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    重庆时时彩春节停几天: 一种水果中植物生长调节剂残留检测方法.pdf

    关 键 词:
    一种 水果 植物 生长 调节剂 残留 检测 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201410140616.9

    申请日:

    2014.04.09

    公开号:

    CN103969363A

    公开日:

    2014.08.06

    当前法律状态:

    撤回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):G01N 30/02申请公布日:20140806|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20140409|||公开
    IPC分类号: G01N30/02; G01N30/14 主分类号: G01N30/02
    申请人: 温州市质量技术监督检测院
    发明人: 林欧文; 蒋武; 林君
    地址: 325000 浙江省温州市鹿城区中国鞋都一期31号地块
    优先权:
    专利代理机构: 温州瓯越专利代理有限公司 33211 代理人: 李友福
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410140616.9

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2015.12.23|||2014.09.03|||2014.08.06

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的视为撤回|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及一种水果中植物生长调节剂残留检测方法,通过QuEChERS方法对水果中植物生长调节剂残留进行提取净化,使得目标化合物的加标回收率达到71%-98%,相对标准偏差不高于6%,具有良好的灵敏度及选择性,回收率稳定,并采用液相色谱串联质谱检测方法实现氯吡脲、乙烯利、4-氯苯氧乙酸钠和2,4-二氯苯氧乙酸钠的同时检测,检出限分别为0.5μg/kg至100μg/kg,满足国家限量标准的灵敏度要求。本方法具有良好的灵敏度及选择性,可作为快速检测水果中植物生长调节剂残留的方法。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种水果中植物生长调节剂残留检测方法,其特征在于包含以下步骤:
    (1)样品预处理:称取水果样品,取可食部分放入烧杯中,匀浆3min;
    (2)提取净化:称取匀浆后的15g样品于50mL离心管中,加入含1%乙酸的15mL乙腈,预先用甲酸调至pH=3.0,剧烈振摇1min后,加入6.0g无水硫酸镁和1.5g无水醋酸钠,剧烈振摇1min后,4000rpm离心3min,取1mL上清液加入150mg无水硫酸镁和50mg PSA,剧烈振摇1min后,4000rpm离心3min,取上清液,过0.22um滤膜后,得到提取液;
    (3)将净化步骤得到的提取液进入液相色谱串联质谱仪检测;
    所述步骤(3)中液相色谱串联质谱仪的的仪器分析条件如下:
    色谱分离条件如下:
    流动相A:5mmol/L的醋酸铵+0.01%甲酸;pH=5
    流动相B:甲醇;
    流速:0.25mL/min
    梯度程序:

    质谱条件如下:
    离子源:电喷雾离子源(ESI);
    质谱检测方式:多反应监测(MRM);
    毛细管电压:3.0kV;
    离子源温度:110℃;
    锥孔反吹气流速:50L/h;
    脱溶剂气温度:380℃;
    脱溶剂气流速:600L/h;
    光电倍增管电压:650V;
    各植物生长调节剂的监测离子对(m/z)、锥孔电压、碰撞能量、离子化方式:

    。

    说明书

    说明书一种水果中植物生长调节剂残留检测方法
    技术领域
    本发明涉及一种水果中植物生长调节剂残留检测方法,特别是对氯吡脲、乙烯利、4-氯苯氧乙酸钠和2,4-二氯苯氧乙酸钠的同时检测的方法。
    背景技术
    随着社会的不断发展,产品的多样性和丰富性在带给人们物质享受的同时,各种弊端也不知不觉走近了我们的生活。 “大如乒乓球”的草莓,“乒乓葡萄”、“土豆大小”的猕猴桃、外观“鲜艳”的番茄,“催熟剂催熟”的芒果、香蕉在市场上随处可见;但是,在这些现象的背后,却隐藏着“违背自然规律的奥秘”。这就是因为在种植或后期催熟过程中使用了例如“大果灵”、“膨大剂”、“乙烯利”、“番茄灵”等植物生长调节剂,植物生长调节剂(plant growth regulators)是一类与植物激素具有相似生理和生物学效应的物质,是用于调节植物生长发育的一类农药,包括人工合成的化合物和从生物中提取的天然植物激素。已发现具有调控植物生长和发育功能物质有生长素、赤霉素、乙烯、细胞分裂素、脱落酸、油菜素内酯、水杨酸、茉莉酸和多胺等,而作为植物生长调节剂被应用在农业生产中主要是前6大类。
    “大果灵”或“膨大剂”化学名称是1-(2-氯-4-吡啶)3-苯基脲,别名又叫氯吡脲、吡效??;施特优等;CAS号:68157-60-8。分子式:C12H10ClN3O。相对分子量或原子量:247.7。熔点(℃):165~170。白色至近白色结晶粉末。水中溶解度39mg/l(pH6.4、21℃)。

