重庆时时彩庄闲: 一种肝素钠中过氧化氢残留检测的新方法.pdf

(10)申请公布号 CN 103913521 A (43)申请公布日 2014.07.09 CN 103913521 A (21)申请号 201310684303.5 (22)申请日 2013.12.05 G01N 30/02(2006.01) (71)申请人 烟台东诚生化股份有限公司 地址 264006 山东省烟台经济技术开发区长 白山路 7 号 (72)发明人 王锋 孙丽宁 祁静 吕慧忠 由守谊 (54) 发明名称 一种肝素钠中过氧化氢残留检测的新方法 (57) 摘要 本发明公布了一种肝素钠原料药中过氧化氢 残留检测的新方法。目的在于提高检测限的灵敏 度， 结果的准确性， 消除外界环境的干扰?？⒊?如下检测新方法 ： 肝素钠样品溶液过阴离子交换 柱后， 消除肝素钠对过氧化氢检测的干扰， 通过对 过氧化氢进行衍生化反应， 避免了实验过程中环 境温度和光照对过氧化氢含量的影响。过氧化氢 和过量的三苯基膦溶液反应生成稳定的氧化三苯 基膦， 然后进高效液相色谱仪， 经色谱柱分离后， 经紫外检测器检测， 用外标法准确定量过氧化氢 含量。 本发明分离度好， 准确度高， 流程合理， 操作 简单。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103913521 A CN 103913521 A 1/1 页 2 1. 一种测定肝素钠原料药中过氧化氢残留的检测方法， 本发明的测定方法如下步骤所 示 ： (1) 过氧化氢标准品的标定 将过氧化氢标准商品试剂按照国家标准 GB9984—89 进行标定。 (2) 样品溶液的配制 取肝素钠原料药 1g 溶于 10ml 水中， 定容， 摇匀备用。 (3) 衍生化试剂的配制 称取三苯基膦52.46mg， 用乙腈溶解， 定容至1000mL， 浓度为0.0002mol／L， 现用现配。 (4) 色谱条件 仪器 ： waters e2695 高效液相色谱仪， 检测器为 waters2489 紫外检测器 色谱柱 ： C18 色谱柱， 4.6mm×250mm， 5μm ； 流动相 ： 将乙腈和水按体积比为乙腈 ： 水 =70 ： 30 进行混合， 脱气。 流速 ： 1.0mL ／ min ； 检测波长 ： 225nm ； 进样量 ： 10μL。 (5) 衍生化反应 用注射器分别吸取样品溶液和标准工作液过阴离子交换柱后， 消除肝素的影响。再分 别移取过柱后的过氧化氢标准工作液和样品溶液各 1mL 于 10mL 棕色瓶中， 加入 2mL 三苯基 膦乙腈溶液， 振摇， 置于暗处室温反应 30min。 衍生化反应结束后， 立即开始色谱分析， 吸取 10μL 样品溶液注入高效液相色谱仪。在 上述色谱条件下测定其峰面积， 利用外标法计算样品溶液中过氧化氢的浓度。 权 利 要 求 书 CN 103913521 A 2 1/2 页 3 一种肝素钠中过氧化氢残留检测的新方法 一、 技术领域 ： [0001] 本发明涉及一种肝素钠中过氧化氢残留含量检测的方法。 二、 背景技术 ： [0002] 肝素钠原料药是肝素制剂的有效成分和低分子肝素制剂的起始原料， 而在生产的 过程中需要加入过氧化氢进行氧化脱色， 不可避免地产生过氧化氢残留。因此测定肝素钠 中过氧化氢的残留是非常有必要的。现有的对水中过氧化氢的测定主要是化学滴定法， 用高锰酸钾溶液滴定来测定?；У味ǚ觳庀藿细?， 样品用量大， 10g 左右 ； 而且误差较 高， 操作繁琐， 滴定终点不易把握。而对于痕量残留来说滴定法终点不易掌握， 检出限为 100PPM，《中华人民共和国国家标准》 食品中残留过氧化氢的测定方法， 采用了滴定法?；?