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    重庆时时彩怎么玩: 荆防颗粒的检测方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201410174688.5

    申请日:

    2014.04.28

    公开号:

    CN103954724A

    公开日:

    2014.07.30

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/90申请日:20140428|||公开
    IPC分类号: G01N30/90; G01N30/02 主分类号: G01N30/90
    申请人: 四川逢春制药有限公司
    发明人: 钟茂团; 黎勇; 吴诗惠; 古莉
    地址: 618100 四川省德阳市中江县南华镇迎宾路9号
    优先权:
    专利代理机构: 成都蓉信三星专利事务所(普通合伙) 51106 代理人: 刘克勤
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410174688.5

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2015.05.27|||2014.08.27|||2014.07.30

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及一种荆防颗粒的检测方法,包括性状、鉴别、检查、含量测定项目,其中,鉴别包括荆芥的鉴别、独活的鉴别、川芎的鉴别、枳壳的鉴别、大叶柴胡的鉴别,含量检测是对盐酸麻黄碱的含量测定,本发明针对目前还没有一套完善的检测方法对其有效成份进行相应的检测,导致无法监测不法厂商少投或不投相应原料和监测伪品大叶柴胡的混入,本发明制定了科学合理、切实可行的成分鉴别和含量测定方法,保证了荆防颗粒的临床疗效,让几种药材有了明确的质量指标,确保了荆防颗粒中各药材的使用,从而保证了药品的疗效;另一方面,柴胡的伪品大叶柴胡也能有效的检测,避免了大叶柴胡中含有的柴胡毒素和乙酰柴胡毒素这两种有毒成份危害患者的健康。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种荆防颗粒的检测方法,包括性状、鉴别、检查、含量测定项目,其特征在于:所述鉴别包括荆芥的鉴别、独活的鉴别、川芎的鉴别、枳壳的鉴别、大叶柴胡的鉴别,含量测定为盐酸麻黄碱的含量测定,检测方法包括以下:
    (1)荆芥的鉴别
    取本品10g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取荆芥对照药材1g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=9~11:2~4:1.5~2.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (2)独活的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取独活对照药材1g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=18~22:4~6:1.5~2.5为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (3)川芎的鉴别
    取本品10g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,另取川芎对照药材1g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=4~6:1.5~2.5:0.7~1.3为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (4)枳壳的鉴别
    取本品10g,加丙酮30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取盐酸麻黄碱对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液, 作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,选择氯仿:甲醇:水=11~15:6~8:1.5~2.5的混合液,在10℃以下放置过夜的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (5)大叶柴胡的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚30ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥至1ml,作为供试品溶液,另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品,加甲醇制成每1ml含柴胡毒素1mg和乙酰柴胡毒素1mg的对照品溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正已烷:乙酸乙酯=6~10:0.5~1.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;
    (6)盐酸麻黄碱的含量测定
    用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈:0.2%磷酸=17.5:82.5为流动相,柱温35℃,检测波长为283nm,流速1.0ml/min,理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5000,称取盐酸麻黄碱对照品0.00503g于50ml量瓶内,加甲酰胺溶解并稀释至刻度,摇匀,吸取该对照品溶液5ml于10ml量瓶中,加甲酰胺溶解并稀释至刻度,即得每1ml含50.30μg的盐酸麻黄碱对照品溶液,取本品1.0g,加甲酰胺50ml,称定重量,超声处理15分钟,放冷,再称定重量,用甲酰胺补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液,精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定峰面积,按外标法计算,即得。

    2.  根据权利要求1所述的荆防颗粒的检测方法,其特征在于:更具体的鉴别方法如下:
    (1)荆芥的鉴别
    取本品10g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取荆芥对照药材1g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=10:3:2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (2)独活的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取独活对照药材1g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=20:5:2为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (3)川芎的鉴别
    取本品10g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,另取川芎对照药材1g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=5:2:1为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (4)枳壳的鉴别
    取本品10g,加丙酮30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取盐酸麻黄碱对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,选择氯仿:甲醇:水=13∶7∶2的混合液,在10℃以下放置过夜的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (5)大叶柴胡的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚30ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥至1ml,作为供试品溶液,另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品,加甲醇制成每1ml含柴胡毒素1mg和乙酰柴胡毒素1mg的对照品溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正已烷:乙酸乙酯=8:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点。

