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    重庆时时彩带人的骗局: 利用液相色谱串联质谱测定血红蛋白浓度的方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201410174460.6

    申请日:

    2014.04.28

    公开号:

    CN103954717A

    公开日:

    2014.07.30

    当前法律状态:

    驳回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):G01N 30/88申请公布日:20140730|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/88申请日:20140428|||公开
    IPC分类号: G01N30/88 主分类号: G01N30/88
    申请人: 重庆医科大学附属儿童医院
    发明人: 邹琳; 余朝文; 张娟; 袁召建; 苗静琨; 刘浩; 万科星; 刘珊
    地址: 400014 重庆市渝中区中山二路136号
    优先权:
    专利代理机构: 北京元本知识产权代理事务所 11308 代理人: 黎昌莉
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410174460.6

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2017.03.15|||2014.08.27|||2014.07.30

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的驳回|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及仪器分析技术领域,具体涉及利用液相色谱串联质谱测定血红蛋白浓度的方法。该方法包括以下步骤:A、取血红蛋白样品进行分解,得珠蛋白多肽链的裂解片段;B、对所述裂解片段进行分离,以分离获得的一条或多条裂解片段为标志肽段,利用质谱进行定量测试;C、设立标准血红蛋白浓度梯度,根据现有血红蛋白浓度测定法,建立质谱响应强度与血红蛋白浓度的线性回归方程,将样品质谱响应强度值带入方程计算,即得样品的血红蛋白浓度。该方法由于不直接测定完整的血红蛋白分子,故本法在血液标本不做任何前期处理且保存时间较长的情况下,依然能够准确测定标本采集时的血红蛋白浓度。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种测定血红蛋白浓度的方法,其特征在于,包括以下步骤:
    A、取血红蛋白样品进行分解,得珠蛋白多肽链的裂解片段;
    B、对所述裂解片段进行分离,以分离获得的一条或多条裂解片段为标志肽段,利用质谱进行定量测试;
    C、设立已知浓度的血红蛋白浓度梯度,按照本方法进行测定,建立质谱响应强度与血红蛋白浓度的线性回归方程,将待测样品质谱响应强度值带入方程计算,即得样品的血红蛋白浓度。

    2.  根据权利要求1所述的测定血红蛋白浓度的方法,其特征在于:所述标志肽段为SEQ ID NO:1~11中的一条或多条。

    3.  根据权利要求1所述的测定血红蛋白浓度的方法,其特征在于:所述步骤B采用液相色谱串联质谱完成裂解片段的分离和定量测试。

    4.  根据权利要求3所述的测定血红蛋白浓度的方法,其特征在于:所述液相色谱串联质谱进行测试时,设置的主要参数如下:
    液相色谱自动进样器参数:冲洗体积:200ul,推针行程:50mm,冲洗流度:35ul/sec,进样流速:5ul/sec,排气时间:25min,浸润时间:3sec,冲洗模式:Before and after,冷却温度:15℃,控制瓶推针行程:52mm;
    液相色谱采样时间程序:0.10s时流速为0.25ml/min,0.11s时流速为0.020ml/min,0.40s时流速为0.085ml/min,0.45s时流速为0.60ml/min,0.55s时停止;液相色谱流速为0.15ml/min;压力允许范围为0~15Mpa;
    质谱仪参数:气帘气:25MPa,碰撞气:5MPa,喷雾电压:5500V,离子化温度:350℃,雾化气:30MPa,加热辅助气:40MPa,界面加热器:on,扫描模式:Positive。

    5.  根据权利要求1至4任一项所述的测定血红蛋白浓度的方法,其特征在于:所述步骤B中,采用质谱的多重反应监测模式,选择两个标志肽段,定量分析每个标志肽段的一对母离子/子离子组合对;或者选择一个标志肽段,定量 分析该标志肽段的两对母离子/子离子组合对。

    6.  根据权利要求5所述的测定血红蛋白浓度的方法,其特征在于:所述标志肽段的序列如SEQ ID NO:1所示,定量分析该标志肽段729.4/262.1m/z和729.4/430.2m/z的两对母离子/子离子组合对。

