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    重庆时时彩大底方法: 采用细胞电极电化学检测细胞增殖活性的方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201410137557.X

    申请日:

    2014.04.08

    公开号:

    CN103954663A

    公开日:

    2014.07.30

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 27/30申请日:20140408|||公开
    IPC分类号: G01N27/30; G01N27/26 主分类号: G01N27/30
    申请人: 同济大学
    发明人: 曹同成; 尹蓉; 赵国华; 顾靓
    地址: 200092 上海市杨浦区四平路1239号
    优先权:
    专利代理机构: 上海正旦专利代理有限公司 31200 代理人: 张磊
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410137557.X

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2016.08.31|||2014.08.27|||2014.07.30

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及一种采用细胞电极电化学检测细胞增殖活性的方法,利用双酚A对人乳腺癌细胞(MCF-7)的作用作为细胞增殖活性的研究模型;先将多壁碳纳米管滴涂在玻碳电极上固定粘纤蛋白RGDSK,随后将细胞固定在修饰电极的表面,然后以此细胞电极为工作电极,铂电极为辅助电极,饱和甘汞电极为参比电极,基于差分脉冲伏安法的电化学方法,检测MCF-7细胞的增殖情况,并且根据电流与污染物的作用浓度和作用时间的绘制出线性关系曲线。与现有传统检测细胞增殖活性的MTT技术相比,细胞电极与传统方法的检测结果基本一致,同时可以避免传统检测过程中化学试剂对检测人员的伤害,操作也较传统方法快速易与操作,并且检测结果具有良好的重现性和较高的灵敏度,为检测污染物的细胞毒性提供了一个新平台,具有重要的实际应用意义。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种采用细胞电极电化学检测细胞增殖活性的方法,其特征在于具体步骤如下:
    (1) MCF-7细胞的培养
    用标准培养基培养细胞,5%CO2,37°C 的CO2细胞培养箱中孵育细胞,每天换液一次;细胞呈单层生长到68-72%即进行细胞传代;去除培养瓶内的培养残液,加入0.04%EDTA,漱洗后吸出,再加入100~200uL 0.25%胰酶(覆盖整个瓶底),37℃孵育3-5分钟;电镜下观察细胞形态变化,待细胞变圆,折光增强,用含血清培养液中止消化,反复吹打瓶壁,制成细胞悬液,移入离心管,1500rpm,室温离心5分钟后,去上清,用新鲜培养液悬浮沉淀;
    (2) 采用BPA对MCF-7细胞的作用作为研究模型,制备MCF-7细胞电极
    将玻碳电极分别用1.0,0.3,0.05微米的三氧化二铝粉末研磨光滑,分别在体积比为浓HNO3和H2SO4以及乙醇溶液中超声,清洗干净的玻碳电极表面滴涂先前制备的多壁碳纳米管,红外灯下干燥后,在制备好的玻碳电极表面滴涂多肽RGDSK,将玻碳电极在37 ℃ 下恒温培养3小时取出备用,4 ℃ 保存;随后,将培养好的 MCF-7 细胞滴涂在玻碳电极表面,37 ℃ 恒温培养 2小时后取出,得到MCF-7细胞电极,立即进行电化学扫描;MCF-7细胞电极用于检测不同时间和剂量BPA作用于MCF-7细胞后,观察细胞增殖活性的变化;
    (3)基于差分脉冲伏安法的电化学方法,检测MCF-细胞增殖情况
    利用电化学工作站中三电极体系,步骤(2)制备得到的MCF-7细胞电极为工作电极、铂片为对电极、饱和甘汞电极为参比电极进行电化学检测,电解质为含有5mM的K3[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6]的10Mm/L的PBS溶液,利用循环伏安法和差分脉冲伏安法对裸玻碳电极和修饰后的MCF-7细胞电极做了基本的电化学表征;根据电流与污染物作用浓度和作用时间的绘制出线性关系曲线,检测MCF-7细胞的增殖情况。

    关 键 词:
    采用 细胞 电极 电化学 检测 增殖 活性 方法
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