    番茄灵化学名称是对氯苯氧乙酸;对氯苯氧醋酸,别名促生灵,番茄通,防落素,防落壮果剂,(4-氯苯氧)乙酸。分子式:C8H7ClO3。分子量:186.59。CAS号:122-88-3。白色结晶。熔点157-159℃。溶于乙醇、丙酮和苯,微溶于水。有清香味。
    乙烯利是一种乙烯释放剂类的植物生长调节剂,化学名称为2-氯乙基膦酸,另有乙烯磷、一试灵等名称.乙烯利作为落叶剂、摘果剂、去雄剂,被广泛用于番茄、苹果、梨、草莓、葡萄、香蕉等蔬菜水果的生产及贮藏中。
    2001年4月农业部启动了“无公害食品行动计划”,在无公害生产标准中明确指出,植物生长调节剂的使用应以对环境不造成污染、对人体健康无危害、不降低果实品质为原则,并且强调“不得使用苯脲类细胞分裂素蘸果”。
    我国《食品安全法》中有几百项国家卫生标准,但对五花八门的生长激素却缺乏相关指标规定和检测方法。而缺乏执行标准,检测有难度,也给工商部门执法带来困扰。GB 2763-2008《食品中农药的最大残留限量》,对农作物表面的“乙烯利”最大残留量做出规定。标准列出一些热带及亚热带等水果中,“乙烯利”的最大残留量为2mg/kg,但是没有相应的检测方法标准。而对于“大果灵”或“膨大剂”即1-(2-氯-4-吡啶)3-苯基脲、“番茄灵”即对氯苯氧乙酸并没有相应的限量标准规定和检测方法标准。此外,2,4-D常用于柑橘的贮藏保鲜,但也没有规定残留限量标准。
    我国国家标准对这些植物生长调节剂一是缺乏检测方法和限量标准,即使个别调节剂存在检测方法,往往也是制定年代久远,操作繁琐,准确度不高,一次处理只能检测一种植物生长调节剂,检测效率不高等缺点。建立几种常见植物生长调节剂的的检测方法及发展植物生长调节剂的多种同时检测技术,将有效促进我院检测技术能力的提高,同时也为保障与人们日常息息相关的食品安全具有十分重要的意义。
    到目前为止,关于氯吡脲在果蔬中的残留测定方法国内外鲜有报道。胡江涛等人采用阴离子交换剂丙基乙二胺(PSA)分散固相萃取(DSPE)净化基体中的杂质,建立了氯吡脲的高效液相色谱(HPLC)检测方法。主要过程是准确称取(5.00±0.05)g猕猴桃匀浆试样。置于50 mL具塞离心管中,加入5.0 mL乙腈,涡旋振荡2 min,超声提取20 min后,加入2 g无水MgSO 和0.5 g NaC1,涡旋振荡2 min,以8 000 r/min离心l0min。然后进行净化操作,准确吸取离心后的提取液1.00 mL于2 mL Teflon离心管中,加入100mg PSA 和100 mg无水MgSO ,涡旋1 min,以3 000 r/min离心2 min,取上清液过0.22 m 有机滤膜于进样瓶中,用反相液相色谱紫外检测器测定,检出限达0.005mg/kg。李瑞娟等人氯吡脲在猕猴桃中的消解动态和残留测定,用二氯甲烷提取猕猴桃样品中的氯吡脲,用无水硫酸钠脱水后,旋转蒸发浓缩后,用甲醇定容,用C18色谱柱,紫外检测器反相色谱测定其含量,检出限为0.01mg/kg。
    关于对氯苯氧乙酸分析方法,目前主要有薄层色谱法,气相色谱法。TLC法检测灵敏度较低,制样过程繁琐且条件难以控制,故回收率较低,重现性较差;GC法是将CPA-Na提取后衍生为丙酯,然后用GC-FID分离检测.但方法易受FID检测灵敏度的影响而造成取样量大,且样品前处理步骤较为繁杂,不利于快速分析。目前尚无国家标准测定方法?;莆榔降热瞬捎们庋趸迫芤禾崛?,用氯仿液夜萃取除去杂质,然后用乙醚-石油醚(1:1)萃取,用碳酸氢钠溶液反萃取,再用乙醚萃取,用无水硫酸钠脱水后,反相液相色谱紫外检测器测定。颜金良等人采用离子色谱法对豆芽中的4-氯苯氧乙酸进行检测。将样品捣碎,准确称取10 g已均匀捣碎的样品于50 ml离心管中,加入20 ml去离子水,浸泡4 h以上或过夜,充分振摇,高速离心(8000 r/min)10 min,取上清液,滤液过C18小柱、再过0.45μm 的滤膜后直接进样。选用IonPac AS11 色谱柱,KOH淋洗液梯度淋洗,电导检测器检测。施青红等人用离子色谱法电导检测器对土壤中的4-氯苯氧乙酸进行检测。
    尹桂豪等人采用重氮甲烷衍生化,气相色谱分析法准确检测番茄中的乙烯利含量。称取番茄试料约10 g(准确至l0 mg)于聚乙烯烧杯中,加入0.5 mL甲醇盐酸溶液和50mL甲醇,超声振荡提取5 min,过滤于100 mL的聚乙烯容量瓶中.残渣再用30 mL甲醇提取1次,合并提取液于聚乙烯容量瓶中,定容至100 mL。吸取10.0 mL上述定容溶液,放入l5 mL聚乙烯刻度离心管中,在干燥氮气流下于30~40℃水浴 浓缩至约1.5 mL,加入0.5 mL甲醇盐酸溶液和8 mL无水乙醚,充分混合,放置10 min。将 清液移入另一聚乙烯刻度管中,残留液用2 m1无水乙醚分2次萃取,萃取液并人上述清液中,于30 ~40℃水浴上浓缩至约l mL.在通风柜内,向浓缩液里滴加重氮甲烷溶液,直至黄色不褪为止.盖严塞子,放置15 min.在氮气流下在30~40℃水浴上浓缩至约0.8 mL,用乙醚稀释到2.00-5.00 mL,气相色谱测定其含量,检出限为0.01mg/kg。李丽华等人采用固相微萃取-气相色谱联用技术建立了测定芒果原浆中乙烯利残留量的方法。在7ml顶空瓶中加入已配好的标准使用液0.5ml或0.25g样品盒1ml 5mol/L的KOH,立即密封,混匀后,置于已预热至60℃的气相色谱仪柱温箱内,恒温反应10min,取出放于已预热至约60℃的固相微萃取加热装置上,插入已冷却的萃取头,富集5min,将萃取头迅速插入气相色谱仪汽化室,热解吸5min,并进行色谱分析。徐茂生等人采用离子色谱法电导检测器,KOH和NaCO3混合淋洗液,AS9分离柱进行分离检测,检测限达0.1887ug/ml。颜金良等人采用离子色谱法电导检测器,KOH淋洗液,AS18色谱柱对瓜果中的乙烯利进行检测。瓜果样品经捣碎,准确称取10 g已均匀捣碎的样品于50 ml离心管中,加入20 ml去离子水,超声提取10 min,或浸泡过夜后,经充分振摇,高速离心(8000 r/min)15 min,吸取上清液,滤液过C18 小柱、再过0.45um的滤膜后直接进样检测。样品实验结果及各离子的保留时间与基线分离良好。周艳明等人采用顶空气相色谱法对乙烯利进行检测。