    7.  根据权利要求1至4任一项所述的测定血红蛋白浓度的方法,其特征在于:所述血红蛋白样品为干血滤纸片标本。

    8.  利用血红蛋白浓度测定装置测定血红蛋白浓度的方法,其特征在于,所述测定装置为液相色谱仪串联的三重四级杆质谱仪,包括以下测定步骤:用酶消化血红蛋白,得珠蛋白多肽链的裂解片段;用液相色谱仪串联的三重四级杆质谱仪对裂解片段进行分离和定量分析,采用质谱的多重反应监测模式,以珠蛋白α链的裂解片段为标志肽段,选择两个标志肽段,定量分析每个标志肽段的一对母离子/子离子组合对;或者选择一个标志肽段,定量分析该标志肽段的两对母离子/子离子组合对;设立已知浓度的血红蛋白浓度梯度,按照本方法进行测定,建立质谱响应强度与血红蛋白浓度的线性回归方程,将样品质谱响应强度值带入方程计算,即得样品的血红蛋白浓度。

    9.  基于血红蛋白的裂解片段作为标志肽段在血红蛋白浓度测定中的应用。

    10.  根据权利要求9所述的应用,其特征在于:所述标志肽段为SEQ ID NO:1~11中的一条或多条。

    说明书

    说明书利用液相色谱串联质谱测定血红蛋白浓度的方法
    技术领域
    本发明涉及仪器分析技术领域,具体涉及利用液相色谱和质谱测定血液中血红蛋白浓度的方法,尤其能测定微量且经较长时间保存的血液标本血红蛋白的浓度。
    背景技术
    血红蛋白作为红细胞内的一种机能蛋白,氧气结合在铁原子上,被血液运输。血红蛋白在生物体内,起传输氧气、分解H2O2、传递电子等与氧和能量代谢有关的重要活动。由于临床上白血病、贫血及心脏病等常伴有血红蛋白异常,因此,人血清中血红蛋白含量的测定是评价人体健康水平的一个重要指标。
    已知,血红蛋白(Hemoglobin,Hb)由一个珠蛋白和四个血红素(又称亚铁原卟啉)组成,每个血红素又由四个吡咯类亚基组成一个环,环中心为一个亚铁离子。每个珠蛋白则有四条多肽链组成,珠蛋白的四条肽链各不相同。成年人可由2条α链和2条β链构成,称HbA,胎儿由2条α链2条γ链构成,称HbF,出生后不久由HbA取代。珠蛋白的每条多肽链与一个血红素连接,构成血红蛋白的一个单体,或者说亚单位(即亚基)。
    基于此,人们建立了大量分析血红蛋白浓度的方法,包括光度法、荧光法、电化学法等。具体如:氰化高铁法(HiCN法),其原理为:血红蛋白在高铁氰化钾和氰化钾的作用下,生成极为稳定的氰化高铁血红蛋白(红色),其颜色深浅与血红蛋白的含量成正比;氰化高铁血红蛋白在540nm波长下,毫克分子消光系数为44,据此,用分光光度法测其吸光度,从而得出血红蛋白的定量测定。除此以外,还有如氧合血红蛋白法、各型血红蛋白仪测定等。
    在遗传代谢病筛查、贫血以及营养改善状况等的普查中,往往涉及多个样 本的采集。出于成本和可行性的考虑,对这些样本的测试难以及时进行,通常需累积一定样本后,到特定的地点集中进行测试。其间,由于样本的长期保存、长距离运输以及环境温湿度的影响,到测试时血红蛋白已经遭到破坏。由于上述已有方法均是基于血红蛋白结构完整情况下的生物活性或理化性质而进行的检测,当血液标本保持时间过长,可能发生溶血或血红蛋白裂解时,测定的结果就难以反映标本采集时血红蛋白的真实浓度,且实验操作繁琐,测试效率低。
    液质联用(LC-MS)又叫液相色谱-质谱联用技术,它以液相色谱作为分离系统,质谱为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离,被离子化后,经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开,经检测器得到质谱图。液质联用体现了色谱和质谱优势的互补,将色谱对复杂样品的高分离能力,与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来,实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析,而且也简化了样品的前处理过程,使样品分析更简便,因此广泛应用于药物分析、食品分析和环境分析等许多领域。
    串联三重四级杆质谱仪对于液相色谱-质谱/质谱应用来说是权威的分析工具,分析者可以采用最少的样品制备步骤,对少量化合物进行高通量的定量分析。该质谱仪通过连续放置多个分析器来实现空间串联的多级质谱分析。每个分析器有以下单独的作用:第一个四极杆(Q1)根据设定的质荷比范围扫描和选择所需的离子;第二个四极杆(Q2),也称碰撞池,用于聚集和传送离子,在所选择离子的飞行途中,引入碰撞气体,例如氮气等;第三个四极杆(Q3)用于分析在碰撞池中产生的碎片离子。在母离子扫描中,Q1测定母离子,Q2碰撞池产生碎片离子,Q3测定某个特定的碎片离子,因此可在非常复杂的混合物中监测某种特定的分子。
