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    重庆时时彩奖金后二: PTIV衍生物以及包含其的纳米载体.pdf

    关 键 词:
    PTIV 衍生物 以及 包含 纳米 载体
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    摘要
    申请专利号:

    CN201580030341.6

    申请日:

    2015.04.30

    公开号:

    CN106471006A

    公开日:

    2017.03.01

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):C07F 15/00申请日:20150430|||公开
    IPC分类号: C07F15/00; A61K31/282; A61K9/50; A61K9/14; A61K47/24; A61P35/00 主分类号: C07F15/00
    申请人: 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展有限公司
    发明人: S·贝妮塔; T·纳萨尔; 丹·吉布森; 埃曼·阿布·阿马尔
    地址: 以色列耶路撒冷
    优先权: 2014.05.02 US 61/987,717
    专利代理机构: 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 代理人: 胡秋玲;郑霞
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201580030341.6

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.03.29|||2017.03.01

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及用于癌症疗法中的改进的药物性能的Pt(IV)亲脂性衍生物,以及包含其的纳米载体。

    权利要求书

    1.一种式(I)的化合物:

    其中
    Pt是铂原子;
    A是C8-C22脂肪酸,所述C8-C22脂肪酸通过所述脂肪酸的氧原子与所述Pt原子缔合;
    B是C2-C22脂肪酸,所述C2-C22脂肪酸通过所述脂肪酸的氧原子与所述Pt原子缔合;
    条件是,A和B中的每个都不是C6-C9支链烷基脂肪酸;
    L是选自以下的配体原子或原子团:被取代的或未被取代的烷基、被取代的或未被取代
    的烯基、被取代的或未被取代的炔基、被取代的或未被取代的环烷基、被取代的或未被取代
    的环烯基、被取代的或未被取代的环炔基、被取代的或未被取代的芳基、被取代的或未被取
    代的杂芳基、被取代的或未被取代的杂环基、卤原子、被取代的或未被取代的氨基-NR1R2、被
    取代的或未被取代的-OR3、被取代的或未被取代的-SR4、被取代的或未被取代的-S(O)R5、被
    取代的或未被取代的亚烷基-COOH、-OH、-SH、-NH、或如本文指定的配体L1至L5中的任一种;
    并且
    n是配体部分的数目,其是1、2、3、或4;
    R1和R2各自独立地选自氢、烷基、烯基、烯基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂
    环基、卤化物、-C(O)NR6R7、亚磺?;?、酯、以及羰基;或其中R1和R2与它们被结合至的N原子
    形成环状结构;
    R3、R4、和R5中的每个独立地选自氢、烷基、烯基、烯基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂
    芳基、杂环基、卤化物、亚磺?;?、酯、以及羰基;并且
    R6和R7各自独立地选自氢、烷基、烯基、烯基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂
    环基、卤化物、亚磺?;?、酯、羰基、-OH、-SH以及–NH。
    2.根据权利要求1所述的化合物,其中A选自:辛(羊脂)酸、壬(天竺葵)酸、癸(羊蜡)酸、
    十一烷(十一)酸、十二烷(月桂)酸、十三烷(十三)酸、十四烷(肉豆蔻)酸、十五烷(十五)酸、
    十六烷(棕榈)酸、十七烷(珠光脂)酸、十八烷(硬脂)酸、十九烷(十九)酸、二十烷(花生)酸、
    二十一烷(二十一)酸以及二十二烷(山嵛)酸。
    3.根据权利要求1或2所述的化合物,其中B是C2-C7脂肪酸。
    4.根据权利要求3所述的化合物,其中B选自:丙酸(初油酸)、丁酸(酪酸)、戊酸(缬草
    酸)、己酸(羊油酸)、以及庚酸(毒水芹酸)。
    5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物,其中所述铂原子选自:铂(III)、铂(IV)、
    铂(V)以及铂(VI)。
    6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物,其中至少一个配体L是选自以下的卤化
    物:F、Cl、Br、以及I。
    7.根据权利要求6所述的化合物,其中所述卤化物是Cl。
    8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物,其中至少一个配体L是胺。
    9.根据权利要求6所述的化合物,其中至少一个其他配体L是胺。
    10.根据权利要求7所述的化合物,所述化合物是式(II)的化合物,

    其中L如权利要求1中所定义并且p是配体部分的数目,其为0、1或2。
    11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物,其中n是2、3或4,并且其中至少2个配
    体L是相同的。
    12.根据权利要求11所述的化合物,其中L是卤化物或胺。
    13.根据权利要求12所述的化合物,所述化合物选自式(III)和式(IV)的化合物:

    其中L独立地如权利要求1中所定义并且在式(IV)中的p是0、1或2。
    14.根据权利要求10所述的化合物,其中至少2个配体L是卤化物并且其他L配体是胺。
    15.根据权利要求10所述的化合物,其中至少2个配体L是胺并且其他L配体是卤化物。
    16.根据权利要求10所述的化合物,所述化合物是式(V)或式(VI)的化合物:

