• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 23
    • 下载费用:30 金币  

    重庆时时彩tt平台: 一种正品半夏的检测方法.pdf

    关 键 词:
    一种 正品 半夏 检测 方法
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    摘要
    申请专利号:

    CN201410044895.9

    申请日:

    2014.02.07

    公开号:

    CN103969361A

    公开日:

    2014.08.06

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20140207|||公开
    IPC分类号: G01N30/02; G01N30/06 主分类号: G01N30/02
    申请人: 成都中医药大学
    发明人: 李敏; 卢道会; 杨小艳; 敬勇
    地址: 611137 四川省成都市温江区柳台大道1166号
    优先权: 2013.02.04 CN 201310044687.4
    专利代理机构: 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 代理人: 李高峡;全学荣
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410044895.9

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2015.09.30|||2014.09.03|||2014.08.06

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种半夏的检测方法,它是以HPLC指纹图谱进行测定的,包括如下操作步骤:(1)取待见样品,粉碎后,以水或甲醇为溶剂提取,制备供试品溶液;(2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中,测定即可,色谱条件如下:检测波长:254~265nm;色谱柱:十八烷基键合硅胶为填充剂;流动相:以甲醇-水系统洗脱。本发明正品半夏的检测方法精密度高、重现性好、准确,操作方便,成本低廉,市场应用前景良好。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种半夏的检测方法,其特征在于:它是以HPLC进行测定,包括如下操作步骤:
    (1)取待检半夏样品,粉碎后,以水或甲醇为溶剂提取,制备供试品溶液;
    (2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中,测定即可,色谱条件如下:检测波长:254~265nm;
    色谱柱:十八烷基键合硅胶为填充剂;
    流动相:以甲醇-水系统洗脱。

    2.  根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤(1)中,所述溶剂为水。

    3.  根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤(1)中,所述溶剂的用量为样品的10倍(v/w)。

    4.  根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤(1)中,所述提取的方法为超声提取,提取时间45min。

    5.  根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤(2)中,检测波长为256nm。

    6.  根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤(2)中,检测柱温为30℃,流速为1ml/min。

    7.  根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤(2)中,所述洗脱为梯度洗脱,梯度条件如下:


    8.  一种正品半夏的检测方法,其特征在于:它包括如下步骤:
    a、取待检样品;采用权利要求1~7任意一项所述HPLC方法检测;
    b、分析图谱;
    c、若图谱的特征峰共有11个,其保留时间分别为:1号峰:5.802min;2号峰:6.782min;3号峰:7.155min;4号峰:8.535min;5号峰:12.516min; 6号峰:13.876min;7号峰:15.903min;8号峰:19.129min;9号峰:20.227min;10号峰:30.182min;11号峰:38.628min;即可判定为正品半夏。

    9.  根据权利要求8所述的正品半夏的检测方法,其特征在于:正品半夏的HPLC图谱如图24所示。

    说明书

    说明书一种正品半夏的检测方法
    技术领域
    本发明涉及正品半夏的检测方法,属于中药领域。
    背景技术
    半夏来源于天南星科植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)breit.的干燥块茎。我国半夏资源分布广泛,国内除吉林、黑龙江、内蒙古、新疆、青海、西藏以外,其余省区均有分布。
    近几年半夏的市场需求量持续增加,而野生资源逐年减少,加之半夏人工栽培发展缓慢,使得半夏资源蕴藏量和产量都在大幅下降。另外,近几年半夏药材的行情较好,在其流通环节出现了很多伪品、混淆品,给半夏药材的质量、用药的安全性及有效性带来了很大的冲击。通过对中药材市场的调研发现,半夏的伪品主要为水半夏,主要的混淆品有虎掌南星、天南星、山珠半夏等,近年来发现也有以天南星小块茎充当半夏使用的情况,现行中国药典的方法又很难区别半夏及其混伪品。目前报道的半夏检测方法,其中HPLC法流动相选择及洗脱的梯度条件各不相同;需寻找一种更为简便、准确、可靠的方法鉴定正伪半夏方法。
    发明内容
    为了解决上述问题,本发明提供了一种正品半夏的检测方法。
    本发明半夏的检测方法,它是以HPLC指纹图谱进行测定的,包括如下操作步骤:
    (1)取待见样品,粉碎后,以水或甲醇为溶剂提取,制备供试品溶液;
    (2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中,测定即可,色谱条件如下:检测波长:254~265nm;
    色谱柱:十八烷基键合硅胶为填充剂;
    流动相:以甲醇-水系统洗脱。
    其中,步骤(1)中,所述溶剂为水。
    其中,步骤(1)中,所述提取的方法为超声提取,提取时间45min。
    其中,步骤(2)中,检测波长为256nm。
    其中,步骤(2)中,检测柱温为30℃,流速为1ml/min。
    步骤(2)中,所述洗脱为梯度洗脱,梯度条件如下:

