• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 30
    • 下载费用:30 金币  

    重庆时时彩178: 一种心可舒胶囊的含量测定及鉴别方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201410215955.9

    申请日:

    2014.05.22

    公开号:

    CN103969372A

    公开日:

    2014.08.06

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20140522|||公开
    IPC分类号: G01N30/02 主分类号: G01N30/02
    申请人: 河北省食品药品检验院
    发明人: 刘永利; 赵振霞; 王敏; 冯丽; 王钰宁
    地址: 050011 河北省石家庄市富强大街16号
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410215955.9

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2016.03.02|||2014.09.03|||2014.08.06

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种对心可舒胶囊中丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、葛根素等4种有效成分进行含量测定,对丹参、葛根进行特征图谱鉴别的方法及对粉葛和葛根进行鉴别的方法。本发明方法具有灵敏度高、重现性与稳定性好等特点,大大提高了检验效率,方便快捷,经济环保,可有效控制心可舒胶囊的质量。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种心可舒胶囊的含量测定方法,其特征在于所述含量测定方法由以下步骤组成:
    A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,作为对照品溶液;
    B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.1-1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%-80%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理10-60分钟,取出,放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    C、液相色谱条件:C18色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.05-0.2%的三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱条件为0分钟到2分钟,流动相A的比例为1%-10%,流动相B的比例为99%-90%;2分钟到30分钟,流动相A的比例升高至20%-40%,流动相B的比例降低至80%-60%;柱温为20-50℃;流速:0.2-1.0ml/min;检测波长为270-310nm;
    D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-10μl,注入液相色谱仪,以外标法分别计算各成分含量。

    2.  根据权利要求1所述的含量测定方法,其特征在于所述含量测定方法由以下步骤组成:
    A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,作为对照品溶液;
    B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理10分钟,取出,放冷,再称定重量,50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤 过,取续滤液,作为供试品溶液;
    C、液相色谱条件:C18色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.05%的三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱条件:0分钟到2分钟,流动相A的比例为1%,流动相B的比例为99%;2分钟到30分钟,流动相A的比例升高至20%,流动相B的比例降低至80%;柱温为20℃;流速:0.2ml/min;检测波长为270nm;
    D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,以外标法分别计算各成分含量。

    3.  根据权利要求1所述的含量测定方法,其特征在于所述含量测定方法由以下步骤组成:
    A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,作为对照品溶液;
    B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理60分钟,取出,放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    C、液相色谱条件:C18色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.2%的三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱条件:0分钟到2分钟,流动相A的比例为10%,流动相B的比例为90%;2分钟到30分钟,流动相A的比例升高至40%,流动相B的比例降低至60%;柱温为50℃;流速:1.0ml/min;检测波长为310nm;
    D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入液相色谱仪,以外标法分别计算各成分含量。

    4.  根据权利要求1所述的含量测定方法,其特征在于所述含量测定方法由以下步骤组成:
    A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,作为对照品溶液;
    B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    C、液相色谱条件:色谱柱为Acquity BEH C18(2.1×100mm,1.7μm);以乙腈为流动相A,以0.1%的三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱条件:0分钟到2分钟,流动相A的比例为3%,流动相B的比例为97%;2分钟到30分钟,流动相A的比例升高至28%,流动相B的比例降低至72%;柱温为25℃;流速:0.4ml/min;检测波长为287nm;
    D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μl,注入液相色谱仪,以外标法分别计算各成分含量。

    5.  一种心可舒胶囊的鉴别方法,其特征在于所述鉴别方法为葛根的特征图谱鉴别方法,该鉴别方法由以下步骤组成:
    (1)对照品溶液的制备同权利要求1中的步骤A、供试品溶液的制备同权利要求1中的步骤B、液相色谱条件同权利要求1中的步骤C;
    (2)葛根阴性对照溶液的制备:取不含葛根的阴性样品,研细,取0.1-1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50-80%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声10-60分钟,取出,放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根阴性对照溶液;
    (3)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加50-80%甲醇50ml,超声10-60分钟,取出,放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为葛根对照药材溶液;
    (4)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、葛根阴性对照溶液、葛根对照药材溶液各1-10μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,确定葛根的特征色谱峰为羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷。

    6.  根据权利要求5所述的鉴别方法,其特征在于所述鉴别方法由以下步骤组成:
    (1)对照品溶液的制备同权利要求2、3或4中的步骤A、供试品溶液的制备同权利要求2、3或4中的步骤B、液相色谱条件同权利要求2、3或4中的步骤C;
    (2)葛根阴性对照溶液的制备:取不含葛根的阴性样品,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根阴性对照溶液;
    (3)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液;
    (4)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、葛根阴性对照溶液、葛根对照药材溶液各3μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,确定葛根的特征色谱峰为羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷。