    基于上述原因和现有技术,本发明探索了血红蛋白浓度测定的新方法。
    发明内容
    有鉴于此,本发明提供一种基于血红蛋白的裂解片段作为标志肽段在血红蛋白浓度测定中的应用。由于采用血红蛋白的裂解片段作为标志肽段进行测试, 故不要求血红蛋白的构象完整,能测定微量且经较长时间保存的血液标本的血红蛋白浓度。
    进一步,所述应用为采用质谱测定血红蛋白浓度中的应用。
    进一步,所述应用为采用液相色谱串联质谱测定血红蛋白浓度中的应用。
    进一步,所述标志肽段为SEQ ID NO:1~11中的一条或多条。
    具体地,本发明提供一种测定血红蛋白浓度的方法,能测定微量且经较长时间保存的血液标本的血红蛋白浓度。
    为实现上述目的,本发明的技术方案为:
    一种测定血红蛋白浓度的方法,包括以下步骤:
    A、取血红蛋白样品进行分解,得珠蛋白多肽链的裂解片段;
    B、对所述裂解片段进行分离,以分离获得的一条或多条裂解片段为标志肽段,利用质谱进行定量测试;
    C、设立已知浓度的血红蛋白浓度梯度,按照本方法进行测定,建立质谱响应强度与血红蛋白浓度的线性回归方程,将待测样品质谱响应强度值带入方程计算,即得样品的血红蛋白浓度。
    步骤A对血红蛋白的分解可采用酶选择性的进行切割,如胰蛋白酶能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断,特异性的获得赖氨酸或精氨酸结尾的肽链片段。
    步骤B所述对裂解片段的分离,可采用色谱分离技术进行,如液相色谱、薄层色谱等,或者采用电泳技术进行分离。分离后,选取珠蛋白多肽链裂解后产生的特征性多肽片段作为标志肽段,利用串联质谱仪测定标志肽段的浓度,再通过血红蛋白分子和标志肽段的摩尔比关系计算血红蛋白的浓度。进一步,所述标志肽段为SEQ ID NO:1~11中的一条或多条。所述SEQ ID NO:1~11所示的氨基酸序列为珠蛋白α链的裂解片段,由于所有血红蛋白分子均含有两条α链,故优选其裂解片段作为标志肽段。
    进一步,由于目前液相色谱-质谱联用技术的进步,优选液相色谱串联质谱技术,简单快速的即完成裂解片段的分离和定量测试。优选地,所述液相色谱 串联质谱进行测试时,设置的主要参数如下:
    液相色谱自动进样器参数:Rinsing Volume(冲洗体积):200ul,Needle Stroke(推针行程):50mm,Rinsing Speed(冲洗流度):35ul/sec,Sampling Speed (进样流速):Purge Time5ul/sec,(排气时间):25min,Rinse Dip Time(浸润时间):3sec,Rinse Mode(冲洗模式):Before and after,Cooler Temperature (冷却温度):15℃,Control Vial Needle Stroke(控制瓶推针行程):52mm;
    液相色谱采样时间程序:0.10s时流速为0.25ml/min,0.11s时流速为0.020ml/min,0.40s时流速为0.085ml/min,0.45s时流速为0.60ml/min,0.55s时停止;液相色谱流速为0.15ml/min;压力允许范围为0~15Mpa;
    质谱仪参数:气帘气:25MPa,碰撞气:5MPa,喷雾电压:5500V,离子化温度:350℃,雾化气:30MPa,加热辅助气:40MPa,界面加热器:on,扫描模式:Positive。
    这些参数的设置可使血红蛋白的裂解片段很好的分离,并使进入质谱后获得良好的响应值,可选择性的对标志肽段进行定量分析。相关参数的设置并不限于此,根据获得的不同裂解片段,以及选取的标志肽段的不同,可相应进行液相色谱和质谱仪参数的调整。
    步骤C中关于回归方程的建立,如:不同浓度标志肽段的质谱响应强度积分值同标志肽段浓度线性相关,此可转换为肽段的浓度值,进一步计算得到样本中血红蛋白的浓度。血红蛋白浓度已有浓度的确定,可采用氰化高铁血红蛋白(HiCN)法、氧合血红蛋白法、各型血红蛋白仪测定方法等进行。
    在质谱进行测试时,可采用质谱的多重反应监测(MRM)模式,对一个或多个标志肽段及其多个母离子/子离子组合对进行分析。进一步,优选两个标志肽段,定量分析每个标志肽段的一对母离子/子离子组合对;或者选择一个标志肽段,定量分析该标志肽段的两对母离子/子离子组合对。每个母离子/子离子组合对可相应建立一个回归方程,两个回归方程计算的结果可相互印证。
    进一步,选择SEQ ID NO:1所示的序列为标志肽段,定量分析其729.4/262.1m/z和729.4/430.2m/z的两对母离子/子离子组合对。当选用这两对母离子/子离 子组合对时,优选的MRM扫描参数见表1:
    表1α珠蛋白链T1(729.4m/z)标志肽段MRM扫描参数

