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    一种 复合 微生物 制备 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201610540621.8

    申请日:

    2016.07.11

    公开号:

    CN106191024A

    公开日:

    2016.12.07

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):C12N 11/14申请日:20160711|||公开
    IPC分类号: C12N11/14; C12N11/08; C05F11/08 主分类号: C12N11/14
    申请人: 吴迪
    发明人: 吴迪; 盛海丰; 孟浩影
    地址: 213164 江苏省常州市天宁区浦前镇149号
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201610540621.8

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.01.04|||2016.12.07

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种复合微生物菌剂的制备方法,属于复合微生物菌剂制备技术领域。本发明取氧化铁磁性粒子与乙醇溶液超声分散处理,过滤得滤渣,加入过氧化月桂酰等搅拌反应,超声分散,过滤、洗涤制得复合微生物菌剂载体备用,再取牛肉膏、蛋白胨等加入培养皿中混合均匀,杀菌消毒得发酵培养基,与牛粪培养所得的混合菌落混合发酵,过滤得滤液,浸泡备用的复合微生物菌剂载体,再过滤得滤渣风干制得复合微生物菌剂。本发明的有益效果是:本发明制备步骤简单,生产周期短,所得产品生物利用度高;高活性,抑菌效果好,持效时间延长了15~20天。

    权利要求书

    1.一种复合微生物菌剂的制备方法,其特征在于具体制备步骤为:
    (1)称取3~5g氧化铁磁性粒子加入到烧杯中,向烧杯中加入100~200mL质量浓度为
    75%乙醇溶液,将烧杯置于超声波分散仪中,超声处理2~3h,静置20~30min,过滤,得到滤
    渣,得预处理后的磁性氧化铁;
    (2)将上述预处理后的磁性氧化铁加入到带有温度计和回流装置的三口烧瓶中,将烧
    杯置于水浴锅中,控制温度为80~90℃,再依次加入0.3~0.5g过氧化月桂酰、10~20g甲基
    丙烯酸,搅拌4~5h,随后加入5~7g甲基三氯硅烷,搅拌反应2~3h,得到反应物,向反应物
    中加入200~300mL去离子水,并置于超声波分散仪中,超声分散20~30min,过滤,得到微
    球,将微球用去离子水洗涤3~5次,得到多孔聚合物微球,即复合微生物菌剂载体,备用;
    (3)依次称取20~30g牛肉膏、10~15g蛋白胨、3~5g氯化钠、1~3g磷酸氢二钠、1~3g
    磷酸二氢钠加入到培养皿中,搅拌均匀,并置于紫外灯下消毒杀菌,得到发酵培养基;
    (4)称取10~20g牛粪加入到培养皿中,将培养皿置于摇床中,在40~42℃下,振荡培养
    48~60h,用去离子水淋洗培养基,得到混合菌落,将菌落置于发酵罐中,并依次加入上述发
    酵培养基、200~300mL去离子水,控制温度在35~45℃,发酵4~5天,待发酵结束,将发酵混
    合物进行过滤,得到滤液;
    (5)将步骤(2)备用的复合微生物菌剂载体放入上述所得滤液中,浸泡3~4h,过滤,得
    滤渣,将滤渣放入风干机中风干2~3h,即可得到一种复合微生物菌剂。

