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    重庆时时彩内部程序: 精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201410140393.6

    申请日:

    2014.04.09

    公开号:

    CN103913478A

    公开日:

    2014.07.09

    当前法律状态:

    撤回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):G01N 24/08申请公布日:20140709|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 24/08申请日:20140409|||公开
    IPC分类号: G01N24/08 主分类号: G01N24/08
    申请人: 四川农业大学
    发明人: 刘光芒; 贾刚; 陈小玲; 赵华; 汪静
    地址: 611130 四川省成都市温江区惠民路211号
    优先权:
    专利代理机构: 四川君士达律师事务所 51216 代理人: 芶忠义
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410140393.6

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2016.11.09|||2014.08.06|||2014.07.09

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的视为撤回|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法,基于代谢组学技术,为准确评价精胺促进动物肠道发育整体营养代谢效果提供了新途径;动物肠道代谢物谱图的变化可充分反映营养、个体、环境等方面的综合影响,可及时、灵敏地反映动物精胺营养及其代谢状况与肠道发育之间的相关性。本发明可筛选出与肠道精胺营养过程相关的生物标志物,揭示精胺营养过程的本质,对完善动物的消化吸收功能,优化饲料配方,提高动物的健康生长具有重要的理论与实践意义,同时填补了结合代谢组学评价动物肠道发育整体营养代谢状况,提高动物肠道发育的空白。研究结果在养殖业有实际的应用价值。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法,其特征在于,该基于代谢组学技术评价精胺对动物肠道整体营养代谢状况的方法包括以下步骤:
    步骤一,采用精胺唯一差异原则或者双交换实验设计;
    步骤二,动物肠道组织正确采集和处理;
    步骤三,NMR检测获得原始数据,并对谱图进行相位校正、基线调整、定标、归一化处理;
    步骤四,主成分分析、偏最小二乘法判别分析及对模型的验证;
    步骤五,正交偏最小二乘法判别分析;
    步骤六,生物标志物的获得及鉴定;
    步骤七,对潜在关键代谢分子进一步功能性验证。

    2.  如权利要求1所述的精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法,其特征在于,在步骤二中,动物肠道采集方法为:
    动物麻醉后解剖,取出相应的肠段后立即在液氮中速冻至少一小时,然后放入零下80度冰柜存放。

    3.  如权利要求2所述的精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法,其特征在于,使用电子天平称取肠道组织60mg左右,均取组织的同一部位,分别放置于2ml的EP管中,加入1ml体积浓度为66.7%甲醇溶液以及30颗直径2mm左右碳化钨圆珠,在组织破碎仪上进行90s的破碎,然后在冰浴超声波清洗仪超声3min,然后在4℃,14500g高速离心10min,吸取上清液另置于新的2ml 的EP管中,再重复破碎提取过程2次,将上清集合用真空离心浓缩仪挥去有机溶剂后使用冷冻干燥仪冷冻干燥。

    4.  如权利要求3所述的精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法,其特征在于,将冷冻干燥的组织提取物粉末加入600μL磷酸缓冲液,充分振荡混匀后,12000rpm离心10min;取上清液加入到核磁共振管中检测。

    5.  如权利要求4所述的精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法,其特征在于,磷酸缓冲液,包含0.1MNaH2PO4/K2HPO4和0.01%NaN3,50%的D2O,5.0mMDSS,用作化学位移指示剂,δ0.00ppm,0.01%NaN3用作细菌防腐剂。

    6.  如权利要求1所述的精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法,其特征在于,在步骤三中,肠道组织样品检测是在BrukerAvanceII600MHz下进行,采用预饱和的1DNOESY脉冲序列,取如下参数:谱宽9,590Hz,混合时间0.1s,驰豫延迟时间2s,采样点数49178;在驰豫延迟和混合期间采用预饱和方式抑制水峰,谱仪偏置设置在水峰的位置。

    7.  如权利要求1所述的精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法,其特征在于,NMR检测技术获得谱图,并对谱图进行处理;
    使用Mestrenova8.1.2软件,对所得NMR数据经傅立叶变换得到谱图,进行相位校正、基线校正及定标等处理,所有谱图在傅立叶变换时均乘以增宽因子为1Hz的指数窗函数及提高信噪比,对0.7–9.5ppm区间内的谱图按每段0.002ppm的宽度进行分段积分,同时排除包含溶剂峰部分δ4.54~5.20以及甲醇物质峰部分δ1.15~1.20,δ3.56~3.63,将积分按每张谱的总积分强度归一化;然后将归一化后的数据导入版本11.0的Simca-p软件分别进行主成分分析(PCA)、 偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)。

    8.  如权利要求1所述的精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法,其特征在于,综合考虑组内样本数n,通过皮尔森相关系数显著性差异检测,得到引起组间差异的代谢物,当P<0.05时,可以确定评估代谢物浓度具有显著性变化,得出相应的生物标志物;结合层次聚类、Randomforest等方法,筛选出潜在的关键代谢分子。

    9.  如权利要求1所述的精胺调控哺乳动物肠道发育的代谢组学试验方法,其特征在于,结合RT-PCR、RNA干扰等技术测定前面筛选到肠道发育调控潜在的关键代谢分子调节酶基因,进一步确认此代谢分子的功能。

    关 键 词:
    精胺 调控 哺乳动物 肠道 发育 代谢 试验 方法
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