    3.  根据权利要求1所述的荆防颗粒的检测方法,其特征在于:步骤(6)中的盐酸麻黄碱对照品使用五氧化二磷干燥了24小时。

    4.  根据权利要求1所述的荆防颗粒的检测方法,其特征在于:步骤(6)中的微孔滤膜孔径为0.45μm。

    说明书

    说明书荆防颗粒的检测方法
    技术领域
    本发明涉及一种荆防颗粒的检测方法。
    背景技术
    荆防(冲剂)颗粒是《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册收载的品种,标准编号为WS3-B-0328-90,处方为荆芥、防风、羌活、独活、柴胡、前胡、川芎、枳壳、茯苓、桔梗、甘草,是纯中药和颗粒剂。它具有发汗解表,散风祛湿的作用。临床上用于治疗感冒风寒,头痛身痛,恶寒无汗,鼻塞流涕,咳嗽。是目前市场上用于治疗感冒风寒,头痛身痛,恶寒无汗,鼻塞流涕,咳嗽的常用药品。但是到目前为止,还没有一套完善的检测方法对其有效成份进行相应的检测,那么可能导致不法厂商在生产药品时不严格按照处方的剂量配料,肆意减少价格高的原料,致使药品的疗效明显下降,影响药品的安全有效,严重损害患者的利益。另一方面,处方中用到药材柴胡,因其使用量较大,而其产量有限,所以其伪品大叶柴胡也被有意或者无意混入使用,但是大叶柴胡中含有柴胡毒素和乙酰柴胡毒素,这两种成份都是有毒物质,已经多次发生因服用混有大叶柴胡的药品而中毒的药害事件,所以控制大叶柴胡很有必要?!渡蕉揭┕ひ怠?003年第二十二卷第5期《对中国药典2000年版柴胡检验方法的补充》一文也探讨过药典上大叶柴胡药材的鉴别控制问题,但是其方法有明显的不足:放置24小时,检测时间太长,不利于药品生产过程控制和药品质量监督检查;因柴胡毒素和乙酰柴胡毒素含量相对较低,点样仅2μl,点样量过少,影响检验的准确性;因柴胡毒素和乙酰柴胡毒素含量相对较低,在紫外灯下检视,不用显色剂显色来观察,观察效果不好。更主要的是荆防颗粒处方药味多、所含成份复杂,其它成份会产生混淆和干扰。其它含有柴胡的中成药也是一样,因其处方药味多,成份复杂,其中要控制大叶柴胡十分困难,所以,寻找一种更好的办法来控制大叶柴胡的混入已是当务之急。
    发明内容
    本发明的目的,是提供一种荆防颗粒的检测方法,可有效地监测不法厂商少投或不投相应原料,同时监测伪品大叶柴胡的混入,防止服用后中毒的药害事件的发生,使该药品安全有效,并保证了银柴颗粒的临床疗效。
    本发明的技术方案如下:
    本荆防颗粒的处方:荆芥75g、防风75g、羌活75g、独活75g、柴胡75g、前胡75g、川芎75g、枳壳75g、茯苓75g、桔梗75g、甘草25g。
    本荆防颗粒的检测方法,包括性状、鉴别、检查、含量测定项目,其中,鉴别包括荆芥的鉴别、独活的鉴别、川芎的鉴别、枳壳的鉴别、大叶柴胡的鉴别、含量测定是盐酸麻黄碱的含量测定,检测方法包括以下:
    荆芥的鉴别是:以荆芥为对照药材,以石油醚-氯仿-甲醇为展开剂,用薄层色谱法鉴别;
    独活的鉴别是:以独活为对照药材,以石油醚-氯仿-甲醇为展开剂,用薄层色谱法鉴别;
    川芎的鉴别是:以川芎为对照药材,以石油醚-氯仿-甲醇为展开剂,用薄层色谱法鉴别;
    枳壳的鉴别是:以枳壳为对照药材,以氯仿-甲醇-水放置过夜的下层液为展开剂,用薄层色谱法鉴别;
    大叶柴胡的鉴别是:以柴胡毒素、乙酰柴胡毒素为对照品,以正已烷-乙酸乙酯为展开剂,用薄层色谱法鉴别。
    盐酸麻黄碱的含量测定:是以盐酸麻黄碱为对照品,用高效液相色谱法行含量测定。
    检测方法包括以下:
    (1)荆芥的鉴别
    取本品10g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取荆芥对照药材1g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=9~11:2~4:1.5~2.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (2)独活的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取独活对照药材1g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=18~22:4~6:1.5~2.5为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (3)川芎的鉴别
    取本品10g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,另取川芎对照药材1g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=4~6:1.5~2.5:0.7~1.3为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (4)枳壳的鉴别
    取本品10g,加丙酮30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取盐酸麻黄碱对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,选择氯仿:甲醇:水=11~15:6~8:1.5~2.5的混合液,在10℃以下放置过夜的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (5)大叶柴胡的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚30ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥至1ml,作为供试品溶液,另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品,加甲醇制成每1ml含柴胡毒素1mg和乙酰柴胡毒素1mg的对照品溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正已烷:乙酸乙酯=6~10:0.5~1.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;
    (6)盐酸麻黄碱的含量测定
    用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈:0.2%磷酸=17.5:82.5为流动相,柱温35℃,检测波长为283nm,流速1.0ml/min,理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5000,称取使用五氧化二磷干燥了24小时的盐酸麻黄碱对照品0.00503g于50ml量瓶内,加甲酰胺溶解并稀释至刻度,摇匀,吸取该对照品溶液5ml于10ml量瓶中,加甲酰胺溶解并稀释至刻度,即得每1ml含50.30μg的盐酸麻黄碱对照品溶液,取本品1.0g,加甲酰胺50ml,称定重量,超声处理15分钟,放冷,再称定重量,用甲酰胺补足减失的重量,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液,精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定峰面积,按外标法计算,即得。
    本品每袋含枳壳以盐酸麻黄碱(C27H32O14)计,不得少于7.5mg。
    更具体的检测方法如下:
    (1)荆芥的鉴别