    上述这些植物生长调节剂的检测方法要么处理繁琐、耗时,检出限又比较高,难以适应越来越严格的食品安全要求。
    发明内容
    本发明的目的在于为克服上述现有技术的不足,提供一种方法简便、更快速、一次检测多种成份的水果中植物生长调节剂残留检测方法。
    为了解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:一种水果中植物生长调节剂残留检测方法,其特征在于包含以下步骤:
    (1)样品预处理:称取水果样品,取可食部分放入烧杯中,匀浆3min;
    (2)提取净化:称取匀浆后的15g样品于50mL离心管中,加入含1%乙酸的15mL乙腈(已预先用甲酸调至pH=3.0),剧烈振摇1min后,加入6.0g无水硫酸镁和1.5g无水醋酸钠,剧烈振摇1min后,4000rpm离心3min,取1mL上清液加入150mg无水硫酸镁和50mg PSA,剧烈振摇1min后,4000rpm离心3min,取上清液,过0.22um滤膜后,得到提取液;
    (3)将净化步骤得到的提取液进入液相色谱串联质谱仪检测;
    本发明通过QuEChERS方法,采用加入含乙酸的乙腈对水果中植物生长调节剂残留进行提取净化,使得目标化合物的加标回收率达到71%-98%,相对标准偏差不高于6%,具有良好的灵敏度及选择性,回收率稳定,并采用UPLC-MS/MS实现了氯吡脲、乙烯利、4-氯苯氧乙酸钠和2,4-二氯苯氧乙酸钠的同时检测,方法简便,四种目标化合物的检出限达到0.5-100.0μg/kg。
    下面将结合实施例对本发明作进一步说明。
    附图说明
    图1为乙烯利色谱质谱图;
    图2为4-氯苯氧乙酸钠色谱质谱图;
    图3为2,4-二氯苯氧乙酸钠色谱质谱图;
    图4为氯吡苯脲色谱质谱图;
    图5为4种植物生长调节剂的色谱质谱图;
    图6为表1中浓度1空白基质标准样品色谱质谱图;
    图7为表1中浓度2空白基质标准样品色谱质谱图;
    图8为表1中浓度3空白基质标准样品色谱质谱图;
    图9为表1中浓度4空白基质标准样品色谱质谱图;
    图10为表1中浓度5空白基质标准样品色谱质谱图;
    图11为表1中浓度6空白基质标准样品色谱质谱图;
    图12为猕猴桃检出氯吡苯脲色谱质谱图。
    具体实施方式
    一、本发明实用的仪器和试剂
    1)液相色谱仪及色谱柱
    美国Waters公司Acquity UPLC超高效液相色谱仪,配有自动进样器;Acquity UPLC BEH C18液相色谱柱(50×2.1 mm,1.7μm);
    2)质谱离子源
    选用ESI离子源进行检测分析。
    3)质谱仪器
    美国Waters公司的Premier XE串联质谱仪。
    4)其他硬件
    美国Millipore公司超纯水机(Milli-Q)。
    德国IKA公司T18均质机
    德国Eppendorf公司5418离心机
    德国赛多利斯CPA225D电子天平
    安捷伦公司的固相萃取装置,配八方公司的真空泵。
    美国Organomation. Associates. Inc.的N-EVAP 111氮吹仪。
    瑞士BUCHI公司的R-215旋转蒸发仪。
    5)试剂及耗材
    CNWBOND LC-C18 500mg/6mL 固相萃取柱。
    dSPE纯化管(AOAC 2007.01) 150mgMgSO4,50mgPSA,2mL
    农残级氯化钠
    无水硫酸镁,98.0%,extra pure
    Carbon-GCB 石墨化炭黑,120-400目
    PSA QuEChERS专用超洁净填料40-60um,60A
    dSPE萃取管(AOAC 2007.01)6g硫酸镁,1.5g乙酸钠,50mL
    二、标准品配制
    氯吡脲,99.2%,Dr.Ehrenstorfer公司生产;
    乙烯利,98.0%, Dr.Ehrenstorfer公司生产;
    4-氯苯氧乙酸钠,98%,试剂。
    2,4-二氯苯氧乙酸钠,98.5%,Dr.Ehrenstorfer公司生产。
    标准储备溶液:称取4种农药标准品各10.0mg(精确到0.01mg),分别用甲醇稀释并定容至100mL,配制成质量浓度为100mg/L的单一标准储备液,于冰箱保存。
    标准工作溶液:吸取标准储备溶液10.0mL到100mL的容量瓶中,用水稀释定容至刻度,浓度为10.0mg/L。分别吸取氯吡脲0.5mL、4-氯苯氧乙酸5mL、2,4-二氯苯氧乙酸5mL、乙烯利50mL到100mL容量瓶中,用水稀释至刻度。配得混合标准工作溶液浓度为浓度6。分别吸取混合标准工作溶液2.0、1.0、0.2、0.1、0.02mL于一组10mL的容量瓶中,用水定容至刻度,得到浓度为浓度5、浓度4、浓度3、浓度2、浓度1的混合标准溶液,如表1所示:
    表1