    17.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物,其中至少一个配体L选自在本文被指
    定为L1至L5的配体。
    18.根据权利要求17所述的化合物,其中至少一个配体L是L1并且所述化合物具有式
    (VII):

    其中L如权利要求1中所定义并且p是配体部分的数目,其为0、1或2。
    19.根据权利要求18所述的化合物,其中L是-NR1R2,其中R1和R2如在权利要求1中所定
    义。
    20.根据权利要求17所述的化合物,其中至少一个配体L是L4并且所述化合物具有式
    (VIII):

    其中L如权利要求1中所定义并且p是配体部分的数目,其为0、1或2。
    21.根据权利要求17至20中任一项所述的化合物,其中至少一个其他配体L是卤化物或
    胺。
    22.根据权利要求21所述的化合物,其中n是2、3或4,至少一个配体是L1并且至少一个
    其他配体是卤化物或胺。
    23.根据权利要求21所述的化合物,其中n是2、3或4,至少一个配体是L4并且至少一个
    其他配体是卤化物或胺。
    24.根据权利要求21所述的化合物,其中n是3或4,至少一个配体是L1或L4并且所述其
    他配体中的至少2个是相同的并且选自卤化物和胺。
    25.根据权利要求17所述的化合物,其中n是2,一个配体是L1并且另一个配体是L4。
    26.根据权利要求25所述的化合物,所述化合物是式(IX)的化合物:

    27.根据权利要求1所述的化合物,其中至少一个配体L通过选自以下的至少一个杂原
    子被结合至所述铂原子:氮、氧和硫。
    28.根据权利要求27所述的化合物,其中所述铂原子和所述杂原子之间的键中的至少
    一个是共价的并且其他剩余的键是配位键。
    29.根据权利要求1所述的化合物,所述化合物选自:


    其中p独立地是选自0、1和2的配体部分的数目。
    30.根据权利要求1所述的化合物,所述化合物具有式(Va)或式(IXa):

    31.根据权利要求30所述的化合物,其中所述C1-6烷基是甲基。
    32.根据权利要求30所述的化合物,其中所述化合物是乙酸棕榈酸奥沙利铂。
    33.根据权利要求1所述的化合物,所述化合物具有式(Vb)或式(IXb):

    34.根据权利要求1所述的化合物,所述化合物具有式(Vc)或式(IXc):

