• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 8
    • 下载费用:20 金币  

    重庆时时彩外围贴吧: 一种前列腺肿瘤标志物的多元悬浮芯片检测方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201310013495.7

    申请日:

    2013.01.15

    公开号:

    CN103926407A

    公开日:

    2014.07.16

    当前法律状态:

    撤回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):G01N 33/577申请公布日:20140716|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/577申请日:20130115|||公开
    IPC分类号: G01N33/577 主分类号: G01N33/577
    申请人: 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所
    发明人: 刘楠; 高志贤; 马新华; 李晓丽; 欧国荣
    地址: 300050 天津市和平区大理道1号
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201310013495.7

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2016.05.25|||2014.08.13|||2014.07.16

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的视为撤回|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及一种多前列腺肿瘤标志物的高通量悬浮芯片检测方法。前列腺肿瘤是男性最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率都名列前茅。单一的肿瘤标志物在检测过程中存在漏诊和误诊的不足,多种前列腺肿瘤肿瘤标志物的同时检测不仅有利于前列腺肿瘤的早期诊断,而且在前列腺肿瘤的发生、发展与转移的检测、治疗效果监测以及预后判断等方面均具有很高的价值。本方法将间接竞争免疫分析与悬浮芯片技术进行结合,将抗原(肿瘤标志物)固定在微球上,建立针对血清中前列腺肿瘤标志物的新型的悬浮芯片检测技术,实现对患者生物样品中前列腺肿瘤标志物的快速、特异、准确和高效的定量检测,为临床多种肿瘤标志物快速检测分析提供了新方法和思路。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种前列腺肿瘤标志物的多元悬浮芯片检测方法,其特征包括如下步骤:
    (1)四种前列腺肿瘤肿瘤标志物悬浮芯片检测微球的制备;
    (2)悬浮芯片检测条件优化;
    (3)四种前列腺肿瘤肿瘤标志物的悬浮芯片多元检测方法的建立;
    (4)实际血清样品的检测;
    其中,所述的悬浮芯片检测微球为直径5.6μm的、分别包被了四种前列腺肿瘤肿瘤标志物的聚苯乙烯荧光编码微球。

    2.  根据权利要求1所述的一种前列腺肿瘤标志物的多元悬浮芯片检测方法,其特征是所述步骤(1)为:先将四种荧光微球用偶联试剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺分别活化,然后将四种前列腺肿瘤标志物:前列腺特异性抗原(Prostate-specific antigen,PSA)、前列性干细胞抗原(Prostate stem cell antigen,PSCA)、前列腺特异性膜抗原(Prostate-specific membrane antigen,PSMA)和碱性磷酸酶(Prostatic acid phosphatase,PAP)通过氨基化反应分别偶联于所述四种活化的荧光微球上,制成四种前列腺肿瘤标志物的荧光探针微球。

    3.  根据权利要求1所述的一种前列腺肿瘤标志物的多元悬浮芯片检测方法,其特征是所述步骤(2)为:对悬浮芯片检测条件进行全面的优化,包括:反应缓冲液的选择(PBS/PBS-TB/PBS-TBN-人血清)、最佳抗原抗体反应时间(1~2h)、偶联抗原量(6-15μg)、抗体加入量(2~6ng)、荧光报告分子-链霉亲和素-藻红蛋白(Strepavidin-phycoerythrin,SA-PE)的稀释比例(1∶100~1∶800)和作用时间(5~45min)等反应条件;经过优化,该发明摒弃了常规悬浮芯片检测技术步骤繁琐、实验耗时长的不足,基本达到抗原抗体的完全反应,在实验中无需常规悬浮芯片实验所必需的昂贵的滤膜板和抽滤泵,仅需普通96孔细胞培养板或酶标板即可,也无需进行多次反复抽滤的步骤,因此,本发明提供的技术方法,操作简单、快捷;可显著提高检测中位荧光强度值(mean-fluorescent intensity,MFI),使结果获得稳定可靠;同时显著降低了检测成本。

    4.  根据权利要求1所述的一种前列腺肿瘤标志物的多元悬浮芯片检测方法,其特征是所述步骤(3)为:在步骤(2)对悬浮芯片检测条件进行全面的优化后的基础上,将四种前列腺肿瘤标志物的单克隆抗体等比例进行混合;取96孔酶标板,在反应孔中,加入混合抗体,保证每种抗体2~6ng,并同时设定相应的阴性对照孔和重复孔,用配置好的标准品稀释液将PSA、PSCA、PSMA、PAP抗原稀释成不同的浓度梯度,并等比例混合;将步骤(1)所获得的多种微球探针等比例混合,微球数量1800~2300/孔,用稀释缓冲液补足50μL/孔,检测酶标板漩涡中速振荡1~2h,然后每孔加入稀释好的SA-PE50μL,中速反应5~45min,悬浮芯片读取100 个荧光微球,获得MFI,以减去本底值所获得的MFI值与阳性对照孔MFI的比值(即荧光信号强度比值)为Y轴,以标志物的浓度为X轴,作出前列腺肿瘤标志物的悬浮芯片多元标准回归曲线方程;从而建立四种前列腺肿瘤肿瘤标志物的多元检测方法。

    5.  根据权利要求1所述的一种前列腺肿瘤标志物的多元悬浮芯片检测方法,其特征是所述步骤(4)为:采集患者实际血液样品后,加入抗凝剂并离心后储存于4℃待用;检测步骤同步骤(3),由获得的获得荧光信号强度比值代入标准曲线方程中,推算出对应的前列腺肿瘤标志物的具体浓度。

    关 键 词:
    一种 前列腺 肿瘤 标志 多元 悬浮 芯片 检测 方法
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    0条评论

    还可以输入200字符

    暂无评论,赶快抢占沙发吧。

    关于本文
    本文标题:一种前列腺肿瘤标志物的多元悬浮芯片检测方法.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-6130165.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03