℃。
    小麦抽穗后逐茎调查每份材料的发病情况,抗性评价按6级分级标准执行。免疫:所有叶片无黄化;高抗:部分叶片尖端变黄;抗?。浩煲断?片至2片叶叶尖黄化;中抗:旗叶和其他叶片黄化面积分别占旗叶总面积和总叶面积的1/2以下;感?。浩煲逗推渌镀苹婊直鹫计煲蹲苊婊妥芤睹婊?/2及以上;高感:所有叶片几乎完全黄化。
    本发明是采集当地典型的小麦黄矮病苗为毒源,也就是以当地流行株系(有时是混合株系)为病毒接种体,使被接种材料感染大麦黄矮病毒流行株系,从发病情况评价被鉴定材料对小麦黄矮病的抗性。主要用于抗病种质资源筛选、以及抗病育种中分离世代的单株鉴定和筛选抗耐病小麦品种。应用本发明的方法可一次性鉴定试验材料对当地黄矮病毒所有流行株系的抗耐性,针对性强,检测效率高,准确性好,可以实现定株筛选,节省时间和资源,对于抗黄矮病种质资源筛选和小麦抗病育种的世代抗病性选择具有重大意义。
    具体实施方式
    因普通小麦中不存在大麦黄矮病毒抗源,故从小麦近缘植物中间偃麦草中发掘出抗黄矮病基因,将其以易位的形式导入普通小麦,而后以其为亲本与生产上推广品种杂交,培育抗黄矮病小麦新品种。本发明自1996年开始试验,主要用于鉴定黄矮病抗源材料及其衍生世代和出圃品系的抗病性,以便针对性培育抗黄矮病新品种。
    以晋麦88号小麦品种选育过程为例。晋麦88号组合为“99R162/临抗5025//晋麦47号”,其中99R162为高抗黄矮病的小麦-中间偃麦草易位系。杂种二代(F2)于2003年度进行抗病性鉴选,具体实施步骤如下:
    (1)拱棚麦苗种植:选择田间避风向阳处,面积6 m2,按常规操作整地施肥,于2002年9月31日直播感病小麦品种晋麦49号。
    毒源采集:在当地小麦种植区的田间地头,采集感染大麦黄矮病毒并且未拔节的自生麦苗12株,移栽于拱棚麦苗的行间,均匀分布,同时浇水保证病苗存活。
    试验材料种植:在试验田于2002年10月2日人工点播F2代种子,行长2 m,行距0.25 m,每行均匀点播30粒,共种植40行。出苗后每隔30天全田喷药防止自然界蚜虫干扰,至冬至前共喷药2次。
    (2)室内麦苗种植:准备12 cm×12 cm大小营养钵,底部垫上滤纸,将蛭石装至营养钵内至表层离钵口边缘2 cm处,均匀撒上麦籽,每钵50粒左右,而后再以蛭石完全覆盖种子。第一批种植2钵,将其放于塑料平底托盘内,向托盘内注入自来水,供蛭石充分吸水,保证盘内水分充足,以利种子萌发和麦苗生长。当麦苗露出后,即种植下一批(3钵),保证室内麦苗的连续性。
    (3)蚜虫采集:2002年10月27?30日,天气晴朗无风,中午13?15时在早播麦田采集附有麦二叉蚜的小麦叶片至培养皿内,共采集到30片,麦二叉蚜量约150头。
    将采集的附有麦二叉蚜的小麦叶片轻放于营养钵内种植的麦苗上,随着采集叶片的脱水,麦二叉蚜自动转移至营养钵内的小麦幼苗上。调节室内温度,使室温保持在20℃左右,保证麦二叉蚜正常生长和繁殖。
    随着麦二叉蚜对小麦茎叶的取食,麦苗叶片呈点状黄化。当黄化面积不断扩大,影响麦苗生长时,将麦二叉蚜转接至下一批麦苗上(二叶期)。随着转接次数的增加,麦二叉蚜数量逐渐上升,营养钵的种植数量需相应增多。
    2002年12月6日,将拱棚麦苗喷药灭蚜,以保证接种蚜虫的纯度。冬至节过后,用塑料布覆盖拱棚,拱棚高1.2 m,四周底部用土压实。
    (4)2003年2月18?20日,将室内繁殖的100钵麦苗上的麦二叉蚜转接至拱棚内,可将营养钵侧放,使钵内带有蚜虫的麦苗与拱棚内麦苗充分接触,以便蚜虫转移取食。
    由于拱棚内移栽有黄矮病苗,随着时间的推移,有翅蚜不断转移取食,原有的健壮麦苗将全部感染大麦黄矮病毒,所有麦二叉蚜也逐渐成为带毒麦蚜。随着立春后室外温度逐渐上升,要注意拱棚内每天及时通风,使棚内温度保持在20 ℃左右。
    (5)2003年3月20?25日,天气晴朗无风,将拱棚内小麦叶片剪成1.5?2.0 cm小段,放入保鲜盒内,抖落拱棚内麦苗上的蚜虫,投放在剪好的小麦叶段上,轻轻搅动使小麦叶段上蚜虫分布均匀,每段叶片5?8头。
    (6)田间接种:待试验田小麦叶片上的露水蒸发后,用镊子夹起准备好的附有麦二叉蚜的小麦叶段,轻放于F2代待鉴定小麦植株茎基部,按单株接种,每株接种蚜量5?8头。2003年3月30日,全田喷药灭蚜。
    小麦抽穗后,拔除感病株,将抗病株留种,于F3?F4代采用系谱法进行农艺性选择,于2005年在F4代选择产量性状优良的5个品系出圃。
    将出圃的5个品系再次进行抗黄矮病性鉴定,每品系种植2行,其余操作流程同上。于2006年5月10日逐茎调查每个品系的发病情况,其中品系054038表现抗病,并且农艺性和抗旱性均好,该品系于2007年度参加山西省农业科学院小麦研究所品比试验,2008年度、2009年度参加山西省南部麦区旱地区域试验和生产试验,2009年通过山西省品种审定委员会审定,命名为晋麦88号,成为在山西省黄矮病高发区重点种植的抗病品种。

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