    35.根据权利要求1所述的化合物,其中所述铂原子与一个或更多个C8-22脂肪酸基团缔
    合,条件是,所述脂肪酸不是C6-C9支链的烷基脂肪酸。
    36.根据权利要求1所述的化合物,其中所述铂原子与一个或更多个C8-22脂肪酸基团缔
    合,所述化合物在辛醇/水混合物中具有约2和9之间的logP值,条件是,所述脂肪酸不是C6-
    C9支链的烷基脂肪酸。
    37.根据权利要求36所述的化合物,其中所述logP值在辛醇/水中是至少2。
    38.根据权利要求36所述的化合物,其中所述logP值在辛醇/水中是至少7。
    39.根据权利要求1-38中任一项所述的化合物,所述化合物呈盐形式。
    40.根据权利要求39所述的化合物,其中所述盐选自:盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝
    酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸
    盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、
    葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸
    盐、对甲苯磺酸盐以及双羟萘酸盐。
    41.根据权利要求40所述的化合物,所述化合物是乙酸盐或琥珀酸盐。
    42.一种化合物,所述化合物包含与一个或更多个C6-20脂肪酸基团缔合的铂原子,条件
    是,所述脂肪酸不是C6-C9支链的烷基脂肪酸。
    43.根据权利要求1至42中任一项所述的化合物,所述化合物是Pt抗癌剂。
    44.一种Pt抗癌剂,所述Pt抗癌剂与一个或更多个C6-20脂肪酸基团缔合,条件是,所述脂
    肪酸不是C6-C9支链的烷基脂肪酸。
    45.一种化合物,所述化合物包含与一个或更多个C6-20脂肪酸基团缔合的铂原子,条件
    是,所述脂肪酸不是C6-C9支链的烷基脂肪酸,所述化合物在辛醇/水混合物中具有约2和约9
    之间的logP值。
    46.根据权利要求45所述的化合物,所述化合物在辛醇/水混合物中具有约2和约9之间
    的logP值。
    47.一种纳米载体,包含根据权利要求1至46中任一项的至少一种化合物。
    48.根据权利要求47所述的纳米载体,所述纳米载体选自:纳米颗粒、纳米胶囊及其混
    合物。
    49.根据权利要求48所述的纳米载体,所述纳米载体是纳米颗粒,所述纳米颗粒包含第
    一基质,其中所述至少一种化合物被嵌入所述基质内。
    50.根据权利要求48所述的纳米载体,所述纳米载体是纳米胶囊,所述纳米胶囊包括第
    一壳,所述第一壳包封所述至少一种化合物。
    51.根据权利要求50所述的纳米载体,其中所述第一壳包封包含所述至少一种化合物
    的组合物。
    52.根据权利要求47至51中任一项所述的纳米载体,所述纳米载体还被包封在第二壳
    层内。
    53.根据权利要求47至52中任一项所述的纳米载体,所述纳米载体还被嵌入第二基质
    内。
    54.一种纳米胶囊或微米胶囊,包含多个根据权利要求47至53中任一项的纳米载体。
    55.一种纳米颗?;蛭⒚卓帕?,包含多个根据权利要求47至53中任一项的纳米载体。
    56.一种组合物,包含根据权利要求1至46中任一项的化合物、根据权利要求47至53中
    任一项的纳米载体、权利要求54的胶囊或权利要求55的颗粒。
    57.根据权利要求56所述的组合物,所述组合物是药物组合物。
    58.根据权利要求57所述的组合物,所述组合物适于口服施用。
    59.根据权利要求57所述的组合物,所述组合物适于静脉内施用。
    60.根据权利要求57所述的组合物,所述组合物呈纳米乳剂形式。
    61.根据权利要求1至46中任一项的化合物、根据权利要求47至53中任一项的纳米载
    体、权利要求54的胶囊或权利要求55的颗粒用于治疗增殖性紊乱或延迟增殖性紊乱的进
    展。
    62.根据权利要求1至46中任一项的化合物、根据权利要求47至53中任一项的纳米载
    体、权利要求54的胶囊或权利要求55的颗粒用于制备用于治疗增殖性紊乱或延迟增殖性紊
    乱的进展的药剂的用途。
    63.一种用于治疗增殖性紊乱的方法,所述方法包括向需要其的受试者施用有效量的
    权利要求1至46中任一项的化合物、权利要求47至53中任一项的纳米载体、权利要求54的胶
    囊或权利要求55的颗粒。
    64.一种延迟增殖性紊乱的进展的方法,所述方法包括向需要其的受试者施用有效量
    的权利要求1至46中任一项的化合物、权利要求47至53中任一项的纳米载体、权利要求54的
    胶囊或权利要求55的颗粒。
    65.根据权利要求63或64所述的方法,其中所述增殖性紊乱是癌症。
    66.根据权利要求65所述的方法,其中所述癌症选自:卵巢癌;以及胰腺癌;鳞状细胞癌
    (例如上皮鳞状细胞癌);肺癌,其包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌以及肺的鳞状
    癌;腹膜癌;肝细胞癌;胃部癌或胃癌,其包括胃肠道癌;胰腺癌;恶性胶质瘤;宫颈癌;卵巢
    癌;肝癌;膀胱癌;肝细胞瘤;乳腺癌;结肠癌;直肠癌;结肠直肠癌;子宫内膜癌或子宫癌;唾
    液腺癌;肾脏癌或肾癌;前列腺癌;外阴癌;甲状腺癌;肝恶性肿瘤;肛门癌;阴茎癌;以及头
    颈癌。
    67.根据权利要求66所述的方法,其中所述癌症选自:肺癌、卵巢癌、胰腺癌以及结肠
    癌。
    68.一种试剂盒,包括根据权利要求56至60中任一项的组合物以及使用说明书。
    69.根据权利要求56至60中任一项所述的组合物,其中所述抗癌药物是乙酸棕榈酸奥
    沙利铂。
    70.根据权利要求56至60中任一项所述的组合物,其中所述抗癌药物是式(Va)或式
    (IXa)的化合物,其中所述C1-6烷基是甲基。
    71.一种组合物,包含根据权利要求1至46中任一项的化合物、根据权利要求47至53中
    任一项的纳米载体、权利要求54的胶囊或权利要求55的颗粒,其中所述化合物是式(Va)或
    式(IXa)的化合物,其中所述C1-6烷基是甲基。
    72.一种组合物,包含根据权利要求1至46中任一项的化合物、根据权利要求47至53中
    任一项的纳米载体、权利要求54的胶囊或权利要求55的颗粒,其中所述化合物是抗癌药物。
    73.一种组合物,包含根据权利要求1至46中任一项的化合物、根据权利要求47至53中
    任一项的纳米载体、权利要求54的胶囊或权利要求55的颗粒,其中所述化合物是乙酸棕榈
    酸奥沙利铂。
    74.乙酸棕榈酸奥沙利铂,用于癌症的治疗。
    75.乙酸棕榈酸奥沙利铂。
    76.乙酸棕榈酸奥沙利铂,用于药剂的制备。
    77.一种式(Va)或式(IXa)的化合物,其中所述C1-6烷基是甲基。
    78.一种式(Va)或式(IXa)的化合物,用于癌症的治疗,其中所述C1-6烷基是甲基。