    取本品10g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取荆芥对照药材1g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=10:3:2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (2)独活的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取独活对照药材1g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=20:5:2为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (3)川芎的鉴别
    取本品10g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,另取川芎对照药材1g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=5:2:1为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (4)枳壳的鉴别
    取本品10g,加丙酮30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取盐酸麻黄碱对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,选择氯仿:甲醇:水=13∶7∶2的混合液,在10℃以下放置过夜的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (5)大叶柴胡的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚30ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥至1ml,作为供试品溶液,另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品,加甲醇制成每1ml含柴胡毒素1mg和乙酰柴胡毒素1mg的对照品溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正已烷:乙酸乙酯=8:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;
    (6)盐酸麻黄碱的含量测定
    用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈:0.2%磷酸=17.5:82.5为流动相,柱温35℃,检测波长为283nm,流速1.0ml/min,理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5000,称取使用五氧化二磷干燥了24小时的盐酸麻黄碱对照品0.00503g于50ml量瓶内,加甲酰胺溶解并稀释至刻度,摇匀,吸取该对 照品溶液5ml于10ml量瓶中,加甲酰胺溶解并稀释至刻度,即得每1ml含50.30μg的盐酸麻黄碱对照品溶液,取本品1.0g,加甲酰胺50ml,称定重量,超声处理15分钟,放冷,再称定重量,用甲酰胺补足减失的重量,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液,精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定峰面积,按外标法计算,即得本品的含量。
    本品每袋含枳壳以盐酸麻黄碱(C27H32O14)计,不得少于7.5mg。
    性状:本品为棕色的颗粒;气香,味甜、微苦。
    检查:应符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2010年版一部附录ⅠC)。
    本发明所述的展开剂之比和流动相之比均以体积比计。
    本发明的技术效果:
    本发明通过对荆防颗粒中的荆芥的鉴别、独活的鉴别、川芎的鉴别、枳壳的鉴别、大叶柴胡的鉴别、盐酸麻黄碱的含量测定,使处方中的荆芥、独活、川芎、枳壳等主要成份都得到了有效的监测,另一方面,柴胡的伪品大叶柴胡也被有效的检测,避免了大叶柴胡中含有的柴胡毒素和乙酰柴胡毒素这两种有毒成份危害患者的健康。本发明能更好更全面地监测荆防颗粒的质量,而且能有效地控制不法厂商生产伪劣荆防颗粒,从而保证了药品的疗效,保证了药品的安全,?;ち嘶颊叩睦?,本方法科学合理、切实可行。
    本发明对含量测定进行了研究,具体实验资料如下:
    含量测定方法的考察
    1、仪器与试药:
    1.1HP1100高效液相色谱仪,配置为G1311A四元泵、G1313A自动进样器、G1316A柱温箱、G1314A紫外检测器、HP化学工作站。
    1.2色谱柱:BDS—C18柱Kromasil(250mm×4.6mm)。
    1.3盐酸麻黄碱对照品(由中国生物制品研究所提供,批号为0722-201008)、甲醇(色谱纯)、磷酸(分析纯)、水为自制二次蒸馏水。
    2、色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.2%磷酸(17.5:82.5)为流动相;柱温35℃,检测波长为283nm;流速1.0ml/min;理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5000。
    3、对照品溶液的制备:精密称取经五氧化二磷干燥24小时的盐酸麻黄碱对照品0.00503g于50ml量瓶内,加甲酰胺溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取该对照品溶液5ml于10ml量瓶中,即得每1ml含50.30μg的盐酸麻黄碱对照品溶液。
    4、供试品溶液的制备:取本品1.0g,精密称定,精密加甲酰胺50ml,称定重量,超声处理15分钟,放冷,再称定重量,用甲酰胺补足减失的重量,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
    5、测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定峰面积,按外标法计算,即得。
    6、方法学考察
    6.1、色谱条件的选择与系统适用性试验
    用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.2%磷酸(17.5:82.5)为流动相;柱温为35℃;流速为1.0ml/min;选择测定波长为283nm,用紫外检测器检测。在此条件下,盐酸麻黄碱与其他组分均能达到基线分离,实验表明:供试品中有与盐酸麻黄碱对照品保留时间一致的峰,阴性对照无干扰。
    6.2线性范围的考察:
    精密称取经五氧化二磷干燥24小时的盐酸麻黄碱对照品0.00503g于50ml量瓶内,加甲酰胺溶解并稀释至刻度,摇匀。精密吸取该对照品溶液1、3、5、7、9ml于5个10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪,测定,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标进行回归处理,得回归方程:
    A=32.9204098C-1.9912226(n=5),γ=1.00000
    结果表明盐酸麻黄碱在进样量0.1006μg-0.9054μg之间呈良好的线性关系,结果见表1。
    表1盐酸麻黄碱标准曲线试验结果

