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    重庆时时彩仿官方网站: 一种动态实时测量细胞膜电位的方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201410134171.3

    申请日:

    2014.04.03

    公开号:

    CN103954659A

    公开日:

    2014.07.30

    当前法律状态:

    终止

    有效性:

    无权

    法律详情: 未缴年费专利权终止IPC(主分类):G01N 27/26申请日:20140403授权公告日:20160831终止日期:20170403|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 27/26申请日:20140403|||公开
    IPC分类号: G01N27/26 主分类号: G01N27/26
    申请人: 西安电子科技大学
    发明人: 张鹏; 黄辰; 张毅奕; 马晓华; 郝跃
    地址: 710071 陕西省西安市太白南路二号西安电子科技大学西大楼南翼113室微电子学院宽带隙半导体技术国家重点学科实验室
    优先权:
    专利代理机构: 北京市京大律师事务所 11321 代理人: 张璐;方晓明
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410134171.3

    授权公告号:

    |||||||||

    法律状态公告日:

    2018.04.17|||2016.08.31|||2014.08.27|||2014.07.30

    法律状态类型:

    专利权的终止|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及一种动态实时测量细胞膜电位的方法,包括如下步骤:1)将从已获得的人体脐带静脉血中分离出来的细胞在体外进行培养;2)将培养后的细胞注入到微流室中继续进行培养;3)利用微注射泵在微流室中进行精确的流量控制;4)利用微流室内的氮化镓(GaN)高电子迁移率晶体管(HEMT)器件测量流体表面的粘滞度,进而计算出细胞膜电位。在使用本发明测量细胞膜电位的过程中,将作为生物传感器的HEMT器件和微流室、微注射泵、储液瓶相连,在微注射泵提供动态流体环境的前提下,通过HEMT器件实时监测流体环境下的活体多细胞膜电位。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种动态实时测量细胞膜电位的方法,所述方法包括如下步骤:
    1)将从已获得的人体脐带静脉血中分离出来的细胞在体外进行培养;
    2)将所述培养后的细胞注入到微流室中继续进行培养;
    3)利用微注射泵在微流室中进行精确的流量控制;
    4)利用所述微流室内的氮化镓(GaN)高电子迁移率晶体管(HEMT)器件测量流体表面的粘滞度,进而计算出细胞膜电位。

    2.  根据权利要求1所述的方法,需要将所述微流室、微注射泵和储液瓶依次连接,构成一个封闭的循环系统;所述微流室作为液体流动和细胞注入之用,所述微流室内的液体通过所述微注射泵传输给所述储液瓶,所述作为生物传感器的HEMT器件与所述微流室耦合,用于检测所述微流室内细胞在动态条件下的实时细胞膜电位。

    3.  根据权利要求1所述的方法,其中所述的从已获得的人体脐带静脉血中分离细胞的方法为:
    1)在无菌条件下,将已获得的新鲜的人体脐带静脉血加入1g/L胶原酶和2.5g/L胰蛋白酶(1:1)(V/V)的混合液15mL,置于37℃水浴箱中孵育8min;
    2)将步骤1)得到的液体收集入离心管,用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗脐静脉2次,将冲洗后的液体一同收集入离心管,1000r/min离心10min,取上清液,加入完全培养液重悬细胞;
    3)取0.1mL细胞悬液用4g/L台盼蓝染色后作活细胞计数;
    4)将2×104/L细胞接种到24孔板中,每孔加入完全培养液1mL,置于37℃、950mL/L O2、50mL/L CO2培养箱内静置培养,并采用台盼蓝排斥法,将0.1mL混匀的内皮细胞悬液与4g/L台盼蓝0.9mL混匀后,取1滴在显微镜下计数100个细胞。

    4.  根据权利要求1所述的方法,其中所述的将已分离活体细胞注入到微流室内继续培养的方法为:用酒精对HEMT器件消毒后,使用纤连蛋白溶液(fibronectin)进行处理30min,并使用PBS冲洗,然后接种细胞,使 细胞密度达到5000~12000cells/mm2,并保证细胞全程置于含5%CO2的37℃恒温箱中。

    5.  根据权利要求1所述的方法,其中所述的利用微注射泵在微流室中进行精确的流量控制的方法为:采用微注射泵与细胞膜电位检测装置连接形成血液动力系统,该系统架设在37℃恒温箱中维持温度稳定,实验中使用PBS作为流体,并且实验全程通入含5%CO2的空气以保持流体环境的酸碱度。

    6.  根据权利要求1所述的方法,其中所述的用微流室内的HEMT器件测量流体表面的粘滞度,进而计算出细胞膜电位的方法为:
    1)器件裸栅上培养的细胞受到的剪切力由以下公式推导:
    τ=6wh2]]>
    其中τ为细胞受到的剪切力,单位为dyne/cm2;η为流体即培养液的粘滞度(viscosity),单位为g/(cm·s);Q为流体每秒的流量,单位为cm3/s;w为器件的栅宽,h为微流室内壁高度;
    2)采用半导体测试分析仪器,来测试HEMT器件的源漏电流,并通过如下公式,转化成对应的细胞膜电位:
    VJD=ΔVGS=ΔIDS(gm)VDS]]>
    为细胞膜电位,为所8加漏源电压VDS下,且栅电压VGS在-70mV~0V处对应的HEMT器件跨导。由于栅电压的变化较小,可认为为一个常数,由预先测量得到。

    7.  根据权利要求6所述的测量细胞膜电位的方法,所述预先测量为:对在同一晶圆上、且采用相同版图的常规三端HEMT器件,加相同漏源电压VDS,测试其转移曲线(VG-ID),得到栅电压在-70mV~0V处对应的器件跨导值。

    关 键 词:
    一种 动态 实时 测量 细胞 膜电位 方法
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