    7.  一种心可舒胶囊的鉴别方法,其特征在于所述鉴别方法为丹参的特征图谱鉴别方法,该鉴别方法由以下步骤组成:
    (1)对照品溶液的制备同权利要求1中的步骤A、供试品溶液的制备同权利要求1中的步骤B、液相色谱条件同权利要求1中的步骤C;
    (2)丹参阴性对照溶液的制备:取不含丹参的阴性样品,研细,取0.1-1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50-80%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声10-60分钟,取出,放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为丹参阴性对照溶液;
    (3)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、丹参阴性对照溶液各1-10μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,确定丹参的特征色谱峰为丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B。

    8.  根据权利要求7所述的鉴别方法,其特征在于所述鉴别方法由以下步骤组成:
    (1)对照品溶液的制备同权利要求2、3或4中的步骤A、供试品溶液的制备同权利要求2、3或4中的步骤B、液相色谱条件同权利要求2、3或4中的步骤C;
    (2)丹参阴性对照溶液的制备:取不含丹参的阴性样品,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为丹参阴性对照溶液;
    (3)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、丹参阴性对照溶液各3μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,确定丹参的特征色谱峰为丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B。

    9.  一种葛根与粉葛的鉴别方法,其特征在于所述鉴别方法由以下步骤组成:
    (1)液相色谱条件同权利要求1中的步骤步骤C;
    (2)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.1-1g,置具塞锥形瓶中,加50-80%甲醇50ml,超声10-60分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液;
    (3)粉葛对照药材溶液的制备:取粉葛对照药材0.1-1g,置具塞锥形瓶中,加50-80%甲醇50ml,超声10-60分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为粉葛对照药材溶液;
    (4)葛根药材溶液的制备:取葛根药材0.1-1g,置具塞锥形瓶中,加50-80%甲醇50ml,超声10-60分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根药材溶液;
    (5)粉葛药材溶液的制备:取粉葛药材0.1-1g,置具塞锥形瓶中,加50-80%甲醇50ml,超声10-60分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为粉葛药材溶液;
    (6)测定:精密吸取葛根对照药材、粉葛对照药材、葛根药材、粉葛药材溶液各1-10μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,葛根对照药材和葛根药材均有3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷;粉葛对照药材有葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷;粉葛药材只有葛根素、大豆苷。

    10.  根据权利要求9所述的鉴别方法,其特征在于该鉴别方法由以下步骤组成:
    (1)液相色谱条件同权利要求2、3或4中的步骤步骤C;
    (2)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液;
    (3)粉葛对照药材溶液的制备:取粉葛对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为粉葛对照药材溶液;
    (4)葛根药材溶液的制备:取葛根药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根药材溶液;
    (5)粉葛药材溶液的制备:取粉葛药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为粉葛药材溶液;
    (6)测定:精密吸取葛根对照药材、粉葛对照药材、葛根药材、粉葛药材溶液各1-10μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,葛根对照药材和葛根药材均有3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷;粉葛对照药材有葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷;粉葛药材只有葛根素、大豆苷。