有一种是高效液相法直接测定， 但对于过氧化氢来说紫外吸收较弱， 对痕量残留来说也不 易测定， 一种测定溶液中过氧化氢含量的方法， 专利号 CN02158703.5 采用的此方法， 该方 法是紫外检测器直接检测， 但过氧化氢易分解， 温度和光照都对其有影响， 造成检测结果不 准确， 检出限较高。采用衍生化法， 过氧化氢和三苯基膦反应生成氧化三苯基膦， 氧化三苯 基膦紫外吸收好， 而且避免了过氧化氢的分解问题。Stefan 等人以过氧化氢氧化三苯基磷 (TPP)为三苯基磷的氧化物(TPPO)为原理， 通过液相色谱测定TPP和TPPO之间的变化来测 定过氧化氢， 并测定洗涤剂中的过氧化氢。 本方法也是采用衍生化法， 样品溶液过阴离子交 换柱后消除肝素钠对过氧化氢检测的影响后， 再采用三苯基膦衍生化的方法， 有效地测定 了过氧化氢的残留。 [0003] 本发明的关键在于 ： 肝素钠是一种不同分子量粘多糖硫酸酯类的混合物， 对过氧 化氢的分析产生巨大的干扰。 用现有的检测方法， 体现在干扰氧化三苯基膦的检测， 肝素钠 混合物的峰与氧化三苯基膦达不到良好的分离效果(见附图1)。 我们采用了过阴离子交换 柱的前处理方法， 很大程度上消除了肝素钠对检测的影响， 达到了很好的基线分离 ( 见附 图 2)。因此与现有检测方法相比本发明的检测效果更优。 三、 发明内容 [0004] 本发明的目的在于提供一种检测限低， 干扰小， 操作简单， 灵敏度好， 准确度高， 误 差小， 特别是针对肝素钠中过氧化氢残留的检测方法。肝素钠糖链上的还原端可以和过氧 化氢反应。 本发明的目的通过这样实现的 ： 肝素钠样品用纯化水溶解后， 用注射器吸取样品 溶液过阴离子交换柱后， 消除肝素的影响， 再加入三苯基膦溶液衍生化， 避光反应 30min 后 进高效液相色谱检测。 [0005] 本发明的测定方法如下步骤所示 ： [0006] (1) 过氧化氢标准品的标定 [0007] 将过氧化氢标准商品试剂按照国家标准 GB9984—89 进行标定。 [0008] (2) 样品溶液的配制 [0009] 取肝素钠原料药 1g 溶于 10ml 水中， 定容， 摇匀备用。 说 明 书 CN 103913521 A 3 2/2 页 4 [0010] (3) 衍生化试剂的配制 [0011] 称取三苯基膦 52.46mg， 用乙腈溶解， 定容至 1000mL， 浓度为 0.0002mol ／ L， 现用 现配。 [0012] (4) 色谱条件 [0013] 仪器 ： waters e2695 高效液相色谱仪， 检测器为 waters2489 紫外检测器 [0014] 色谱柱 ： C18 色谱柱， 4.6mm×250mm， 5μm ； [0015] 流动相 ： 将乙腈和水按体积比为乙腈 ： 水 =70 ： 30 进行混合， 脱气。 [0016] 流速 ： 1.0mL ／ min ； [0017] 检测波长 ： 225nm; [0018] 进样量 ： 10μL。 [0019] (5) 衍生化反应 [0020] 用注射器分别吸取样品溶液和标准工作液过阴离子交换柱后， 消除肝素的影响。 再分别移取过柱后的过氧化氢标准工作液和样品溶液各 1mL 于 10mL 棕色瓶中， 加入 2mL 三 苯基膦乙腈溶液， 振摇， 置于暗处室温反应 30min。 [0021] 衍生化反应结束后， 立即开始色谱分析， 吸取 10μL 样品溶液注入高效液相色谱 仪。在上述色谱条件下测定其峰面积， 利用外标法计算样品溶液中过氧化氢的浓度。 四、 附图说明 图 1 是样品未经过阴离子交换柱处理的谱图 ； 图 2 是样品经过阴离子交换柱处理的谱 图。 说 明 书 CN 103913521 A 4 1/1 页 5 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103913521 A 5