    6.3精密度的考察:
    将盐酸麻黄碱对照品溶液(浓度为50.03μg/ml)重复进样五次,测定峰面积,盐酸麻黄碱峰面积平均值=1654.4886,RSD=0.24%。结果表明:精密度良好,结果见表2。
    表2精密度考察结果

    6.4重复性试验
    精密称取同一批号样品(050601)5份,按供试品溶液制备方法制备,依法测定其含量,平均值为11.557mg/袋,RSD=0.62%。结果见表3,试验表明:测定方法的重复性良好。
    表3:样品重复性试验

    6.5加样回收实验
    分别精密称取批号为050601(已知含量为2.30mg/g)的样品约0.50g,置6个50ml的量瓶中,再分别加入盐酸麻黄碱对照品溶液(浓度为1.12mg/ml)1.0ml,按上述供试品溶液制备方法和色谱条件,制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪中,测定含量,以下列公式计算回收率,结果见表4,试验结果表明:回收率在96.64%~102.3%之间,加样回收良好。

    表4盐酸麻黄碱加样回收试验结果

    6.6稳定性试验:将批号为(050601)的样品按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,并分别于0小时、1小时、2小时、4小时、8小时,精密吸取10μl注入高效液相色谱仪中,测定峰面积积分值,结果见表5,结果表明:在本实验条件下,盐酸麻黄碱含量在8小时内稳定。
    表5盐酸麻黄碱稳定性试验