    说明书

    Pt(IV)衍生物以及包含其的纳米载体

    技术领域

    本发明涉及用于癌症疗法中的改进的药物性能并且展示较低毒性的Pt(IV)亲脂
    性衍生物,以及包含其的纳米载体。

    背景技术

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    [15]Stathopoulos G P,Boulikas T,Kourvetaris A和Stathopoulos J.,
    Anticancer Res 2006,26,1489–93

    [16]Yang C,Liu H Z,Lu W D和Fu Z X.,Oncol Rep 2011,25,1621–8。

    背景

    癌症是主要的公共健康问题,其被认为是在美国第二主要死亡原因,仅仅被心脏
    疾病超过,并且在世界上占四分之一死亡的比例。卵巢癌排在癌症的最常见死亡原因的等
    级;主要在发达国家的妇科恶性肿瘤中[1]。2014年,在美国,约21,980名妇女将被诊断具有
    卵巢癌并且约14,270名将死于此疾病。最近诊断具有卵巢癌的大部分妇女具有转移性疾
    病,转移性疾病具有仅15%至20%的治愈率。此现象主要归因于缺少特定的症状直到疾病
    已经扩散到卵巢以外,此时治愈的机会显著地降低[2]。

    批准的基于铂(II)的抗癌剂顺铂、卡铂以及奥沙利铂在临床实践中常规地被用于
    包括卵巢癌的多种实体瘤的治疗。据估计,多达50%-70%的癌症患者用铂药物来治疗[3]。
    第三代铂药物奥沙利铂是顺铂的1,2-二氨基环己烷(DACH)衍生物,其相比于母体化合物呈
    现若干独特的性质。其能够引起体积大的DNA链间和链内加合和构象扭曲,这防止错配修复
    蛋白络合物的结合并且导致凋亡[4]。奥沙利铂作为I期和II期试验中的单剂疗法在铂敏感
    性和铂耐药性卵巢癌方面已经展示活性[5-7]。然而,基于铂的化学疗法的治疗结果可以通
    过固有的耐药性或获得性耐药性被损害[8],这是铂抗癌化学疗法的主要限制中的一个,并
    且这是多因素事件的结果。直到现在,若干涉及的机制已经被确定。在那些机制中,减少的
    药物累积是在铂耐药性细胞系中最频繁地观察到的现象,这可能是由于增加的流出、减少
    的流入或两者[9-10]。

    为了克服药物缺点并且增强在敏感性和耐药性细胞系中的细胞毒性,大量努力被
    投入在用于铂(II)络合物的新颖的靶向载体的设计中。一些研究组已经将分子标签添加至
    铂(II)中心,目的是为了增强靶向能力或降低反应性,而其他研究组已经集中在包含铂
    (IV)中心的分子。

    铂(IV)络合物具有超过铂(II)的许多优点,包括较低的毒性概况、增加的动力学
    惰性以及降低的活性。它们是前药的典型的例子,据此充分地稳定的且惰性的络合物可以
    围绕身体被运输,直到它到达期望的靶标,在该期望的靶标处,它可以被转化成其活性细胞
    毒性的形式,在此情况下,其活性细胞毒性的形式是铂(II)。增加铂药物的亲脂性作为克服
    其毒性和细胞耐药性的有前景的策略已经出现。亲脂性药物通过被动扩散进入细胞内,并
    且可以从而省略活性转运体;此外,此类药物可以口服地而不是静脉内地被施用并且示出
    高的载体容量。这些性质允许药物生物利用度的改进、克服耐药性、以及药物施用的频率的
    减少。

    最近,纳米颗粒治疗剂已经示出超过传统的小分子剂的若干优点;这些优点包括
    高的剂负载、可调的尺寸、定制的表面性质、可控的药物释放动力学、以及改进的药代动力
    学。纳米级别药物递送媒介物作为用于生物活性化合物的载体已经广泛地被研究并且用于
    癌症化学治疗的若干纳米载体已经在临床中[11]。纳米颗?;骨阆蛴谠谥琢瞿诰哂性黾拥?br />累积,这是作为由有漏洞的肿瘤新生血管(leaky tumor neovasculature)造成的增强的可
    渗透性和滞留(enhanced permeability and retention)(EPR)效应的结果。另外,纳米颗
    ??梢酝ü鲜实呐涮宓谋砻骈詈?surface conjugation)特定地靶向癌症细胞,以进一
    步增强纳米颗粒在肿瘤内的累积。然而,在纳米颗粒内的铂药物的制剂起因于其物理化学
    性质,一直是挑战[13]。例如,发现尽管顺铂的脂质体制剂递送较高水平的铂至肿瘤,然而,
    其未能呈现推测起来来自需要高浓度的脂质的次最优的载体设计的临床优点。有趣地,仅
    存在用于癌症化学疗法的奥沙利铂的纳米颗粒的一些报告。用脂质体奥沙利铂的最近临床
    前和I期研究已经被报告并且当前II期试验被进行,并且这些研究的效力结果可以阐明并
    且揭示该制剂超过游离的奥沙利铂的优点[15-16]。

