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    重庆时时彩彩模似开奖: 一种DAB2IP蛋白的ELISA检测方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201410052911.9

    申请日:

    2014.02.17

    公开号:

    CN103983784A

    公开日:

    2014.08.13

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/68申请日:20140217|||公开
    IPC分类号: G01N33/68 主分类号: G01N33/68
    申请人: 中国科学院福建物质结构研究所
    发明人: 吴允昆; 苏银桃; 李生平; 谢佐福; 施方媛; 曾占壮; 赵艳和
    地址: 350002 福建省福州市杨桥西路155号
    优先权:
    专利代理机构: 北京庆峰财智知识产权代理事务所(普通合伙) 11417 代理人: 刘元霞;谢蓉
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410052911.9

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2016.03.23|||2014.09.10|||2014.08.13

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种针对DAB2IP蛋白的ELISA检测方法,该方法采用双抗体夹心ABC法,同时具有高特异性和高灵敏度。所述检测方法具有以下特征:包被DAB2IP单克隆抗体(由保藏号为CCTCC?No.C2013148的细胞株分泌,保藏名称为DAB2IPMab1)于ELISA检测板上作为固相抗体,以生物素标记的DAB2IP多克隆抗体作为酶标抗体,使HRP通过与其偶联的Avidin与多克隆抗体上的生物素结合,经TMB显色,在450nm单波长处测定吸收值,可以实现DAB2IP蛋白的定量检测。本发明还提供DAB2IP蛋白检测方法的应用。该方法为DAB2IP蛋白的检测及检测产品的开发奠定了基础。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种DAB2IP蛋白的检测方法,所述方法包括以包被于ELISA检测板上的DAB2IP单克隆抗体作为固相抗体和标记的DAB2IP多克隆抗体作为酶标抗体进行双抗体夹心法,以定量检测DAB2IP蛋白。

    2.  权利要求1的方法,所述DAB2IP单克隆抗体来自抗人肿瘤抑制因子DAB2IP单克隆抗体杂交瘤细胞株,其保藏号为CCTCC No.C2013148。

    3.  权利要求1或2的方法,包括所述检测方法:以包被于ELISA检测板上的DAB2IP单克隆抗体作为固相抗体,以生物素标记的DAB2IP多克隆抗体作为酶标抗体,通过显色剂-Avidin与多克隆抗体上的生物素结合使显色剂通过与其偶联的Avidin与多克隆抗体上的生物素结合,经显色,以定量检测DAB2IP蛋白。

    4.  权利要求3的方法,所述显色剂是辣根过氧化物酶(HRP),在这种情况下经四甲基联苯胺(TMB)显色,在450nm单波长测定吸收值,以定量检测实现DAB2IP蛋白。

    5.  权利要求1或2的方法,所述生物素标记的DAB2IP多克隆抗体是按以下步骤制备的:
    将DAB2IP多克隆抗体溶解在PBS缓冲液中(优选浓度2mg/ml),加入生物素(优选生物素为抗体分子数的1-40倍,更优选5-30,还更优选10-20倍),在冰上静置,经纯化得到纯的生物素化抗体。

    6.  权利要求1或2的方法,所述单克隆抗体是按以下步骤制备的:将DAB2IP基因重组到改造过的pET32a载体上,该载体同时含有6His tag和TRX tag,并在6His tag和多克隆位点之间含有TEV酶切位点;将重组质粒在大肠杆菌BL21菌株中进行表达,所表达的蛋白为TRX-6His-DAB2IP融合蛋白,经TEV酶切及二次镍柱和分子筛纯化,得到纯化的DAB2IP蛋白;利用该纯化的DAB2IP蛋白免疫小鼠,经细胞融合及亚克隆化得到单克隆抗体杂交瘤细胞株, 由该细胞株分泌产生单克隆抗体。

    7.  权利要求1或2的方法,所述多克隆抗体是按以下步骤制备的:利用权利要求6纯化的DAB2IP蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。

    8.  权利要求1或2的方法,所述DAB2IP的定量检测是按以下方法完成的:将DAB2IP标准蛋白进行梯度稀释,然后分别用此方法测定400-700nm,优选450nm单波长时的读数,制作一个标准曲线,再将要测定的样品用此法在相同波长所测得的读数带入标准曲线,得到其实际浓度。

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    一种 DAB2IP 蛋白 ELISA 检测 方法
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