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    重庆时时彩外围做假吗: 一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法.pdf

    关 键 词:
    一种 纯化 抗体 制备 曲线 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201310015275.8

    申请日:

    2013.01.16

    公开号:

    CN103926207A

    公开日:

    2014.07.16

    当前法律状态:

    驳回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):G01N 21/33申请公布日:20140716|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 21/33申请日:20130116|||公开
    IPC分类号: G01N21/33 主分类号: G01N21/33
    申请人: 辽宁成大生物股份有限公司
    发明人: 高旭哲; 张玥; 刘畅; 战辛
    地址: 110179 辽宁省沈阳市浑南新区新放街1号
    优先权:
    专利代理机构: 沈阳亚泰专利商标代理有限公司 21107 代理人: 韩辉
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201310015275.8

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.01.12|||2014.08.13|||2014.07.16

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的驳回|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法,其特点是:A)对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化;B)同时用多个0.5ml离心管接收流出组分;C)用Bindingbuffer清洗柱;使纯化样品进入柱内,连续接收流出组分;D)使用Bindingbuffer清洗柱,连续接收流出组分;E)使用Elutionbuffer洗脱柱,连续接收流出组分;F)每个收集管中取50μl分别加入384孔板中。本方法利用酶标仪,对每个洗脱组分在280nm波长下检测其吸收值,进而检测其IgG含量,并得到最终纯化组分曲线,可替代自动检测器描述整个过程纯化。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法,其特征在于有以下步骤:
    A)对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化,选择纯化柱的体积是1ml;
    B)同时用多个0.5ml离心管接收流出组分,每个管内收集0.2ml流出组分;
    C)首先平衡柱:用Binding buffer清洗柱,清洗5个柱体积(取最后1个柱体积的流出组分作为实验空白);
    D)使用注射器注射1ml待纯化样品进入柱内,连续接收流出组分;
    C)使用5个柱体积的Binding buffer清洗柱,连续接收流出组分;
    E)使用3个柱体积的Elution buffer 洗脱柱,连续接收流出组分;
    F)每个收集管中取50μl分别加入384孔板中.(此板需适合紫外检测,加样时避免产生气泡);设定平衡柱的流出组分为空白,同时设定酶标仪波长280nm。

    说明书

    说明书一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法
    技术领域
    本发明涉及一种生物制备中的实验方法,特别是涉及一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法,主要应用于实验室内抗体(蛋白)制备,可以代替检测器制备纯化曲线。
    背景技术
    紫外检测器适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。其特点:使用面广(如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);灵敏度高;线性范围宽;对温度和流速变化不敏感;可检测梯度溶液洗脱的样品。
    酶标仪实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同, 可以同时对几十或上百个样品进行检测。
    微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板,板上有多排大小均匀一致的小孔,微孔板上每个小孔可盛放10-100微升的溶液??梢钥焖?、平行检测大量的样品。
    蛋白质纯化是生物实验的基础技术,实验室内经常制备少量纯化抗体用于实验应用。由于样品量少,多采用注射器加压的手动进样方式代替进样泵,并且一般不需检测器检测流出各组分。
    发明内容
    本发明的目的在于解决现有技术的上述不足,公开一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法。本发明在少量制备抗体时,可以代替实验室昂贵的纯化设备,用手动的方法绘制整个纯化过程曲线图谱。
    本发明利用实验室常用仪器——酶标仪,以蛋白A 亲和柱纯化兔抗乙脑病毒多克隆抗体为例对每个洗脱组分在280nm波长下检测其吸收值,进而检测其IgG含量,并得到最终纯化组分曲线,替代自动检测器描述整个过程纯化。
    本发明给出的技术方案是:这种纯化抗体中制备纯化曲线的方法,其特征在于有以下步骤。
    A)对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化,选择纯化柱的体积是1ml。
    B)同时用多个0.5ml离心管接收流出组分,每个管内收集0.2ml流出组分。
    C)首先平衡柱:用Binding buffer清洗柱,清洗5个柱体积(取最后1个柱体积的流出组分作为实验空白)。
    D)使用注射器注射1ml待纯化样品进入柱内,连续接收流出组分。
    C)使用5个柱体积的Binding buffer清洗柱,连续接收流出组分。
    E)使用3个柱体积的Elution buffer 洗脱柱,连续接收流出组分。
    F)每个收集管中取50μl分别加入384孔板中.(此板需适合紫外检测,加样时避免产生气泡);设定平衡柱的流出组分为空白。同时设定酶标仪波长280nm。
    与现有技术相比,本发明的有益效果是。
    本发明在少量制备抗体时,可以代替实验室昂贵的纯化设备,用手动的方法直接绘制整个纯化过程曲线图谱,不必使用专用设备绘制纯化曲线。
    附图说明
    图1是亲和纯化抗体的曲线。
    具体实施方式
    下面结合附图和实施例对本发明给出的技术方案做出进一步说明。
    这种纯化抗体中制备纯化曲线的方法有以下步骤。
    A)对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化。选择纯化柱的体积是1ml。
    B)同时用多个0.5ml离心管接收流出组分,每个管内收集0.2ml流出组分。
    C)首先平衡柱:用Binding buffer清洗柱,清洗5个柱体积(取最后1个柱体积的流出组分作为实验空白)。
    D)使用注射器注射1ml待纯化样品进入柱内,连续接收流出组分。
    C)使用5个柱体积的Binding buffer清洗柱,连续接收流出组分。
    E)使用3个柱体积的Elution buffer 洗脱柱,连续接收流出组分。
    F)每个收集管中取50μl分别加入384孔板中.(此板需适合紫外检测,加样时避免产生气泡);设定平衡柱的流出组分为空白。同时设定酶标仪波长280nm。
    亲和纯化检测A280数据列表。

     图1是亲和纯化抗体的曲线,图中可见:在0-4个柱体积清洗可以完全去除杂质,6-8柱体积回收抗体,在过多回收会降低抗体浓度。从图中的两个峰面积粗略估算杂质与抗体的含量比例?!  ∧谌堇醋宰ɡ鴚ww.www.4mum.com.cn转载请标明出处

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