    一般描述

    以改进癌症疗法中的药物性能为目的,本文公开的本发明的发明人已经开发出新
    颖的铂(Pt)衍生物。本发明还提供胶体药物递送体系,所述胶体药物递送体系提供较高的
    治疗效果、较低的毒性以及?;っ庥谔迥诖?。

    因此,在本发明的方面中的一个中,本发明提供式(I)的化合物


    其中

    Pt是铂原子;

    A是C8-C22脂肪酸,所述C8-C22脂肪酸通过脂肪酸的氧原子与Pt原子缔合;

    B是C2-C22脂肪酸,所述C2-C22脂肪酸通过脂肪酸的氧原子与Pt原子缔合;

    条件是,A和B中的每个都不是C6-C9支链烷基脂肪酸;

    L是选自以下的配体原子或原子团:被取代的或未被取代的烷基、被取代的或未被
    取代的烯基、被取代的或未被取代的炔基、被取代的或未被取代的环烷基、被取代的或未被
    取代的环烯基、被取代的或未被取代的环炔基、被取代的或未被取代的芳基、被取代的或未
    被取代的杂芳基、被取代的或未被取代的杂环基、卤原子(F、I、Br、Cl)、被取代的或未被取
    代的氨基-NR1R2、被取代的或未被取代的-OR3、被取代的或未被取代的-SR4、被取代的或未
    被取代的-S(O)R5、被取代的或未被取代的亚烷基-COOH、-OH、-SH、-NH、或如本文指定的配
    体L1至L5中的任一种;并且

    n是配体部分的数目,其是1、2、3、或4;

    R1和R2各自独立地选自氢、烷基、烯基、烯基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳
    基、杂环基、卤化物、-C(O)NR6R7、亚磺?;?、酯、以及羰基;或其中R1和R2与它们被结合至的N
    原子形成环状结构;

    R3、R4、和R5中的每个独立地选自氢、烷基、烯基、烯基、环烷基、环烯基、环炔基、芳
    基、杂芳基、杂环基、卤化物、亚磺?;?、酯、以及羰基;并且

    R6和R7各自独立地选自氢、烷基、烯基、烯基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳
    基、杂环基、卤化物、亚磺?;?、酯、羰基、-OH、-SH以及–NH。

    如本文所用,术语“脂肪酸”意在涵盖是饱和或不饱和的、具有脂肪族尾部(链)、支
    链烷基或支链芳香族烷基的羧酸,所述脂族尾部(链)、支链烷基或支链芳香族烷基具有约1
    个和22个之间的碳原子的环或杂环部分。在脂肪酸中的碳原子数例如通过缩写形式C8-22被
    指示的情况下,应当理解,除非另外指示,否则脂肪酸的羰基(C=O)原子也被计数。

    应当注意,在本发明的上下文内,脂肪酸基团可以不是C6-C9支链的烷基脂肪酸?;?br />句话说,在式(I)的化合物中,A和B两者均不可以是C6-C9支链的烷基脂肪酸。

    本发明的化合物可以包括2个长的脂肪酸,即脂肪酸A和脂肪酸B两者均可以各自
    选自C8-22脂肪酸,所述2个长的脂肪酸可以是相同的或不同的(排除其中A和B两者各自均是
    C6-C9支链的烷基脂肪酸的情况)??裳≡竦?,本发明的化合物可以包括为A或B的、选自C8-22
    脂肪酸的至少一个长的脂肪酸,以及为A和B中的另一个的、选自C2-7脂肪酸的至少一个短的
    脂肪酸。例如,在某些实施方案中,A可以是长的脂肪酸例如C8脂肪酸,并且B可以是相同的
    脂肪酸、不同的长的脂肪酸、或短的脂肪酸例如C3脂肪酸。

    如本领域技术人员将理解,具有2个和7个之间的碳原子的脂肪酸(例如C2-7脂肪
    酸),当通过其氧原子结合至在本发明的化合物中的中心Pt原子时,具有通式
    其中羰基的碳原子和烷基的C1-C6原子组合地给出C2-7脂肪酸。
    因此,最短的脂肪酸是两个碳的脂肪酸。在上文描述的脂肪酸结构中最长的脂肪酸为七个
    碳的脂肪酸。

    选择特定的脂肪酸或脂肪酸的组合以取代本发明的Pt化合物尤其取决于期望的
    亲脂性(化合物在油性物质和非极性溶剂中溶解的能力)。因此,该选择允许亲脂性的定制
    并且从而控制其通过细胞膜的可渗透性。