    本发明还提供了一种正品半夏的检测方法,它包括如下步骤:
    a、取待检样品;采用权利要求1~7任意一项所述HPLC方法检测;
    b、分析图谱;
    c、若图谱的特征峰共有11个,其保留时间分别为:1号峰:5.802min;2号峰:6.782min;3号峰:7.155min;4号峰:8.535min;5号峰:12.516min;6号峰:13.876min;7号峰:15.903min;8号峰:19.129min;9号峰:20.227min;10号峰:30.182min;11号峰:38.628min;即可判定为正品半夏。
    其中,正品半夏的HPLC图谱如图24所示。
    本发明方法可以准确检测待检样品是否正品半夏,准确度高,且检测方法简单、快速,可以替代传统检测方法,具有良好的应用前景。
    显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
    以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
    附图说明
    图1制样方法的检测结果;
    图2制样方法二检测结果;
    图3制样方法三检测结果;
    图4制样方法四检测结果;
    图5制样方法五检测结果;
    图6样品220nm色谱图;
    图7样品225nm色谱图;
    图8样品254nm色谱图;
    图9样品256nm色谱图;
    图10样品265nm色谱图;
    图11样品275nm色谱图;
    图12乙腈-水(35:65)色谱图;
    图13甲醇-0.01%醋酸溶液(10:90)色谱图;
    图14梯度洗脱(甲醇-水)色谱图;
    图15梯度洗脱条件1色谱图;
    图16梯度洗脱条件2色谱图;
    图17梯度洗脱条件3色谱图;
    图18梯度洗脱条件4色谱图;
    图19梯度洗脱条件5色谱图;
    图20精密度试验色谱图,(S1~S5为五次进样色谱图;R为共有模式图);
    图21重现性试验色谱图(S1~S5为五份供试品色谱图;R为共有模式图)
    图22稳定性试验色谱图(S1:0h;S2:4h;S3:8h;S4:12h;S5:24h;R:共有模式图)
    图23半夏HPLC指纹图谱
    图24半夏HPLC指纹图谱共有模式
    图25水半夏HPLC指纹图谱
    图26水半夏HPLC指纹图谱共有模式
    图27虎掌南星HPLC指纹图谱
    图28虎掌南星HPLC指纹图谱共有模式图
    图29白附子HPLC指纹图谱
    图30白附子HPLC指纹图谱共有模式图
    图31半夏腺苷、鸟苷图谱(1:腺苷2:鸟苷)
    具体实施方式
    实验材料和试剂
    1.仪器、试剂与试药
    安捷伦1200液相色谱系统:包括1200泵,DAD检测器,waterse2695液相色谱仪,waters e2998检测器,Millipore Milli-Q超纯水系统,岛津十万分之一电子天平。Brasson超声波清洗仪;KQ-100超声波清洗仪。
    甲醇、乙醇等试剂均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司),HPLC用甲醇、乙腈均为进口色谱纯试剂。
    2.实验材料
    半夏半夏样品经成都中医药大学李敏教授鉴定,均为天南星科植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit的干燥块茎,样品收集情况见表1,编号 B1~B18。
    水半夏水半夏样品经成都中医药大学李敏教授鉴定,均为天南星科植物鞭檐犁头尖Typhonium flagelliforme(Lodd.)Blume.的干燥块茎,样品收集情况见表1,编号S1~S12。
    虎掌南星虎掌南星样品经成都中医药大学李敏教授鉴定,均为天南星科植物虎掌Pinelliae Pedatisecta Schott的干燥块茎,样品收集情况见1,编号N1~N16。
    白附子白附子样品经成都中医药大学李敏教授鉴定,均为天南星科植物独角莲Typhonium giganteum Engl.的干燥块茎,样品收集情况见1,编号F1~F5。
    表1 半夏、水半夏、白附子及虎掌南星药材收集情况