    说明书

    一种复合微生物菌剂的制备方法

    技术领域

    本发明涉及一种复合微生物菌剂的制备方法,属于复合微生物菌剂制备技术领
    域。

    背景技术

    随着科学技术和生产工艺的不断发展,大量的人工化合物进入环境中,由于其结
    构的复杂性和生物陌生性,在短时间内很难被微生物分解利用而进入物质循环。对这类污
    染物具有高效降解能力的微生物在自然环境中的种类和数量都较少,在种间竞争中处于劣
    势。生物强化技术可以充分发挥微生物的潜力,改善难降解有机物的生物处理效果。目前国
    内微生物菌剂发展迅速,用以做复合肥、有机肥、冲施肥等的功能菌,可有效提高肥料利用
    率,防治细菌真菌病害感染,见效快,收益高。复合微生物菌剂,由两种或两种以上且互不拮
    抗的微生物菌种制成的微生物制剂。此类菌剂一般具有种类全、配伍合理、功能性强、经济
    效益高等优良特点。菌种培养,直接从被污染的环境或污泥中富集、筛选。由于石油污染、海
    上油轮事故或者来源于大气沉降的多环芳烃,海底沉积了大量的石油组分,成为天然的富
    集驯化场所,因此可从海底沉积物中筛选到降解石油组分特别是多环芳烃的高效降解菌
    株;通过较长时间的驯化,诱导出自然界中已经存在的微生物,产生能对特定化合物进行降
    解的代谢途径和代谢酶类,从而获得这些物质的降解菌种;通过基因改良技术改造微生物
    的降解特性,可使其降解性能得到显著提高或者获得新的降解性能。但目前方法制备微生
    物菌剂,普遍存在生产周期长,分离过程复杂,生物利用率低,导致其活性低,抑菌效果差,
    持效时间短问题。

    发明内容

    本发明所要解决的技术问题:针对目前方法制备微生物菌剂,生产周期长,分离过
    程复杂,生物利用率低,导致其活性低,抑菌效果差,持效时间短的弊端,提供了一种取氧化
    铁磁性粒子与乙醇溶液超声分散处理,过滤得滤渣,加入过氧化月桂酰等搅拌反应,超声分
    散,过滤、洗涤制得复合微生物菌剂载体备用,再取牛肉膏、蛋白胨等加入培养皿中混合均
    匀,杀菌消毒得发酵培养基,与牛粪培养所得的混合菌落混合发酵,过滤得滤液,浸泡备用
    的复合微生物菌剂载体,再过滤得滤渣风干制得复合微生物菌剂的方法。本发明制备步骤
    简单,生产周期短,所得产品生物利用度高,有效解决了其活性低,抑菌效果差,持效时间短
    问题。

    为解决上述技术问题,本发明采用如下所述的技术方案是:

    (1)称取3~5g氧化铁磁性粒子加入到烧杯中,向烧杯中加入100~200mL质量浓度为
    75%乙醇溶液,将烧杯置于超声波分散仪中,超声处理2~3h,静置20~30min,过滤,得到滤
    渣,得预处理后的磁性氧化铁;

    (2)将上述预处理后的磁性氧化铁加入到带有温度计和回流装置的三口烧瓶中,将烧
    杯置于水浴锅中,控制温度为80~90℃,再依次加入0.3~0.5g过氧化月桂酰、10~20g甲基
    丙烯酸,搅拌4~5h,随后加入5~7g甲基三氯硅烷,搅拌反应2~3h,得到反应物,向反应物
    中加入200~300mL去离子水,并置于超声波分散仪中,超声分散20~30min,过滤,得到微
    球,将微球用去离子水洗涤3~5次,得到多孔聚合物微球,即复合微生物菌剂载体,备用;

    (3)依次称取20~30g牛肉膏、10~15g蛋白胨、3~5g氯化钠、1~3g磷酸氢二钠、1~3g
    磷酸二氢钠加入到培养皿中,搅拌均匀,并置于紫外灯下消毒杀菌,得到发酵培养基;

    (4)称取10~20g牛粪加入到培养皿中,将培养皿置于摇床中,在40~42℃下,振荡培养
    48~60h,用去离子水淋洗培养基,得到混合菌落,将菌落置于发酵罐中,并依次加入上述发
    酵培养基、200~300mL去离子水,控制温度在35~45℃,发酵4~5天,待发酵结束,将发酵混
    合物进行过滤,得到滤液;

    (5)将步骤(2)备用的复合微生物菌剂载体放入上述所得滤液中,浸泡3~4h,过滤,得
    滤渣,将滤渣放入风干机中风干2~3h,即可得到一种复合微生物菌剂。

    本发明的应用方法:将本发明制得的复合微生物菌剂添加至肥料中,添加量为肥
    料的1.0~1.2%,混合均匀后,施肥即可??捎行г黾臃市?,提高肥料的生物利用率,降解农
    药残留和大分子有机物,增强了农作物抗病性和免疫力;该复合微生物菌剂高活性,抑菌效
    果好,持效时间延长了15~20天。