    说明书

    说明书一种心可舒胶囊的含量测定及鉴别方法
    技术领域
    本发明涉及一种对心可舒胶囊中多种有效成分进行含量测定及特征图谱的鉴别方法,具体地说,是利用超高效液相色谱法(UPLC)法对心可舒胶囊中丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、葛根素等4种有效成分的含量进行测定及对丹参、葛根进行特征鉴别的一种方法。
    背景技术
    心可舒胶囊由丹参、葛根、三七、木香和山楂5味药组成,具有活血化瘀、行气止痛的功效。用于气滞血瘀型冠心病引起的胸闷、心绞痛、高血压、头晕、头痛、颈项疼痛及心律失常、高血脂等症。1998年收入《卫生部药品标准》中药成方制剂第十五册。目前,全国共有7家药品生产企业。
    心可舒胶囊现行标准为《卫生部药品标准》中药成方制第十五册(标准号为WS3-B-2856-98)及药典业字发[2004]389号文。本品质量标准主要收载有性状、鉴别与常规检查(详见表1心可舒胶囊现行标准检验项目),检验项目较少,只有鉴别与检查项,缺少含量测定等项目,且熊果酸为山楂中非专属性成分、原儿茶醛为丹参中的水解成分,以此两种成分对照实行薄层鉴别,专属性差,所以现行标准不能很好控制药品的质量。
    本发明就是为了克服上述缺陷,建立一种快速环保的检测方法来对心可舒胶囊中多种有效成分的含量进行控制,并对君药与臣药丹参、葛根进行了鉴别,从而保证药品质量。
    发明内容
    本发明目的是提供一种心可舒胶囊中丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、葛根素等4种有效成分的含量进行测定及对丹参、葛根进行特征鉴别的一种方法,该方法利用超高效液相色谱法(UPLC)法进行测定,该方法快速、环保,可有效控制药品质量。
    本发明提供一种心可舒胶囊的含量测定方法,该含量测定方法由以下步骤组成:
    A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,作为对照品溶液;
    B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.1-1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%-80%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理10-60分钟,取出,放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    C、液相色谱条件:C18色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.05-0.2%的三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱条件为0分钟到2分钟,流动相A的比例为1%-10%,流动相B的比例为99%-90%;2分钟到30分钟,流动相A的比例升高至20%-40%,流动相B的比例降低至80%-60%;柱温为20-50℃;流速:0.2-1.0ml/min;检测波长为270-310nm;
    D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-10μl,注入液相色谱仪,以外标法分别计算各成分含量。
    含量测定方法优选为:
    A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,作为对照品溶液;
    B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理10分钟,取出,放冷,再称定重量,50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    C、液相色谱条件:C18色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.05%的三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱条件:0分钟到2分钟,流动相A的比例为1%,流动相B 的比例为99%;2分钟到30分钟,流动相A的比例升高至20%,流动相B的比例降低至80%;柱温为20℃;流速:0.2ml/min;检测波长为270nm;
    D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,以外标法分别计算各成分含量。
    含量测定方法还优选为:
    A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,作为对照品溶液;
    B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理60分钟,取出,放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    C、液相色谱条件:C18色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.2%的三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱条件:0分钟到2分钟,流动相A的比例为10%,流动相B的比例为90%;2分钟到30分钟,流动相A的比例升高至40%,流动相B的比例降低至60%;柱温为50℃;流速:1.0ml/min;检测波长为310nm;
    D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入液相色谱仪,以外标法分别计算各成分含量。
    含量测定方法还优选为:
    A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,作为对照品溶液;
    B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声 (功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    C、液相色谱条件:色谱柱为Acquity BEH C18(2.1×100mm,1.7μm);以乙腈为流动相A,以0.1%的三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱条件:0分钟到2分钟,流动相A的比例为3%,流动相B的比例为97%;2分钟到30分钟,流动相A的比例升高至28%,流动相B的比例降低至72%;柱温为25℃;流速:0.4ml/min;检测波长为287nm;
    D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μl,注入液相色谱仪,以外标法分别计算各成分含量。
    本发明还提供了一种心可舒胶囊中葛根的特征图谱鉴别方法,该鉴别方法由以下步骤组成:
    (1)对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤A、步骤B、步骤C;
    (2)葛根阴性对照溶液的制备:取不含葛根的阴性样品,研细,取0.1-1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50-80%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声10-60分钟,取出,放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根阴性对照溶液;
    (3)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加50-80%甲醇50ml,超声10-60分钟,取出,放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为葛根对照药材溶液;
    (4)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、葛根阴性对照溶液、葛根对照药材溶液各1-10μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,确定葛根的特征色谱峰为3、4、5、6、7号峰;
    心可舒胶囊中葛根特征鉴别方法优选为:
    (1)对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤A、步骤B、步骤C;
    (2)葛根阴性对照溶液的制备:取不含葛根的阴性样品,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根阴性对照溶液;
    (3)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液;
    (4)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、葛根阴性对照溶液、葛根对照药材溶液各3μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,确定葛根的特征色谱峰为3、4、5、6、7号峰;
    本发明还提供一种心可舒胶囊中丹参的特征图谱鉴别方法,该鉴别方法由以下步骤组成:
    (1)对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤A、步骤B、步骤C;
    (2)丹参阴性对照溶液的制备:取不含丹参的阴性样品,研细,取0.1-1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50-80%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声10-60分钟,取出,放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为丹参阴性对照溶液;
    (3)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、丹参阴性对照溶液各1-10μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,确定丹参的特征色谱峰为1、2、8号峰。
    心可舒胶囊中丹参的特征鉴别方法优选为:
    (1)对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤A、步骤B、步骤C;
    (2)丹参阴性对照溶液的制备:取不含丹参的阴性样品,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的 重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为丹参阴性对照溶液;
    (3)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、丹参阴性对照溶液各3μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,确定丹参的特征色谱峰为1、2、8号峰。
    本发明还提供了一种葛根药材与粉葛药材的鉴别方法,该方法由以下步骤组成:
    (1)液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤步骤C;
    (2)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.1-1g,置具塞锥形瓶中,加50-80%甲醇50ml,超声10-60分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液;
    (3)粉葛对照药材溶液的制备:取粉葛对照药材0.1-1g,置具塞锥形瓶中,加50-80%甲醇50ml,超声10-60分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为粉葛对照药材溶液;
    (4)葛根药材溶液的制备:取葛根药材0.1-1g,置具塞锥形瓶中,加50-80%甲醇50ml,超声10-60分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根药材溶液;
    (5)粉葛药材溶液的制备:取粉葛药材0.1-1g,置具塞锥形瓶中,加50-80%甲醇50ml,超声10-60分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为粉葛药材溶液;
    (6)测定:精密吸取葛根对照药材、粉葛对照药材、葛根药材、粉葛药材溶液各1-10μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,葛根对照药材和葛根药材均有3、4、5、6、7号峰;粉葛对照药材有4、5、6、7号峰;粉葛药材只有4、7号峰。
    葛根药材与粉葛药材的鉴别方法优选为:
    (1)液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤步骤C;
    (2)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液;
    (3)粉葛对照药材溶液的制备:取粉葛对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为粉葛对照药材溶液;
    (4)葛根药材溶液的制备:取葛根药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml, 超声30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根药材溶液;
    (5)粉葛药材溶液的制备:取粉葛药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为粉葛药材溶液;
    (6)测定:精密吸取葛根对照药材、粉葛对照药材、葛根药材、粉葛药材溶液各1-10μl,注入液相色谱仪,对比色谱图,葛根对照药材和葛根药材均有3、4、5、6、7号峰;粉葛对照药材有4、5、6、7号峰;粉葛药材只有4、7号峰。
    为了验证测定含量方法的稳定性、准确性、专属性及系统适应性,对方法进行了以下方法学验证实验,并用该方法对葛根、丹参的特征图谱进行了确认,及用该方法区别葛根和粉葛,并建立区别特征,以确保该含量测定及鉴别方法可以作为心可舒胶囊的质量控制方法。
    一、心可舒胶囊的含量方法学考察
    1、色谱条件与系统适用性试验
    1.1色谱柱:Acquity BEH C18(2.1×100mm,1.7μm)
    1.2流动相:乙腈为流动相A,0.1%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度表见表1。
    表1流动相梯度洗脱表