    在某些实施方案中,A选自:辛(羊脂)酸、壬(天竺葵)酸、癸(羊蜡)酸、十一烷
    (undecanoic)(十一(undecylic))酸、十二烷(月桂)酸、十三烷(tridecanoic)(十三
    (tridecylic))酸、十四烷(肉豆蔻)酸、十五烷(pentadecanoic)(十五(pentadecylic))酸、
    十六烷(棕榈)酸、十七烷(珠光脂)酸、十八烷(硬脂)酸、十九烷(nonadecanoic)(十九
    (nonadecylic))酸、二十烷(花生)酸、二十一烷(heneicosanoic)(二十一(heneicosylic))
    酸以及二十二烷(山嵛)酸。

    在其他实施方案中,B是C2-C7脂肪酸。在某些实施方案中,B选自:丙酸(初油酸)、丁
    酸(酪酸)、戊酸(缬草酸)、己酸(羊油酸)、以及庚酸(毒水芹酸)。

    本发明的化合物可以被定义为“铂(Pt)络合物”,其中铂原子可以与多个配体缔合
    并且可以采取不同的化合价的值。在某些实施方案中,铂原子是铂(III)、铂(IV)、铂(V)、或
    铂(VI)。

    每个配体原子或基团(原子团,例如共价连接的)L可以通过任何化学的或物理的
    结合(连接),例如保持Pt原子和至少一个配体原子在一起的共价键、离子键、范德华力或配
    位键,与Pt原子缔合。典型地,铂原子通过配位键与配体缔合。与Pt原子缔合的配体L的数目
    n(在形式“L(n)”中,整数n表示与Pt原子缔合的1个、2个、3个、或4个配体L)也可以被定制,
    以便修改化合物的一个或更多个参数。在某些实施方案中,n是1。在某些实施方案中,n是2。
    在某些实施方案中,n是3。在某些实施方案中,n是4。

    配体L可以是单齿配体,即通过Pt原子和配体L的单个原子之间的单键缔合。配体L
    也可以是多齿配体,其具有在络合物中可以与Pt原子直接缔合(或连接、配位)的多于一个
    原子。在某些实施方案中,化合物具有至少一个单齿配体。在某些实施方案中,化合物具有
    至少一个多齿配体。在某些实施方案中,至少一个多齿配体是双齿配体。在某些实施方案
    中,至少一个多齿配体是三齿配体。在某些实施方案中,至少一个多齿配体是四齿配体。

    当本发明的化合物是Pt络合物时,它们可以呈现任何结构异构化、立体异构化或
    光学异构化。在某些实施方案中,化合物是顺式异构体。在某些实施方案中,化合物是反式
    异构体。在某些实施方案中,化合物是经式异构体(mer-isomer)。在某些实施方案中,化合
    物是面式异构体(fac-isomer)。

    在某些实施方案中,至少一个配体L是选自以下的卤化物:F、Cl、Br、以及I。在这样
    的实施方案中,卤化物可以是Cl。在某些其他实施方案中,至少一个其他配体是胺。

    在某些实施方案中,化合物具有式(II),


    其中L如上文所定义并且p是配体部分的数目,其为0、1或2。

    术语“L(p)”表示用于另外的L配体至Pt原子的可用的附接点的数目。在某些实施
    方案中,p是0。在某些实施方案中,p是1。在某些实施方案中,p是2。

    在其他实施方案中,至少一个配体L是胺,其可以选自:氨、伯胺、仲胺、非平面杂环
    脂肪族胺或杂环芳香族胺。

    根据某些实施方案,伯胺选自:甲胺、乙胺、正丙胺、异丙胺、正丁胺、正己胺、正庚
    胺以及正壬胺。

    根据其他实施方案,仲胺选自:二甲胺、二乙胺、二丙胺以及二丁胺。

    根据某些其他实施方案,非平面杂环脂肪族胺选自:哌嗪、2-甲基哌嗪、哌啶、2-羟
    基哌啶、3-羟基哌啶或4-羟基哌啶、4-哌啶基-哌啶、吡咯烷、4-(2-羟基乙基)哌嗪以及3-氨
    基吡咯烷。

    根据另外的实施方案,杂环芳香族胺选自:吡啶、2-氨基吡啶、3-氨基吡啶或4-氨
    基吡啶、2-皮考啉、3-皮考啉或4-皮考啉、喹啉、3-氨基喹啉或4-氨基喹啉、噻唑、咪唑、3-吡
    咯啉、吡嗪、2-甲基吡嗪、4-氨基喹哪啶以及哒嗪。

    在另外的实施方案中,n是2、3或4,并且其中至少2个配体L是相同的。在某些实施
    方案中,L是卤化物或胺。

    在某些这样的实施方案中,化合物可以选自式(III)和式(IV)的化合物:


    其中L如上文所定义并且p是配体部分的数目,其为0、1或2。

    在其他实施方案中,至少2个配体L是卤化物并且其他配体L是胺。在另外的实施方
    案中,至少2个配体L是胺并且剩余配体是卤化物。

    根据某些实施方案,化合物可以具有式(V)或式(VI):