    进一步,由于本发明方法的实施不依赖血红蛋白的完整构象,故对采集的样本保存要求不高,如采用干血滤纸片标本作为血红蛋白样本的保存形式,便于长期保存和远距离运输,且成本低。
    本发明还提供一种利用血红蛋白浓度测定装置测定血红蛋白浓度的方法,该方法能测定微量且经较长时间保存的血液标本血红蛋白的浓度,且操作简便,测试效率高。
    为实现上述目的,本发明的技术方案为:
    利用血红蛋白浓度测定装置测定血红蛋白浓度的方法,所述测定装置为液相色谱仪串联的三重四级杆质谱仪,包括以下测定步骤:用酶消化血红蛋白,得珠蛋白多肽链的裂解片段;用液相色谱仪串联的三重四级杆质谱仪对裂解片段进行分离和定量分析,采用质谱的多重反应监测模式,以珠蛋白α链的裂解片段为标志肽段,选择两个标志肽段,定量分析每个标志肽段的一对母离子/子离子组合对;或者选择一个标志肽段,定量分析该标志肽段的两对母离子/子离子组合对;设立已知浓度的血红蛋白浓度梯度,按照本方法进行测定,建立质谱响应强度与血红蛋白浓度的线性回归方程,将样品质谱响应强度值带入方程计算,即得样品的血红蛋白浓度。
    上述未带测定装置的测定血红蛋白浓度的方法所涉及的优化条件及参数,也适用于本部分带测定装置的测定血红蛋白浓度的方法。
    本发明SEQ ID NO:1~11所示的序列,除上述描述的具体方式外,不排除以其他方式应用于液相色谱串联质谱测定血红蛋白的浓度。
    本发明的有益技术效果是:
    本发明方法利用血液标本中血红蛋白裂解产生的裂解片段即可检测血红蛋 白发生裂解前的浓度,在血液标本保存时间较长、不做任何前期处理的情况下,依然能够准确测定标本采集时的血红蛋白浓度??刹捎酶裳酥狡瓯?,方便保存和长距离递送。另外,本发明方法使用的仪器与我国普遍推广的遗传代谢病筛查共用一套检测仪器,一次样本采集后,即可完成遗传代谢病筛查和血红蛋白相关病的筛查。故本发明方法可方便的应用于人群,特别是婴幼儿血红蛋白浓度的测定,有助于做出健康状态的评价,给出贫血与否及营养改善相关的指导性建议,具有广阔的临床转化与应用前景。
    附图说明
    图1液相色谱串联质谱筛选血红蛋白珠蛋白α链标志肽段的质谱图;
    图2珠蛋白α链T1(729.4m/z)标志肽段碎片离子的质谱图;
    图3珠蛋白α链T1(729.4m/z)标志肽段的质谱MRM模式鉴定图谱(其中,3-A为各离子对稳定性图谱,不同的线条代表不同的离子对;3-B为各离子对质谱MRM扫描图谱);
    图4峰面积积分法定量分析MRM质谱检测T1(729.4m/z)标志肽段的积分图(其中,4-A为T1(729.4/262.1m/z)组合对,4-B为T1(729.4/430.2m/z)组合对)。
    具体实施方式
    以下参照附图对本发明的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法,按照常规条件进行。
    1.所需仪器及试剂
    仪器:串联三重四级杆质谱仪(API3200)(AB公司,美国)、岛津液相色谱仪(SHIMADZU LC-20AD)(色谱柱:XSelect CSH130C183.5μm)、3.2mm打孔钳、离心机(Gnencompany1580R)、计算机。
    耗材:HPLC级乙腈(Fisher Scientific)、甲酸(Sigma-Aldrich)、TPCK-Treated胰蛋白酶(Sigma-Aldrich)、0.22μm过滤功能的96孔酶标板(MILLI-Q)、普通 96孔反应板、移液器(EPPENDORF)、质谱/液相串联Peek管(0.1mm,WC016316)。
    试剂:碳酸氢铵用质谱级纯水配制成1mol/L的稀释液;高纯度胰蛋白酶(Sigma-Aldrich)用1mol/L碳酸氢铵溶液溶解,制成浓度为5g/L的稀释液;甲酸溶液配制成12g/L溶液;液相色谱流动相为乙腈:水(体积比1:1),含1.2g/L的甲酸溶液。
    2.方案步骤
    (1)标本采集
    取末梢血或静脉血标本一滴,约50μl,滴注于Whatman滤纸片,自然扩散并晾干,制成干血滤纸片标本,封口膜封存,4℃长期保存、待测。用自封口袋做安全防护的情况下,可以长距离快递运输,解决直接递送血液标本的不便。
    (2)前处理及血红蛋白萃取
    ①将干血滤纸片标本用标准打孔器打出直径3.2㎜圆形滤纸血片于96孔过滤板板中,加入200μl去离子水,室温低速振摇,充分溶解血液。
    ②取溶血液适量,转移至新的96孔板,加入乙腈(Fisher Scientific,HPLC级)15μl、12g/L甲酸溶液(Sigma-Aldrich)20μl,快速振摇,使蛋白变性。
    ③在混合液中加入TPCK-treated胰蛋白酶溶液(Sigma-Aldrich)5μl,低速振摇混匀,封口膜封存,置37℃孵箱中酶消化。
    ④取96孔过滤板,依次加入乙腈、去离子水共135μl(乙腈:去离子水=1:1),消化后的反应液15μl,瞬时离心,待测。
    (3)α珠蛋白标志肽段质谱测定
    ①液相色谱-串联质谱联用的激活与创建。
    A、液相色谱条件:按表2设置自动进样器参数,按表3设置采样时间程序。
    B、质谱条件:离子源:ESI(电喷雾离子源);扫描方式:Positive(正离子扫描);检测方式:MRM(多反应检测);干燥气:N2;其他参数按表4设置。
    表2液相色谱自动进样器参数

