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    重庆时时彩三星预测: 检测鸽Ⅰ型副粘病毒的胶体金免疫层析试纸条及制备方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201410219718.X

    申请日:

    2014.05.22

    公开号:

    CN103983780A

    公开日:

    2014.08.13

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/577申请日:20140522|||公开
    IPC分类号: G01N33/577; G01N33/531 主分类号: G01N33/577
    申请人: 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所
    发明人: 贺泂杰; 时永杰; 杨明; 张茜; 贺奋义; 郭慧琳; 朱新强; 张登基; 曾玉峰; 周磊
    地址: 730050 甘肃省兰州市七里河区小西湖硷沟沿335号
    优先权:
    专利代理机构: 兰州中科华西专利代理有限公司 62002 代理人: 李艳华
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410219718.X

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2016.04.06|||2014.09.10|||2014.08.13

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及一种检测鸽Ⅰ型副粘病毒的胶体金免疫层析试纸条,它包括PVC胶板、硝酸纤维素膜、胶体金结合垫、样品垫和吸水垫;所述PVC胶板的一端粘附有所述样品垫,其另一端粘附有所述吸水垫,其中部依次粘附有所述胶体金结合垫、所述硝酸纤维素膜;所述胶体金结合垫的一端与所述样品垫相粘附,其另一端与所述硝酸纤维素膜相粘附,该硝酸纤维素膜与所述吸水垫相粘附;所述胶体金结合垫包被了带有抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白单克隆抗体的胶体金标记蛋白;所述硝酸纤维素膜上沿样品流动方向依次设有检测线、质控线。本发明可快速、简便、准确、无需任何仪器设备就能检测鸽新城疫。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  检测鸽Ⅰ型副粘病毒的胶体金免疫层析试纸条,其特征在于:它包括PVC胶板(1)、硝酸纤维素膜(2)、胶体金结合垫(3)、样品垫(4)和吸水垫(5);所述PVC胶板(1)的一端粘附有所述样品垫(4),其另一端粘附有所述吸水垫(5),其中部依次粘附有所述胶体金结合垫(3)、所述硝酸纤维素膜(2);所述胶体金结合垫(3)的一端与所述样品垫(4)相粘附,其另一端与所述硝酸纤维素膜(2)相粘附,该硝酸纤维素膜(2)与所述吸水垫(5)相粘附;所述胶体金结合垫(3)包被了带有抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白单克隆抗体的胶体金标记蛋白;所述硝酸纤维素膜(2)上沿样品流动方向依次设有检测线(6)、质控线(7)。

    2.  如权利要求1所述的检测鸽Ⅰ型副粘病毒的胶体金免疫层析试纸条,其特征在于:所述检测线(6)为以线形包被纯化的抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白单克隆抗体。

    3.  如权利要求1所述的检测鸽Ⅰ型副粘病毒的胶体金免疫层析试纸条,其特征在于:所述质控线(7)为以线形包被纯化的羊抗鼠抗体。

    4.  如权利要求1所述的检测鸽Ⅰ型副粘病毒的胶体金免疫层析试纸条的制备方法,包括以下步骤:
    ⑴免疫抗原的制备:
    把鸽Ⅰ型副粘病毒F基因片段连接到PGEX-4T-1原核表达载体中,经IPTG诱导和分析,F蛋白在大肠杆菌BL21中得到高效表达,提取包涵体蛋白作为免疫抗原;
    ⑵抗体的制备:
    将抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白免疫BALB/C小鼠按照常规的单克隆抗体制备技术制备抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白单克隆抗体,并进行纯化,即得纯化后的抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白单克隆抗体;
    ⑶将硝酸纤维素膜(2)粘附于PVC胶板(1)的中部;
    ⑷将所述纯化后的抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白单克隆抗体涂到硝酸纤维素膜(2)上,包被所述硝酸纤维素膜(2)的一个区域,得到检测线(6);
    ⑸将纯化的羊抗鼠抗体包被所述硝酸纤维素膜(2)的另一个区域,得到质控线(7);
    ⑹制备抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白单克隆抗体的胶体金标记蛋白溶液:
    首先按柠檬酸还原法制备胶体金溶液,然后用0.1mol/LK2CO3调节胶体金溶液的pH值至9.0~9.5,分别取1mL胶体金和50μg的所述纯化后的抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白单克隆抗体,搅拌混合,40min后再加体积浓度为5%BSA使其最终浓度为1%,其次以3000r/min的速率离心20min,弃去由凝聚的金胶粒形成的沉淀,得到上清液;最后,所述上清液在温度为4℃的条件下以12000rpm的速率离心30min,得到沉淀物,该沉淀物用100μL的0.015M且pH=7.4的胶体金复溶液溶解,在4℃下保存,即得抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白单克隆抗体的胶体金标记蛋白溶液;
    ⑺将玻璃纤维膜浸在所述抗鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白单克隆抗体的胶体金标记蛋白溶液中,经浸透、晾干,即得胶体金结合垫(3);所述胶体金结合垫(3)在37℃下干燥至恒重后,粘附于所述硝酸纤维素膜(2)上远离所述质控线(7)的一端;
    ⑻将样品垫(4)放入0.05M、pH=8.5 的Tris溶液中浸没处理,得到处理后的样品垫(4);
    ⑼在所述胶体金结合垫(3)的一端在粘上所述处理后的样品垫(4),其另一端粘附所述硝酸纤维素膜(2);所述处理后的样品垫(4)粘附于所述PVC胶板(1)的一端;所述吸水垫(5)与所述硝酸纤维素膜(2)粘附,并粘附于所述PVC胶板(1)的另一端。

    5.  如权利要求4所述的检测鸽Ⅰ型副粘病毒的胶体金免疫层析试纸条的制备方法,其特征在于:所述步骤⑹中0.015M且pH=7.4的胶体金复溶液是指在1L PBS溶液中含有20g蔗糖、1g BSA 、1gPVP、0.02g叠氮钠的PBS溶液。

    6.  如权利要求4所述的检测鸽Ⅰ型副粘病毒的胶体金免疫层析试纸条的制备方法,其特征在于:所述步骤⑻中0.05M、pH=8.5 的Tris溶液是指在1L Tris溶液中含有1g BSA、1g PVP、500mL Tween-20、0.02g叠氮钠的 Tris溶液。

    关 键 词:
    检测 副粘病毒 胶体 免疫 层析 试纸 制备 方法
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