    实施例1 检测方法参数优选
    一、样品制备方法的筛选
    1、实验方法
    制样方法一:取半夏药材2g(过40目筛),加石油醚20ml,超声提取30min,弃去石油醚,加95%的乙醇20ml,超声提取3次,提取液合并蒸干,定容至2ml。
    制样方法二:取半夏药材2g(过40目筛),加水20ml超声提取30min,取上清液,蒸干后用水定容至2ml。
    制样方法三:取半夏药材2g(过40目筛),加甲醇20ml超声提取30min,取上清液,蒸干后用甲醇定容至2ml。
    制样方法四:取半夏药材2g(过40目筛),加70%乙醇20ml超声提取30min,取上清液,蒸干后用甲醇定容至2ml。
    制样方法五:取半夏药材2g(过40目筛),加乙醚20ml超声提取30min,过滤,滤液蒸干后用甲醇定容至2ml。
    2、实验结果
    如图1~5所示,通过对以上五种制样方法的考察发现,制样方法二和三出峰较多,其分离度较好。另外,制样方法二为水制样,并且其基线较平,故选用制样方法二。
    在此基础上,又对该方法的提取时间、提取方式(超声和回流)进行了优化,最后确定的制样方法为:精密称取半夏粉末约2g(过40目筛),加纯净水20ml,超声提取45min,离心,取上清液蒸干,然后用纯净水溶解,定容至10ml。用0.22μm微孔滤膜过滤,即得供试品溶液。
    二、测定波长的筛选
    1、检测方法
    半夏成分复杂,为了能充分反应其质量信息的完整性,本试验对检测波长进行了筛选,对同一样品在不同波长下进行了样品的色谱图比较。
    2、检测结果
    (结果见图6~11),由色谱图可见,在检测波长256nm条件下色谱峰数量多、分离度好、峰吸光度较大并且峰形好,故选择256nm作为测定波长。
    三、流动相的筛选
    1、检测方法
    本试验对流动相进行了筛选,分别采用乙腈-水(35:65)、甲醇-0.01%醋酸溶液(10:90)和梯度洗脱(甲醇-水)三种方式,流速为1.0mL/min,检测波长为256nm,进样量20μl。
    2、检测结果
    色谱图见图12~14,梯度洗脱分离效果好且出峰较多,故选用梯度洗脱,并在此条件的基础上对洗脱梯度进行了调整和优化。
    四、洗脱条件的筛选
    1、检测方法
    梯度洗脱条件1:流动相A相为甲醇,B相为水溶液,梯度洗脱条件见表2。流速:1.0mL/min,检测波长:256nm,进样量10μl,HPLC色谱图见图15。
    表2 梯度洗脱条件1

    梯度洗脱条件2:流动相A相为甲醇,B相为水,梯度洗脱条件见表3。流速:1.0mL/min,检测波长:256nm,进样量10μl,HPLC色谱图见图16。
    表3 梯度条件2

    梯度洗脱条件3:流动相A相为甲醇,B相为水,梯度洗脱条件见表4,流速:1.0mL/min,检测波长:256nm,进样量10μl,结果见色谱图17。
    表4 梯度洗脱条件3

    梯度洗脱条件4:流动相A相为甲醇,B相为水,梯度洗脱条件见表5,流速:1.0mL/min,检测波长:256nm,进样量10μl,结果见色谱图18。
    表5 梯度洗脱条件4

    梯度洗脱条件5:流动相A相为甲醇,B相为水,梯度洗脱条件见表6,流速:1.0mL/min,检测波长:256nm,进样量10μl,结果见色谱图19。
    表6 梯度洗脱条件5