    表3液相色谱采样时间程序

    表4质谱仪参数

    其中,液相色谱Binary Flow0.15ml/min;Pressure limits0~15Mpa。
    ②血红蛋白标志物筛选。
    珠蛋白链的消化产物都含有该链的多个标志片段,这些片段均可用于诊断指标设计。以珠蛋白α链为例,水解产物产生不同质荷比的多肽片段,其质谱图如图1所示,具体序列及质荷比如表5所示,共14个序列,编号为T1~T14,这些片段在质谱仪足够灵敏度的情况下,均可作为标志肽段用于血红蛋白的分析(编号T8为一个氨基酸,在去除样品中游离氨基酸干扰的情况下,也可以作为标志肽段)。其中,编号T1~T7、T9、T11~T13的11个序列依次对应序列表SEQ ID NO:1~11所示的序列,这些片段的特异性区别大,可优选作为标志肽段使用。
    表5血红蛋白α链胰蛋白酶消化后的标志肽段

    由图1可知,珠蛋白α链的T1片段响应值最高,即质谱检测最为灵敏。以α链T1(729.4 m/z)为例,在串联质谱MRM检测模式下,通过定量分析其碎片离子组成,间接分析血红蛋白的浓度情况。T1(729.4m/z)标志肽段碎片离子的质谱图如图2所示,具体序列及质荷比如表6所示。T1(729.4m/z)标志肽段的质谱MRM模式鉴定图谱见图3。
    表6血红蛋白α链T1(729.4m/z)标志肽段碎片离子组成