    本发明与其他方法相比,有益技术效果是:

    (1)本发明制备步骤简单,生产周期短,所得产品生物利用度高;

    (2)高活性,抑菌效果好,持效时间延长了15~20天。

    具体实施方式

    首先称取3~5g氧化铁磁性粒子加入到烧杯中,向烧杯中加入100~200mL质量浓
    度为75%乙醇溶液,将烧杯置于超声波分散仪中,超声处理2~3h,静置20~30min,过滤,得
    到滤渣,得预处理后的磁性氧化铁;然后将上述预处理后的磁性氧化铁加入到带有温度计
    和回流装置的三口烧瓶中,将烧杯置于水浴锅中,控制温度为80~90℃,再依次加入0.3~
    0.5g过氧化月桂酰、10~20g甲基丙烯酸,搅拌4~5h,随后加入5~7g甲基三氯硅烷,搅拌反
    应2~3h,得到反应物,向反应物中加入200~300mL去离子水,并置于超声波分散仪中,超声
    分散20~30min,过滤,得到微球,将微球用去离子水洗涤3~5次,得到多孔聚合物微球,即
    复合微生物菌剂载体,备用;再依次称取20~30g牛肉膏、10~15g蛋白胨、3~5g氯化钠、1~
    3g磷酸氢二钠、1~3g磷酸二氢钠加入到培养皿中,搅拌均匀,并置于紫外灯下消毒杀菌,得
    到发酵培养基;称取10~20g牛粪加入到培养皿中,将培养皿置于摇床中,在40~42℃下,振
    荡培养48~60h,用去离子水淋洗培养基,得到混合菌落,将菌落置于发酵罐中,并依次加入
    上述发酵培养基、200~300mL去离子水,控制温度在35~45℃,发酵4~5天,待发酵结束,将
    发酵混合物进行过滤,得到滤液;最后将备用的复合微生物菌剂载体放入上述所得滤液中,
    浸泡3~4h,过滤,得滤渣,将滤渣放入风干机中风干2~3h,即可得到一种复合微生物菌剂。

    实例1

    首先称取3g氧化铁磁性粒子加入到烧杯中,向烧杯中加入100mL质量浓度为75%乙醇溶
    液,将烧杯置于超声波分散仪中,超声处理2h,静置20min,过滤,得到滤渣,得预处理后的磁
    性氧化铁;然后将上述预处理后的磁性氧化铁加入到带有温度计和回流装置的三口烧瓶
    中,将烧杯置于水浴锅中,控制温度为80℃,再依次加入0.3g过氧化月桂酰、10g甲基丙烯
    酸,搅拌4h,随后加入5g甲基三氯硅烷,搅拌反应2h,得到反应物,向反应物中加入200mL去
    离子水,并置于超声波分散仪中,超声分散20min,过滤,得到微球,将微球用去离子水洗涤3
    次,得到多孔聚合物微球,即复合微生物菌剂载体,备用;再依次称取20g牛肉膏、10g蛋白
    胨、3g氯化钠、1g磷酸氢二钠、1g磷酸二氢钠加入到培养皿中,搅拌均匀,并置于紫外灯下消
    毒杀菌,得到发酵培养基;称取10g牛粪加入到培养皿中,将培养皿置于摇床中,在40℃下,
    振荡培养48h,用去离子水淋洗培养基,得到混合菌落,将菌落置于发酵罐中,并依次加入上
    述发酵培养基、200mL去离子水,控制温度在35℃,发酵4天,待发酵结束,将发酵混合物进行
    过滤,得到滤液;最后将备用的复合微生物菌剂载体放入上述所得滤液中,浸泡3h,过滤,得
    滤渣,将滤渣放入风干机中风干2h,即可得到一种复合微生物菌剂。

    将本发明制得的复合微生物菌剂添加至肥料中,添加量为肥料的1.0%,混合均匀
    后,施肥即可??捎行г黾臃市?,提高肥料的生物利用率,降解农药残留和大分子有机物,增
    强了农作物抗病性和免疫力;该复合微生物菌剂高活性,抑菌效果好,持效时间延长了15
    天。