    1.3检测波长:287nm。
    1.4柱温:25℃。
    1.5流速:0.4ml/min。
    2、溶液制备及测定方法
    2.1供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    2.2对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、 葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,即得。
    2.3测定方法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μl,注入液相色谱仪,测定,利用对照品色谱与供试品色谱峰面积分别计算各成分含量。
    3、专属性试验:按处方比例和制法制备不含丹参的阴性样品1和不含葛根的阴性样品2,按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液,分别精密吸取对照品溶液,供试品溶液与两种阴性对照溶液各3μl,注入超高效液相色谱仪,记录色谱峰。结果表明,方中其他药味不干扰丹参素钠、原儿茶醛、葛根素、丹酚酸B的测定,见图1。
    4、线性关系考察:精密量取浓度丹参素钠(浓度依次为:0.00369mg/ml、0.01845mg/ml、0.07380mg/ml、0.1476mg/ml、0.3690mg/ml)、原儿茶醛(浓度依次为:0.000487mg/ml、0.001948mg/ml、0.009741mg/ml、0.01948mg/ml、0.04871mg/ml)、葛根素(浓度依次为:0.04654mg/ml、0.1164mg/ml、0.2327mg/ml、0.5817mg/ml、1.1635mg/ml)、丹酚酸B(浓度依次为:0.00396mg/ml、0.01981mg/ml、0.03961mg/ml、0.07923mg/ml、0.3961)3μl,分别注入液相色谱仪,按拟定的色谱条件测定,以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。结果表明,丹参素钠在0.01107~1.107μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=13.269x-0.0061(r=0.9999);原儿茶醛在0.001461~0.146121μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=96.504x-0.0035(r=0.9999);葛根素在0.13962~3.49056μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=32.542x+0.0983(r=0.9999),丹酚酸B在0.01188~1.18845μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=31.244x-0.0165(r=0.9999)。实验结果见表2。
    表2心可舒胶囊四成分线性关系考察结果