    由上可见:3批荆防颗粒盐酸麻黄碱含量每袋在4.606mg-4.899mg之间,比较稳定。
    经过以上实验,证明本发明的方法合理可行。
    具体实施方式
    实施例1:
    【处方】荆芥75g  防风75g  羌活75g  独活75g  柴胡75g  前胡75g  川芎75g枳壳75g  茯苓75g  桔梗75g  甘草25g
    【制法】以上十一味,荆芥、防风、羌活、独活、前胡、川芎和枳壳分别提取挥发油,川芎、枳壳蒸馏后的水溶液另器收集;川芎、枳壳的药渣与茯苓,照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法,用上述水溶液配成25%乙醇溶液作溶剂,进行渗漉;荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草等三味加水煎煮二次,每次1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏;合并漉液和稠膏,混匀,静置,滤过,在80~85℃的温度下,滤液浓缩成相对密度为1.30的清膏,取清膏1份,加蔗糖6份,混匀制成颗粒,干燥,加入上述荆芥等挥发油,混匀,即得。
    【性状】本品为棕色的颗粒;气香,味甜、微苦。
    【鉴别】(1)荆芥的鉴别
    取本品10g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取荆芥对照药材1g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=9:2:1.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (2)独活的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取独活对照药材1g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=18:4:1.5为展开剂, 展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (3)川芎的鉴别
    取本品10g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,另取川芎对照药材1g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=4:1.5:0.7为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (4)枳壳的鉴别
    取本品10g,加丙酮30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取盐酸麻黄碱对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,选择氯仿:甲醇:水=11:6:1.5的混合液,在10℃以下放置过夜的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (5)大叶柴胡的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚30ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥至1ml,作为供试品溶液,另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品,加甲醇制成每1ml含柴胡毒素1mg和乙酰柴胡毒素1mg的对照品溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正已烷:乙酸乙酯=6:0.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;
    【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2010年版一部附录ⅠC)。
    【含量测定】照高效液相色谱法测定。
    用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈:0.2%磷酸=17.5:82.5为流动相,柱温35℃,检测波长为283nm,流速1.0ml/min,理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5000,称取盐酸麻黄碱对照品0.00503g于50ml量瓶内,加甲酰胺溶解并稀释至刻度,摇匀,吸取该对照品溶液5ml于10ml量瓶中,加甲酰胺溶解并稀释至刻度,即得每1ml含50.30μg的盐酸麻黄碱对照品溶液,取本品1.0g,加甲酰胺50ml,称定重量,超声处理15分钟,放冷,再称定重量,用甲酰胺补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液,精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪, 测定峰面积,按外标法计算,即得本品的含量。
    本品每袋含枳壳以盐酸麻黄碱(C27H32O14)计7.9mg,不少于7.5mg。
    实施例2:
    本实施例中,除鉴别方法不同之外,其余检测方法均与实施例1相同,具体鉴别方法如下:
    (1)荆芥的鉴别
    取本品10g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取荆芥对照药材1g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=10:3:2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (2)独活的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取独活对照药材1g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=20:5:2为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (3)川芎的鉴别
    取本品10g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,另取川芎对照药材1g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=5:2:1为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (4)枳壳的鉴别
    取本品10g,加丙酮30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取盐酸麻黄碱对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,选择氯仿:甲醇:水=13∶7∶2的混合液,在10℃以下放置过夜的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (5)大叶柴胡的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚30ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥至1ml,作为供试品溶液,另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品,加甲醇制成每1ml含柴胡毒素1mg和乙酰柴胡毒素1mg的对照品溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正已烷:乙酸乙酯=8:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点;
    实施例3:
    本实施例中,除鉴别方法不同之外,其余检测方法均与实施例1相同,具体鉴别方法如下:
    (1)荆芥的鉴别
    取本品10g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取荆芥对照药材1g,加乙醚50ml,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=11:4:2.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (2)独活的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取独活对照药材1g,加60~90℃石油醚40ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=22:6:2.5为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (3)川芎的鉴别
    取本品10g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液,另取川芎对照药材1g,加甲醇30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚:氯仿:甲醇=6:2.5:1.3为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
    (4)枳壳的鉴别
    取本品10g,加丙酮30ml,超声处理20分钟,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解, 作为供试品溶液,另取盐酸麻黄碱对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,选择氯仿:甲醇:水=15:8:2.5的混合液,在10℃以下放置过夜的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
    (5)大叶柴胡的鉴别
    取本品10g,加60~90℃石油醚30ml,浸泡10分钟,超声处理15分钟,滤过,滤液挥至1ml,作为供试品溶液,另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品,加甲醇制成每1ml含柴胡毒素1mg和乙酰柴胡毒素1mg的对照品溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正已烷:乙酸乙酯=10:1.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,不显相同颜色的斑点。

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