    实例2

    首先称取4g氧化铁磁性粒子加入到烧杯中,向烧杯中加入150mL质量浓度为75%乙醇溶
    液,将烧杯置于超声波分散仪中,超声处理3h,静置25min,过滤,得到滤渣,得预处理后的磁
    性氧化铁;然后将上述预处理后的磁性氧化铁加入到带有温度计和回流装置的三口烧瓶
    中,将烧杯置于水浴锅中,控制温度为85℃,再依次加入0.4g过氧化月桂酰、15g甲基丙烯
    酸,搅拌5h,随后加入6g甲基三氯硅烷,搅拌反应3h,得到反应物,向反应物中加入250mL去
    离子水,并置于超声波分散仪中,超声分散25min,过滤,得到微球,将微球用去离子水洗涤4
    次,得到多孔聚合物微球,即复合微生物菌剂载体,备用;再依次称取25g牛肉膏、13g蛋白
    胨、4g氯化钠、2g磷酸氢二钠、2g磷酸二氢钠加入到培养皿中,搅拌均匀,并置于紫外灯下消
    毒杀菌,得到发酵培养基;称取15g牛粪加入到培养皿中,将培养皿置于摇床中,在41℃下,
    振荡培养54h,用去离子水淋洗培养基,得到混合菌落,将菌落置于发酵罐中,并依次加入上
    述发酵培养基、250mL去离子水,控制温度在40℃,发酵5天,待发酵结束,将发酵混合物进行
    过滤,得到滤液;最后将备用的复合微生物菌剂载体放入上述所得滤液中,浸泡4h,过滤,得
    滤渣,将滤渣放入风干机中风干3h,即可得到一种复合微生物菌剂。

    将本发明制得的复合微生物菌剂添加至肥料中,添加量为肥料的1.1%,混合均匀
    后,施肥即可??捎行г黾臃市?,提高肥料的生物利用率,降解农药残留和大分子有机物,增
    强了农作物抗病性和免疫力;该复合微生物菌剂高活性,抑菌效果好,持效时间延长了18
    天。

    实例3

    首先称取5g氧化铁磁性粒子加入到烧杯中,向烧杯中加入200mL质量浓度为75%乙醇溶
    液,将烧杯置于超声波分散仪中,超声处理3h,静置30min,过滤,得到滤渣,得预处理后的磁
    性氧化铁;然后将上述预处理后的磁性氧化铁加入到带有温度计和回流装置的三口烧瓶
    中,将烧杯置于水浴锅中,控制温度为90℃,再依次加入0.5g过氧化月桂酰、20g甲基丙烯
    酸,搅拌5h,随后加入7g甲基三氯硅烷,搅拌反应3h,得到反应物,向反应物中加入300mL去
    离子水,并置于超声波分散仪中,超声分散30min,过滤,得到微球,将微球用去离子水洗涤5
    次,得到多孔聚合物微球,即复合微生物菌剂载体,备用;再依次称取30g牛肉膏、15g蛋白
    胨、5g氯化钠、3g磷酸氢二钠、3g磷酸二氢钠加入到培养皿中,搅拌均匀,并置于紫外灯下消
    毒杀菌,得到发酵培养基;称取20g牛粪加入到培养皿中,将培养皿置于摇床中,在42℃下,
    振荡培养60h,用去离子水淋洗培养基,得到混合菌落,将菌落置于发酵罐中,并依次加入上
    述发酵培养基、300mL去离子水,控制温度在45℃,发酵5天,待发酵结束,将发酵混合物进行
    过滤,得到滤液;最后将备用的复合微生物菌剂载体放入上述所得滤液中,浸泡4h,过滤,得
    滤渣,将滤渣放入风干机中风干3h,即可得到一种复合微生物菌剂。

    将本发明制得的复合微生物菌剂添加至肥料中,添加量为肥料的1.2%,混合均匀
    后,施肥即可??捎行г黾臃市?,提高肥料的生物利用率,降解农药残留和大分子有机物,增
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    天。

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