    如上文已经注明,本发明的化合物包含脂肪酸部分A、脂肪酸部分B(A和B可以是相
    同的或不同的),并且可以还包含至少一个配体L。在某些实施方案中,至少一个配体L选自
    本文中被指定为L1至L5的配体。

    L1是配体:


    其中i是0和5之间的整数;其中配体通过氧原子与Pt缔合。

    L2是配体:


    其中j是0和2之间的整数,m是0和6之间的整数,并且Ra选自氢、被取代的或未被取
    代的烷基、被取代的或未被取代的环烷基、被取代的或未被取代的环烯基、被取代的或未被
    取代的环炔基、被取代的或未被取代的杂环基、被取代的或未被取代的芳基、被取代的或未
    被取代的杂芳基、被取代的或未被取代的杂环基、被取代的或未被取代的烯基、被取代的或
    未被取代的炔基、卤素、被取代的或未被取代的-NR1R2、被取代的或未被取代的-OR3、被取代
    的或未被取代的-SR4、被取代的或未被取代的-S(O)R5、被取代的或未被取代的亚烷基-
    COOH、被取代的或未被取代的酯、OH、-SH、以及-NH、苯基、羟基;其中配体通过氧原子与Pt缔
    合。R1、R2、R3、R4以及R5如上文所定义。

    L3是配体:


    其中k是0和2之间的整数,m是0和6之间的整数,并且Rb选自氢、被取代的或未被取
    代的烷基、被取代的或未被取代的环烷基、被取代的或未被取代的环烯基、被取代的或未被
    取代的环炔基、被取代的或未被取代的杂环基、被取代的或未被取代的芳基、被取代的或未
    被取代的杂芳基、被取代的或未被取代的杂环基、被取代的或未被取代的烯基、被取代的或
    未被取代的炔基、卤素、被取代的或未被取代的-NR1R2、被取代的或未被取代的-OR3、被取代
    的或未被取代的-SR4、被取代的或未被取代的-S(O)R5、被取代的或未被取代的亚烷基-
    COOH、被取代的或未被取代的酯、OH、-SH、以及-NH、苯基、羟基;其中配体通过胺部分与Pt缔
    合。R1、R2、R3、R4以及R5如上文所定义。

    L4是配体:


    其中配体通过胺部分与Pt缔合。

    L5是配体:


    其中配体通过胺部分与Pt缔合。

    在某些实施方案中,在根据式(I)的化合物中,L是L1或L2或L3或L4或L5或其任何
    组合。

    在其中n大于1的某些实施方案中,每个L独立地选自L1至L5。

    在某些实施方案中,在其中n大于1的式(I)的化合物中,两个配体是相同的并且其
    余的配体独立地是L1或L2或L3或L4或L5。

    在某些实施方案中,至少一个配体L是L1并且化合物具有式(VII):


    其中L如上文所定义并且p是配体部分的数目,其为0、1或2。

    在式(VII)的化合物的实施方案中,L可以是-NR1R2,其中R1和R2如本文所定义。

    在其他实施方案中,至少一个配体L是L4并且化合物具有式(VIII):


    其中L如上文所定义并且p是配体部分的数目,其为0、1或2。

    在某些实施方案中,n是2,一个配体是L1并且另一个配体是L4。在这样的实施方案
    中,本发明的化合物可以是式(IX)的化合物:


    在其中至少一个配体是L1或L2的其他实施方案中,至少一个其他配体L是卤化物
    或胺。

    根据某些实施方案,n是2、3或4,至少一个配体是L1并且至少一个其他配体是卤化
    物或胺。

    根据其他实施方案,n是2、3或4,至少一个配体是L4并且至少一个其他配体是卤化
    物或胺。

    根据另外的实施方案,n是3或4,至少一个配体是L1或L4并且其他配体中的至少2
    个是相同的并且选自卤化物和胺。

    在某些实施方案中,至少一个配体L通过选自以下的至少一个杂原子被结合至铂
    原子:氮、氧和硫。在这样的实施方案中,铂原子和杂原子之间的键中的一些可以是共价的
    并且键中的一些可以是配位键。

    根据某些实施方案,本发明的化合物可以选自:





    其中在有关时,L如上文所定义并且p是配体部分的数目,其为0、1或2。

    在其他实施方案中,化合物具有在下文被示出的式(Va)或式(IXa),其中C1-6烷基
    选自:–C1烷基、–C2烷基、–C3烷基以及–C4烷基。在某些实施方案中,化合物具有式(Va)或式
    (IXa),其中C1-6烷基是甲基。


    在其他实施方案中,化合物具有式(Vb)或式(IXb):


    在某些其他实施方案中,化合物具有式(Vc)或式(IXc):