    5、重复性试验:取同一批样品(批号110606),研细,取0.1g、0.5g、1.0g各三份,精密称定,按正文方法进行测定。结果表明,本方法重复性良好(结果见表3)。
    表3重复性试验结果

    6、回收率试验:取已知含量的样品(批号110606,丹参素钠含量:4.7599mg/g、原儿茶醛含量:0.5890mg/g、葛根素含量:l580mg/g、丹酚酸B含量:4.6732mg/g)粉末9份,每份约0.25g,精密称定,每三份为一组,分别加入用70%甲醇溶液配制的低、中、高三个浓度的对照品溶液50ml,按供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液。按拟定的色谱条件测定,计算回收率。结果见表4-7。表明本方法回收率较好。
    表4丹参素钠回收率试验结果

    表5原儿茶醛回收率试验结果

    表6葛根素回收率试验结果

    表7丹酚酸B回收率试验结果

    7、稳定性试验:取同一供试品溶液于0小时开始测定,以后每间隔一定时间测定1次,结果表明供试品溶液至少在24小时内稳定。
    8、样品含量测定:分别取四个不同生产企业的17批心可舒样品,按上述方法进行测定,结果见表8:
    表8:不同企业的17批心可舒胶囊含量测定结果(单位:mg/粒)

    通过以上实验可知,本发明建立的丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、葛根素的含量测定方法,灵敏度高、专属性强、准确度高、重复性好,可以客观的反映企业是否按处方投料及生产工艺是否稳定等情况,可作为控制样品质量的可靠方法。
    二、葛根特征峰的确认
    1、色谱条件与系统适用性试验
    1.1色谱柱:Acquity BEH C18(2.1×100mm,1.7μm)
    1.2流动相:乙腈为流动相A,0.1%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度表见表9:
    表9流动相梯度洗脱表

    1.3检测波长:287nm。
    1.4柱温:25℃。
    1.5流速:0.4ml/min。
    2、溶液的制备及测定方法
    2.1供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
    2.2对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素l50μg的混合溶液,即得。
    2.3葛根阴性对照溶液的制备:取不含葛根的阴性样品,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根阴性对照溶液。
    2.4葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70% 甲醇50ml,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液。
    3、葛根特征峰的确认
    精密吸取对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各3μl,注入液相色谱仪,进行色谱峰比对,建立了葛根的特征图谱。
    样品共有8个特征峰,经与对照品比对,1、2、4、8号峰分别确定为丹参素钠、原儿茶醛、葛根素、丹酚酸B四个成分,采用TOF对其余4个峰进行了归属,结果3、5、6、7号峰分别为3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷。因此可以确定供试品色谱图中的3、4、5、6、7号峰为葛根中成分,可以确定为葛根的特征峰(见图2)。
    为考察不同产地葛根药材中特征峰情况,我们收集了不同产地(安徽、北京、上海)的葛根药材进行了测定,结果不同产地的药材供试品色谱图中都有3、4、5、6、7号峰(见图3),说明选择供试品色谱图中的3、4、5、6、7号峰作为葛根的特征峰,能够准确、客观的反映企业是否按处方投料及生产工艺是否稳定等情况,可作为控制样品质量的可靠方法。
    三、丹参特征峰的确认
    1、色谱条件与系统适用性试验
    1.1色谱柱:Acquity BEH C18(2.1×100mm,1.7μm)
    1.2流动相:乙腈为流动相A,0.1%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度表见表10:
    表10流动相梯度洗脱表

    1.3检测波长:287nm。
    1.4柱温:25℃。
    1.5流速:0.4ml/min。
    2、溶液的制备及测定方法
    2.1供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
    2.2对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,即得。
    2.3丹参阴性对照溶液的制备:取不含丹参的阴性样品,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为丹参阴性对照溶液。
    3、丹参特征峰的确认:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各3μ1,注入液相色谱仪,进行色谱峰比对,建立了丹参的特征图谱。从图谱中可以看出样品共有8个特征峰,经与对照品比对,1、2、8号峰分别确定为丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B三个成分,即确定1、2、8号峰为心可舒胶囊中丹参的特征峰(见图4)。
    上述试验可知,本方法可以确定供试品色谱图中的1、2、8号峰为心可舒胶囊中丹参的特征峰,可如实反映企业是否按处方投料及生产工艺是否稳定等情况,可作为控制样品质量的可靠方法。
    四、葛根与粉葛的鉴别
    l、色谱条件与系统适用性试验
    1.1色谱柱:Acquity BEH C18(2.1×100mm,1.7μm)
    1.2流动相:乙腈为流动相A,0.1%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度表见表11:
    表11流动相梯度洗脱表

