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    重庆时时彩五星综合走势图彩经图: 涡虫染色体标本的制备方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201410257817.7

    申请日:

    2014.06.12

    公开号:

    CN103983497A

    公开日:

    2014.08.13

    当前法律状态:

    终止

    有效性:

    无权

    法律详情: 未缴年费专利权终止IPC(主分类):G01N 1/30申请日:20140612授权公告日:20160420终止日期:20170612|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 1/30申请日:20140612|||公开
    IPC分类号: G01N1/30 主分类号: G01N1/30
    申请人: 周口师范学院
    发明人: 马克世; 盛东峰; 武安泉; 王永立; 杨同文; 陈龙
    地址: 466001 河南省周口市川汇区文昌大道东段
    优先权:
    专利代理机构: 河南科技通律师事务所 41123 代理人: 樊羿
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410257817.7

    授权公告号:

    |||||||||

    法律状态公告日:

    2018.07.10|||2016.04.20|||2014.09.10|||2014.08.13

    法律状态类型:

    专利权的终止|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及一种涡虫染色体标本的制备方法。本发明涡虫染色体标本制备方法包括以下步骤:取材、预处理、再生组织培养、组织破碎、离心悬浆、秋水仙素阻断、KC1低渗处理、离心悬浆滴片、染色以及烤干封片。本发明制备方法使再生组织和中期细胞得到充分固定处理,染色体制片背景清晰、细胞分散良好、中期分裂相多,利于核型分析。

    权利要求书

    权利要求书
    1.   一种涡虫染色体标本的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: 
    (1)取材及预处理:选取体长3~5cm活泼健康涡虫,置于去氯自来水中,饥饿1~2周,至无代谢废物排出;
    (2)再生组织培养:将经步骤(1)处理过的涡虫置于载玻片上,待其完全伸展时,用消毒过的刀片将涡虫切成3~5段,再置于无菌水中后放入10~15℃的恒温培养箱培养3~5天,至断面有白色再生组织长出;
    (3)组织破碎及秋水仙素处理:将步骤(2)得到的涡虫再生组织分离取下,置于离心管中破碎,然后加入浓度为0.2~0.25g/L的秋水仙素水溶液0.5~1.0mL,于10~15℃下静置2.5~3.5小时,然后放入离心机中以800~1000rpm的转速离心5~6分钟,弃去上清液;
    (4)KC1低渗处理:步骤(3)处理后,加入浓度为0.1~0.2g/L的 KCl低渗液0.5~0.8mL,进行低渗处理1.5~2.5小时,然后放入离心机中以800~1000rpm的转速离心5~6分钟,弃去上清液;
    (5)组织固定及滴片:加入固定液I 1~1.5mL,使再生组织与固定液充分接触后,静置18~25分钟,以700~800rpm的转速离心5~6分钟,弃去上清;加入固定液II 1~1.5mL,使再生组织与固定液充分接触后,静置18~25分钟,以700~800rpm的转速离心5~6分钟,弃去上清;加入固定液Ⅲ 1~1.5mL,使再生组织与固定液充分接触后,静置18~25分钟,再以700~800rpm的转速离心5~6分钟,弃去大部分上清,留下0.1~0.2mL液体,轻微震荡得到组织混悬液,吸取上述混悬液,从5~6cm高度悬滴于载玻片上,均匀涂满载玻片后,烘干或自然晾干;
    (6)染色:将步骤(5)所得制片滴加Giemsa染色液1~2mL,至其能布满载玻片,平放于通风橱中静置8~12分钟后,用蒸馏水轻柔洗去染液,再置于酒精灯火焰上方2~3cm高度处均匀烤干,即得到染色体片;
    (7)封片:在显微镜下初步观察所得染色体片,标记后封片保存,即得;
    所述固定液I由乙醇和冰乙酸以体积比4:1组成,固定液II由乙醇和冰乙酸以体积比2:1组成,固定液III由乙醇和冰乙酸以体积比1:4组成。

    2.  根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤(2)所述刀片经乙醇消毒。

    3.  根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤(3)所述离心管为1.5~2mL离心管。

    4.  根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤(5)所述再生组织与固定液充分接触的方式为摇动或超声波震荡。

    5.  根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述Giemsa染色液为甘油含量为10~20wt%的Giemsa染色液。

    关 键 词:
    染色体 标本 制备 方法
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