    三、检测
    (1)样品预处理:
    在植物生长调节剂残留分析中,必须采取适当的提取方法,以有效提取且不引起样品中植物生长调节剂残留的变化,同时提取剂对后续的质谱分析不引起干扰。
    由于不同种类植物生长调节剂残留的理化性质差异很大,提取溶剂的选择是前处理过程最重要的环节。比较甲醇、丙酮、乙腈作为提取溶剂的提取效率,实验结果表明,果蔬中的色素易溶于丙酮,对分析造成一定的干扰,而甲醇和乙腈对待测化合物有较高的提取效率,提取色素相对较少。采取乙腈/水(50/50,V/V)、乙腈/水(75/25,V/V)、乙腈和甲醇/水(50/50,V/V)、甲醇/水(75/25,V/V)、甲醇进行提取,并对其提取效率进行研究。由于乙烯利在pH=3.0以下稳定,在pH=4.0以上容易分解放出乙烯,所有提取液都预先用甲酸溶液调节pH=3.0。通过试验比较,本发明优选使用乙腈作为溶剂。
    本具体实施例中,从市场上随机分别选取选取猕猴桃、草莓、枇杷、芒果、小橘子、大橘子、香蕉、红色小番茄、黄色小番茄、大番茄、提子、豆芽、桂圆、苹果、皇冠梨、雪梨、黄瓜、葡萄等果蔬各200g,取可食部分分别放入烧杯中,匀浆3min;
    (2)提取净化:
    分别称取匀浆后的15g样品于50mL离心管中,加入含1%乙酸的15mL乙腈(已预先用甲酸调至pH=3.0),剧烈振摇1min后,加入6.0g无水硫酸镁和1.5g无水醋酸钠,剧烈振摇1min后,4000rpm离心3min,取1mL上清液加入150mg无水硫酸镁和50mg PSA,剧烈振摇1min后,4000rpm离心3min,取上清液,过0.22um滤膜后,得到提取液;
    (3)将净化步骤得到的提取液进入液相色谱串联质谱仪检测;
    检测结果如表2所示:
    表2