    1.3检测波长:287nm。
    1.4柱温:25℃。
    1.5流速:0.4ml/min。
    2、溶液的制备及测定方法
    2.1葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液。
    2.2葛根药材溶液的制备:取葛根药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根药材溶液。
    2.3粉葛对照药材溶液的制备:取粉葛对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为粉葛对照药材溶液。
    2.4粉葛药材溶液的制备:取粉葛药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为粉葛药材溶液。
    3、测定:精密吸取葛根、粉葛对照药材及药材各3μl,注入液相色谱仪,测定,分别记录3、4、5、6、7号峰的峰面积如下:
    表12葛根与粉葛峰面积

    由以上实验可知,葛根与粉葛不仅主要成分葛根素(4号峰)差异较大,葛根中的含量大概为粉葛中含量的8倍,其余4个特征峰粉葛含量也普遍较低,而且粉葛对照药材中的3号峰缺失、粉葛药材中的3、5、6号峰缺失(见图5), 因此,本发明方法可以很好地对葛根与粉葛进行区分,确保投料的准确性,可以从药材投料的源头上控制心可舒胶囊的质量和安全。
    附图说明
    图1:心可舒胶囊含量测定专属性实验图谱;供试品色谱图中的峰依次标号为1-8号,峰1:丹参素钠,峰2:原儿茶醛,峰3:3’-羟基葛根素,峰4:葛根素,峰5:3’-甲氧基葛根素,峰6:葛根素-7-木糖苷,峰7:大豆苷,峰8:丹酚酸B;
    图2:心可舒胶囊中葛根药材特征图谱;3、4、5、6、7号峰为葛根的特征图谱峰,分别为3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷;
    图3:北京、安徽、上海产地的葛根药材3、4、5、6、7号峰特征图谱;
    图4:心可舒胶囊中丹参药材特征图谱;1、2、8号峰为丹参的特征图谱,分别为丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B;
    图5:葛根与粉葛对照药材及药材图谱。
    实施例1
    1、色谱条件与系统适用性试验
    1.1色谱柱:Acquity BEH C18(2.1×100mm,1.7μm)
    1.2流动相:乙腈为流动相A,0.1%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度表见表13。
    表13流动相梯度洗脱表

    1.3检测波长:287nm。
    1.4柱温:25℃。
    1.5流速:0.4ml/min。
    2、溶液制备及测定方法
    2.1供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    2.2对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,即得。
    2.3葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液。
    2.4测定方法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μl,注入液相色谱仪,测定,利用外表两点法,以对照品色谱与供试品色谱峰面积分别计算各成分含量。
    2.5方法学考察:
    2.5.1专属性试验:按处方比例和制法制备不含丹参的阴性样品1和不含葛根的阴性样品2,按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液,分别精密吸取对照品溶液,供试品溶液与两种阴性对照溶液各3μl,注入超高效液相色谱仪,记录色谱峰。结果表明,方中其他药味不干扰丹参素钠、原儿茶醛、葛根素、丹酚酸B的测定,见图1。
    2.5.2线性关系考察:精密量取浓度丹参素钠(浓度依次为:0.00369mg/ml、0.01845mg/ml、0.07380mg/ml、0.1476mg/ml、0.3690mg/ml)、原儿茶醛(浓度依次为:0.000487mg/ml、0.001948mg/ml、0.009741mg/ml、0.01948mg/ml、0.04871mg/ml)、葛根素(浓度依次为:0.04654mg/ml、0.1164mg/ml、0.2327mg/ml、0.5817mg/ml、1.1635mg/ml)、丹酚酸B(浓度依次为:0.00396mg/ml、0.01981mg/ml、0.03961mg/ml、0.07923mg/ml、0.3961)3μl,分别注入液相色谱仪,按拟定的色谱条件测定,以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。结果表明,丹参素钠在0.01107~1.107μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=13.269x-0.0061(r=0.9999);原儿茶醛在0.001461~0.146121μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=96.504x-0.0035(r=0.9999);葛根素在0.13962~3.49056μg之间呈良好的线性关系,回归方程 为:y=32.542x+0.0983(r=0.9999),丹酚酸B在0.01188~1.18845μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=31.244x-0.0165(r=0.9999)。实验结果见表14。
    表14心可舒胶囊四成分线性关系考察结果