    小结:综合上述试验结果,梯度洗脱条件5的色谱峰分离效果好、基线较平、保留时间适中。因此色谱条件确定为:以甲醇-水为流动相,按表6中 的梯度变化进行洗脱,检测波长为256nm,柱温为30℃,流速为1ml/min,记录时间为40min。
    五、色谱条件
    采用月旭AQ-C18(200×4.6mm,5μm)色谱柱;以甲醇为流动相A,水为流动相B,进行梯度洗脱;检测波长为256nm;柱温为30℃;流速为1.0mL/min;记录时间:40min。
    实施例2 本发明方法的方法学考察
    采用实施例2优选的方法,进行方法学考察:
    1、精密度试验
    取同一半夏样品粉末,粉末过四号筛,按上述方法制样,进样5次,每次10μl,按照上述梯度条件测定,考察各色谱峰保留时间的一致性,各主要色谱峰保留时间的RSD<2%;利用相似度评价软件对5个图谱进行了相似度分析,测得的色谱指纹图谱与其所得的共有模式图的相似度分别为:0.978、0.989、0.983、0.992、0.985,均大于0.97,表明仪器稳定,精密度良好。见图20。
    2、重现性试验
    取同一半夏药材粉末5份,粉末过四号筛,按上述制样方法及色谱条件进行测定,记录色谱图,考察各色谱峰保留时间的一致性,各主要色谱峰保留时间的RSD<2%。利用相似度评价软件对色谱指纹图谱进行了相似度分析,测得的色谱指纹图谱与其所得的共有模式图的相似度分别为:0.993、0.996、0.993、0.998、0.994,相似度均大于0.99,表明本实验方法重复性好。见图21。
    3、稳定性试验
    取同一半夏供试品溶液,分别于0、4、8、12、24h测定一次,记录特征图谱,考察各色谱峰保留时间的一致性,各主要色谱峰保留时间的RSD<2%;利用相似度评价软件对各色谱图进行了相似度分析,测得的色谱指纹图谱与其所得的共有模式图的相似度分别为:0.993、0.987、0.992、0.996、0.987,相似度均大于0.98,表明供试品溶液在24h内稳定。见色谱图22。
    实施例3 本发明方法检测正品半夏
    1、实验方法
    采用实施例2优选的方法制备供试品溶液,精密吸取10μl,分别注入液相色谱仪,按筛选后的色谱条件测定,记录45min的HPLC图,采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)”进行数据分析处理, 将半夏、水半夏、白附子、虎掌南星样品的图谱分别匹配并生成对照图谱,再将样品测得的色谱峰与参照图谱进行自动匹配,生成半夏、水半夏、白附子、虎掌南星指纹图谱共有模式。
    以标准物质腺苷与鸟苷进行标定,结果显示,在半夏、水半夏、虎掌南星、白附子的HPLC指纹图谱共有模式图R中,在与腺苷、鸟苷相应的保留时间上具有相同的色谱峰(见图31)。
    2、实验结果
    半夏及其伪品、近缘品种的指纹图谱、共有模式图见图23~30。
    1、半夏与其伪品水半夏的HPLC指纹图谱鉴别
    通过对半夏与水半夏的共有模式图对比可知,半夏所共有的特征峰为11个,水半夏为10个;在保留时间0~10min之间,半夏出现特征峰4个,水半夏3个,在相对保留时间10~25min之间,半夏出现特征峰5个,水半夏6个,在相对保留时间25~40min之间,半夏出现特征峰2个,而水半夏仅有一个,因此可以根据出峰的时间,对半夏及水半夏进行有效的鉴别。
    2、半夏与其近缘品种虎掌南星的HPLC指纹图谱鉴别
    通过对半夏与虎掌南星的共有模式图对比可知,半夏所共有的特征峰为11个,虎掌南星为8个;在保留时间0~10min之间,半夏出现特征峰4个,虎掌南星3个,在相对保留时间10~25min之间,半夏出现特征峰5个,虎掌南星4个,在相对保留时间25~40min之间,半夏出现特征峰2个,而虎掌南星仅有1个;尤其是虎掌南星的8号峰,为虎掌南星的特征峰,根据出峰的时间及虎掌南星的特征峰进行有效的鉴别。
    3、半夏与其近缘品种白附子的HPLC指纹图谱鉴别
    通过对半夏与白附子的共有模式图对比可知,半夏所共有的特征峰为11个,白附子为9个;在保留时间0~10min之间,半夏出现特征峰4个,白附子3个,在相对保留时间10~25min之间,半夏出现特征峰5个,白附子4个,在相对保留时间25~40min之间,半夏出现特征峰2个,而白附子出现2个;白附子的8、9号峰为其所特有的特征峰。因此,可以通过出峰时间及白附子的特征峰进行有效的鉴别。
    综上,本发明检测方法精密度高、重现性好,可以准确鉴定正品半夏,操作简便,成本低廉,具有良好的应用前景和经济效益。

    关于本文
    本文标题:一种正品半夏的检测方法.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-6143695.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
  • 重庆时时预测开奖号码 加拿大pc28预测手机版 八戒中特网平特一肖460707 11选5缩水稳赚技巧 飞艇冠军5码一期计划 双色球开奖数据下载 澳洲三分彩计划软件 双色球中奖分布 大赢家江西时时 黑彩计划软件 北京pk赛车计划软件那个好 七星彩规则 最新时时技巧大全 时时彩后二大小单双稳赚法 5分快3计划软件下载 七乐彩下载