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    重庆时时彩高返点: 对细胞表面的分析物进行检测和/或定量的改进方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201280043398.6

    申请日:

    2012.07.04

    公开号:

    CN103858010A

    公开日:

    2014.06.11

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/542申请日:20120704|||公开
    IPC分类号: G01N33/542; C12Q1/68 主分类号: G01N33/542
    申请人: CISBIO生物试验公司
    发明人: 埃尔韦·巴赞; 热拉尔·马西斯
    地址: 法国科多莱
    优先权: 2011.07.06 FR 1156103
    专利代理机构: 北京信慧永光知识产权代理有限责任公司 11290 代理人: 洪俊梅;张淑珍
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201280043398.6

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2016.11.23|||2014.07.16|||2014.06.11

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及对在细胞表面表达或存在于组织样品中的蛋白进行定量的方法,所述方法包括使用两种能够特异性结合至所述蛋白的结构域的配体。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种用于对在细胞表面表达或存在于组织样品中的感兴趣的蛋白进行定量的方法,所述方法包括如下步骤:
    (i)使表达所述蛋白的细胞或组织样品与第一配体和第二配体接触,这些配体的每一种均能够特异性地结合至所述蛋白的结构域,并且这些配体分别标记有供体化合物和受体化合物,所述供体化合物和所述受体化合物二者形成FRET伴侣对;
    (ii)清洗所述细胞或所述组织样品;
    (iii)测量由测量介质发射的FRET信号。

    2.  如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法包括在所述清洗步骤前,将所述细胞或所述组织样品与用于DNA的荧光标记的试剂进行孵育的步骤;并且,根据这一标记试剂的发光所对应的信号对所述FRET信号进行归一化。

    3.  如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述第一配体和所述第二配体为抗体。

    4.  如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述第一配体为所述感兴趣的蛋白的已知配体且不是抗体;并且,所述第二配体为抗体。

    5.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的蛋白为膜蛋白。

    6.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的蛋白选自于G蛋白偶联膜蛋白受体和受体酪氨酸激酶。

    7.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的蛋白选自于EGFR、HER2、HER3和HER4。

    8.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述供体化合物为稀土元素螯合物或稀土元素穴状化合物。

    9.  如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述供体化合物为铕螯合物或铕穴状化合物、或铽螯合物或铽穴状化合物。

    10.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述受体化合物选自于:别藻蓝蛋白、罗丹明、花青素、方酸菁、香豆素、原黄素、吖啶、荧光素、硼-二吡咯亚甲基衍生物、已知名称为“Atto”的荧光团、已知名称为“DY”的荧光团、已知名称为“Alexa”的化合物和硝基苯并噁二唑。

    11.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法在固态组织样品上实施。

    12.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法利用固态组织样品实施;并且,以大于10nM的终浓度将所述第一配体和所述第二配体引入所述测量介质。

    13.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法利用固态组织样品实施;并且,以20nM-80nM的终浓度将所述第一配体和所述第二配体引入所述测量介质。

    14.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法在固态组织样品上实施;并且,所述方法包括以细胞裂解物的形式对所述样品进行均质化的步骤。

    15.  如权利要求14所述的方法,其特征在于,对所述组织样品进行均质化的步骤在引入所述第一配体和所述第二配体之后、测量所述FRET信号之前进行。

    16.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法在肿瘤组织样品上实施。

    17.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,当所述第一配体或所述第二配体为抗体时,所述抗体的表位位于所述感兴趣的蛋白暴露至胞外基质的结构域上。

    18.  如在前权利要求中任一项所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的蛋白为HER2蛋白;并且,所述第一配体和所述第二配体是对该蛋白具有特异性的抗体。

    19.  用于实施在前权利要求中任一项所述的方法的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含第一配体和第二配体,这些配体的每一种均能够特异性地结合至感兴趣的膜蛋白的结构域,并且这些配体分别标记有供体化合物和受体化合物,所述供体化合物和所述受体化合物形成FRET伴侣对。

    20.  如权利要求19所述的试剂盒,其特征在于,所述配体为对EGFR受体具有特异性的抗体。

    21.  如权利要求19所述的试剂盒,其特征在于,所述配体为对HER2蛋白具有特异性的抗体。

    22.  一种用于确定患者能否以结合至HER2蛋白的抗体进行治疗处理的离体(ex vivo)方法,其特征在于,所述方法包括实施如权利要求1-18所述的定量方法,其中,所述感兴趣的蛋白为HER2蛋白。

    23.  如权利要求22所述的方法,其特征在于,所述方法在来自HER2蛋白表达的免疫组织化学分析结果为阴性的患者的组织样品上实施。

    关 键 词:
    细胞 表面 分析 进行 检测 定量 改进 方法
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