    2.5.3重复性试验:取同一批样品(批号110606),研细,取0.1g、0.5g、1.0g各三份,精密称定,按正文方法进行测定。结果表明,本方法重复性良好(结果见表15)。
    表15重复性试验结果

    2.5.4回收率试验:取已知含量的样品(批号110606,丹参素钠含量:4.7599mg/g、原儿茶醛含量:0.5890mg/g、葛根素含量:1580mg/g、丹酚酸B含量:4.6732mg/g)粉末9份,每份约0.25g,精密称定,每三份为一组,分别加入用70%甲醇溶液配制的低、中、高三个浓度的对照品溶液50ml,按供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液。按拟定的色谱条件测定,计算回收率。结果见表15-18。表明本方法回收率较好。
    表15丹参素钠回收率试验结果

    表16原儿茶醛回收率试验结果

    表17葛根素回收率试验结果

    表18丹酚酸B回收率试验结果

    2.5.5稳定性试验:取同一供试品溶液于0小时开始测定,以后每间隔一定时间测定1次,结果表明供试品溶液至少在24小时内稳定。
    2.5.6样品含量测定:含量测定结果,见下表19:
    表19含量测定结果

    2.5.7葛根特征图谱结果,供试品图谱在与葛根对照药材图谱的相应位置上具有相应的色谱峰,即3、4、5、6、7号峰,且分离度均大于2.0。
    2.5.8丹参特征图谱结果,供试品图谱与丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B对照品有相对应的色谱峰,即1、2、8号峰,且分离度均大于2.8。
    实施例2
    l、色谱条件与系统适用性试验
    1.1色谱柱:Acquity HSS T3C18(2.1×100mm,1.8μm)
    1.2流动相:乙腈为流动相A,0.05%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度表见表20。
    表20流动相梯度洗脱表

    1.3检测波长:270nm。
    1.4柱温:20℃。
    1.5流速:0.2ml/min。
    2、溶液制备及测定方法
    2.1供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声10分钟,取出,放冷,再称定重量,50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    2.2对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素l50μg的混合溶液,即得。
    2.3葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液。
    2.4测定方法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,利用外表两点法,以对照品色谱与供试品色谱峰面积分别计算各成分含量,
    2.5方法学考察:
    2.5.1专属性试验:按处方比例和制法制备不含丹参的阴性样品1和不含葛根的阴性样品2,按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液,分别精密吸取对照品溶液,供试品溶液与两种阴性对照溶液各3μl,注入超高效液相色谱仪,记录色谱峰。结果表明,方中其他药味不干扰丹参素钠、原儿茶醛、葛根素、丹酚酸B的测定。
    2.5.2线性关系考察:精密量取浓度丹参素钠(浓度依次为:0.00369mg/ml、0.01845mg/ml、0.07380mg/ml、0.1476mg/ml、0.3690mg/ml)、原儿茶醛(浓度依次为:0.000487mg/ml、0.001948mg/ml、0.009741mg/ml、0.01948mg/ml、0.04871mg/ml)、葛根素(浓度依次为:0.04654mg/ml、0.1164mg/ml、0.2327mg/ml、0.5817mg/ml、1.1635mg/ml)、丹酚酸B(浓度依次为:0.00396mg/ml、0.01981mg/ml、0.03961mg/ml、0.07923mg/ml、0.3961)3μl,分别注入液相色谱仪,按拟定的色谱条件测定,以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。结果表明,丹参素钠在0.01107~1.107μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=13.269x-0.0061(r=0.9999);原儿茶醛在0.001461~0.146121μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=96.504x-0.0035(r=0.9999);葛根素在0.13962~3.49056μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=32.542x+0.0983(r=0.9999),丹酚酸B在0.01188~1.18845μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=31.244x-0.0165(r=0.9999)。
    2.5.3重复性试验:取同一批样品,研细,取0.1g、0.5g、1.0g各三份,精密称定,按正文方法进行测定,含量的RSD均小于1.7%,表明本方法重复性良好。
    2.5.4回收率试验:取已知含量的样品粉末9份,每份约0.25g,精密称定,每三份为一组,分别加入用70%甲醇溶液配制的低、中、高三个浓度的对照品溶 液50ml,按供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液。按拟定的色谱条件测定,计算回收率。结果回收率的RSD小于1.56%,表明本方法回收率较好。
    2.5.5稳定性试验:取同一供试品溶液于0小时开始测定,以后每间隔一定时间测定1次,含量的RSD小于0.56%,表明供试品溶液在24小时内稳定。
    2.5.6样品含量测定:含量测定结果,见下表结果见下表21:
    表21含量测定结果