    后述步骤选取T1(729.4/262.1m/z)和T1(729.4/430.2m/z)两对母离子/子离子组合对,用于标本血红蛋白浓度的计算与评价。
    ③质谱仪多重反应监测(MRM)模式参数的优化。
    根据选定的标志肽段,设立质谱仪MRM检测模式的参数,包括DP(去簇 电压)、EP(射入电压)、CE(碰撞电压)、CEP(碰撞室入口电压)、CXP(碰撞室出口电压)等,并根据需要修改参数的优化范围、步长。分别设定Q1母离子及Q3子离子扫描参数。具体地,T1(729.4/262.1m/z)和T1(729.4/430.2m/z)两对母离子/子离子组合对的扫描参数见表1。
    ④数据转换。
    质谱仪原始数据显示的是仪器对不同浓度多肽片段的响应强度(Intensity)。利用MultiQuant2.0.2软件,以峰面积积分法对标志肽段进行分析,计算峰面积分值。峰面积积分法定量分析MRM质谱检测T1(729.4m/z)标志肽段的积分图见图4,其中4-A为T1(729.4/262.1m/z)组合对,4-B为T1(729.4/430.2m/z)组合对。
    (4)数据分析与血红蛋白浓度计算。
    不同浓度肽段的质谱响应强度积分值同肽段浓度线性相关,此可转换为肽段的浓度值,进一步计算得到样本中血红蛋白的浓度。
    本实施例以已知浓度的血红蛋白标准品,设立浓度梯度,以T1(729.4m/z)为标志物,计算出质谱响应强度与血红蛋白浓度的线性回归方程如下:
    ①T1(729.4/262.1m/z)
    Y=aX+b(R2=0.983)
    取均值,a=0.256,SD=0.009;b=28.722,SD=4.473
    其中Y为血红蛋白浓度(g/L),X取值为质谱响应强度峰面积积分值*10-3)
    ②T1(729.4/430.2m/z)
    Y=aX+b(R2=0.985)
    取均值,a=0.142,SD=0.005;b=27.941,SD=4.276
    其中Y为血红蛋白浓度(g/L),X取值为质谱响应强度峰面积积分值*10-3)
    根据上述获得的质谱响应强度峰面积积分值,带入方程即得血红蛋白浓度值。上述两个回归方程计算的结果可相互印证。
    由于珠蛋白链的消化产物理论上都可以作为标志物用于诊断指标设计,以不同标志肽段计算的回归方程因质谱响应灵敏度的差异,截距和斜率会有差异, 但不影响最终浓度的计算。选择任何一个标志肽段,每次检测时均需加入标准品,建立回归方程;并设立高值、低值质控品。根据本批次建立的回归方程计算血红蛋白浓度,尽量减少系统误差。利用建立好的检测方案,通过液相色谱系统,实现检测标本的高通量进样,一次实验,可同批检测至少192个样品。串联三重四级杆质谱仪(API3200)是国内遗传代谢病筛查的主要平台,在此平台上进行血红蛋白浓度测定,建议的线性检测范围为30~200g/L。
    3.比较试验
    采集10个测试样本,分别按照上述“2.方案步骤”中本发明的测试方法,以及现有的仪器法血红蛋白浓度测试,在第1、10、30、60天对同一样本进行测试(4℃保存条件),统计结果见表7。
    表7本发明方法与仪器法血红蛋白法在不同时间对比测试血红蛋白的浓度

    其中,本发明方法取T1(729.4/262.1m/z)和T1(729.4/430.2m/z)两对母离子/子离子组合对用于样本血红蛋白浓度的计算与评价,利用相关样本的秩和检验统计分析第1、10、30、60天测得的相同样本的血红蛋白浓度中位数差异,不拒绝原假设,认为各组数据中位数无显著差异。秩和检验统计分析仪器法相应数据,拒绝原假设,即第30天测得的血红蛋白浓度与第一天测得的相同样本的血红蛋白浓度中位数存在显著性差异。由于血液标本4℃保存60天时已发生部分溶血,血红蛋白发生降解,浓度下降明显,故未纳入统计。
    最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。



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