    所述步骤(3)中液相色谱串联质谱仪的的仪器分析条件如下:
    色谱分离条件如下:
    流动相A:5mmol/L的醋酸铵+0.01%甲酸;pH=5
    流动相B:甲醇;
    流速:0.25mL/min
    梯度程序如表3所示:
    表3

    质谱条件如下:
    离子源:电喷雾离子源(ESI);
    检测方式:多反应监测(MRM);
    毛细管电压:3.0kV;
    二级锥孔电压:2V;
    透镜电压:0.2V;
    离子源温度:110℃;
    锥孔反吹气流速:50L/h;
    脱溶剂气温度:380℃;
    脱溶剂气流速:600L/h;
    低质量数分辨率:13;
    高质量数分辨率:13;
    离子能量:2.2;
    光电倍增管电压:650V;
    碰撞池压力:1.0e-3;
    各植物生长调节剂的监测离子对(m/z)、锥孔电压、碰撞能量、离子化方式见表4:
    表4

    四、方法的线性范围和检出限分析
    取4种植物生长调节剂的标准储备液,用草莓空白样品作为基质,分别配制成质量浓度如表1中所示的标准曲线,在选定的液相色谱串联质谱仪的的仪器分析条件下进行测定,测定结果参见图6-11,以待测化合物的峰面积为纵坐标,待测化合物的浓度为横坐标进行回归分析,得到线性回归方程、线性范围及相关系数见表5。由表3可知,各化合物的线性关系良好,相关系数r值均不低于0.999。根据3倍信噪比计算方法检出限??杉喙叵凳?.999,大于0.995,线性良好。检出限分别为0.5μg/kg至100μg/kg,满足国家限量标准的灵敏度要求。
    表5
    。

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