    2.5.7葛根特征图谱结果,供试品图谱在与葛根对照药材图谱的相应位置上具有相应的色谱峰,即3、4、5、6、7号峰,且分离度均大于1.8。
    2.5.8丹参特征图谱结果,供试品图谱与丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B对照品有相对应的色谱峰,即1、2、8号峰,且分离度均大于2.6。
    实施例3
    1、色谱条件与系统适用性试验
    1.1色谱柱:Shiseido C18(2.1×100mm,2.7μm)
    1.2流动相:乙腈为流动相A,0.2%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度表见表22。
    表22流动相梯度洗脱表

    1.3检测波长:310nm。
    1.4柱温:50℃。
    1.5流速:1ml/min。
    2、溶液制备及测定方法
    2.1供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物,研细,取lg,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声60分钟,取出,放冷,再称定重量,80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
    2.2对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50μg、原儿茶醛20μg、丹酚酸B100μg、葛根素150μg的混合溶液,即得。
    2.3葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇50ml,超声(功率250W,频率40kHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,作为葛根对照药材溶液。
    2.4测定方法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入液相色谱仪,测定,利用外表两点法,以对照品色谱与供试品色谱峰面积分别计算各成分含量
    2.5方法学考察:
    2.5.1专属性试验:按处方比例和制法制备不含丹参的阴性样品1和不含葛根的阴性样品2,按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液,分别精密吸取对照品溶液,供试品溶液与两种阴性对照溶液各3μl,注入超高效液相色谱仪,记录色谱峰。结果表明,方中其他药味不干扰丹参素钠、原儿茶醛、葛根素、丹酚酸B的测定。
    2.5.2线性关系考察:精密量取浓度丹参素钠(浓度依次为:0.00369mg/ml、0.01845mg/ml、0.07380mg/ml、0.1476mg/ml、0.3690mg/ml)、原儿茶醛(浓度依次为:0.000487mg/ml、0.001948mg/ml、0.009741mg/ml、0.01948mg/ml、0.04871mg/ml)、葛根素(浓度依次为:0.04654mg/ml、0.1164mg/ml、0.2327mg/ml、0.5817mg/ml、1.1635mg/ml)、丹酚酸B(浓度依次为:0.00396mg/ml、0.01981mg/ml、0.03961mg/ml、0.07923mg/ml、0.3961)3μl,分别注入液相色谱仪,按拟定的色谱条件测定,以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。结果表明,丹参素钠在0.01107~1.107μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=13.269x-0.0061(r=0.9999);原儿茶醛在0.001461~0.146121μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=96.504x-0.0035(r=0.9999);葛根素在0.13962~3.49056μg之间呈良好的线性关系,回归方程 为:y=32.542x+0.0983(r=0.9999),丹酚酸B在0.01188~1.18845μg之间呈良好的线性关系,回归方程为:y=31.244x-0.0165(r=0.9999)。
    2.5.3重复性试验:取同一批样品,研细,取0.1g、0.5g、1.0g各三份,精密称定,按正文方法进行测定,含量的RSD均小于1.25%,表明本方法重复性良好。
    2.5.4回收率试验:取已知含量的样品粉末9份,每份约0.25g,精密称定,每三份为一组,分别加入用70%甲醇溶液配制的低、中、高三个浓度的对照品溶液50ml,按供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液。按拟定的色谱条件测定,计算回收率,结果回收率的RSD小于1.32%,表明本方法回收率较好。
    2.5.5稳定性试验:取同一供试品溶液于0小时开始测定,以后每间隔一定时间测定1次,含量的RSD小于0.73%,表明供试品溶液在24小时内稳定。
    2.5.6含量测定结果,见下表结果见表23:
    表23含量测定结果

    2.5.7葛根特征图谱结果,供试品图谱在与葛根对照药材图谱的相应位置上具有相应的色谱峰,即3、4、5、6、7号峰,且分离度均大于1.9。
    2.5.8丹参特征图谱结果,供试品图谱与丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B对照品有相对应的色谱峰,即1、2、8号峰,且分离度均大于2.3。

    关 键 词:
    一种 心可舒 胶囊 含量 测定 鉴别方法
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    关于本文
    本文标题:一种心可舒胶囊的含量测定及鉴别方法.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-6141936.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03