    在某些实施方案中,本发明的化合物是式(Va)或式(IXa),其中C1-6烷基是甲基。

    在某些实施方案中,化合物是乙酸棕榈酸奥沙利铂,其在本文被称为OXA-PAL-ACT
    (OPA),是在图1A中被指定为化合物B的化合物。

    因此,本发明提供式(I)的化合物OXA-PAL-ACT(OPA)、包含其的组合物、其用途以
    及其包封形式或颗粒形式。

    在本发明的另一方面中,提供式(I)的化合物,其包含与一个或更多个C8-22脂肪酸
    基团缔合的铂原子,条件是,所述脂肪酸不是C6-C9支链的烷基脂肪酸。

    在又一方面中,本发明提供与一个或更多个C8-22脂肪酸基团缔合的Pt抗癌剂,条
    件是,所述脂肪酸不是C6-C9支链的烷基脂肪酸。

    在另一方面中,提供包含与一个或更多个C8-22脂肪酸基团缔合的铂原子的化合
    物,该化合物在辛醇/水混合物中具有约2和9之间的logP值,条件是,所述脂肪酸不是C6-C9
    支链的烷基脂肪酸。

    在本发明的另一方面中,提供在辛醇/水的双溶剂体系中具有至少2的logP值的如
    所定义的式(I)的化合物。

    在某些实施方案中,本发明的化合物在辛醇/水溶剂体系中具有至少7的logP值。
    在其他实施方案中,本发明的化合物在辛醇/水中具有约2和约9之间的logP值。

    在其他实施方案中,本发明的化合物在辛醇/水中具有约2和4之间的logP值。

    值得注意的是,logP值是在化合物以游离的药物形式或并入到载体内而被注射到
    血流中之后穿过细胞膜的化合物可渗透性的量度。

    如本文所使用,“烷基”、“烯基”和“炔基”碳链,如果未被具体指定,则包含从1个至
    20个碳、或从2个至16个碳,并且是直链的或支链的。在某些实施方案中,碳链包含1个至10
    个碳原子。在其他实施方案中,碳链包含1个至6个碳原子。在某些其他实施方案中,碳链包
    含2个至6个碳原子。从2个至20个碳的烯基碳链,其在某些实施方案中包含1个至8个双键;2
    个至16个碳的烯基碳链,在某些实施方案中,包含1个至5个双键。从2个至20个碳的炔基碳
    链,在某些实施方案中包含1个至8个三键,并且在又某些其他实施方案中,可以包含1个至5
    个三键。

    本文示例性烷基、烯基和炔基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基、正
    丁基、仲丁基、叔丁基、异己基、烯丙基(丙烯基)和炔丙基(丙炔基)。

    如本文所使用,“环烷基”指的是饱和的单环或多环环体系,在某些实施方案中具
    有3个至10个碳原子,在其他实施方案中具有3个至6个碳原子;环烯基和环炔基指的是分别
    地包含至少一个双键和至少一个三键的单环或多环环体系?;废┗突啡不谀承┦凳┓?br />案中可以包含3个至10个碳原子。在其他实施方案中,环烯基包含4个至7个碳原子,并且环
    炔基在又另外的实施方案中,包含8个至10个碳原子?;吠榛?、环烯基和环炔基的环体系可
    以包含可以以稠合的、桥接的或螺连接的方式被连接在一起的一个环或两个或更多个环。

    如本所使用,“芳基”指的是包含从6个至10个碳原子的芳香族的单环或多环基团。
    芳基包括但不限于,诸如未被取代的或被取代的芴基、未被取代的或被取代的苯基、以及未
    被取代的或被取代的萘基的基团。

    如本文所使用,“杂芳基”指的是单环或多环芳香族环体系,在某些实施方案中具
    有约5个至约15个成员,其中环体系中的原子中的一个或更多个(在一个实施方案中为1个
    至3个)是杂原子,即不同于碳的元素,包括但不限于氮、氧或硫。杂芳基可以任选地被稠合
    至苯环。杂芳基包括但不限于呋喃基、咪唑基、嘧啶基、四唑基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、噻
    唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三唑基、喹啉基以及异喹啉基。

    如本文所使用,“杂环基”指的是在一个实施方案中3元至10元,在另一个实施方案
    中4元至7元,在另外的实施方案中5元至6元的饱和的单环或多环环体系,其中环体系中的
    原子中的一个或更多个(在某些实施方案中1个至3个)是杂原子,即除了碳之外的元素,包
    括但不限于氮、氧或硫。在其中杂原子是氮的实施方案中,氮任选地被烷基、烯基、炔基、芳
    基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基、杂环基烷基、?;?、胍取代,或
    氮可以被季铵化以形成其中取代基如上文被选择的铵基。

    术语“被取代的”指的是在如上文所定义的配体的至少一个原子上的取代。在某些
    实施方案中,取代基选自:烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂环基、
    卤素、–NR1R2、-OR3、–SR4、–S(O)R5、亚烷基-COOH、酯、-OH、-SH以及-NH。在某些实施方案中,
    (在某个配体上)取代基的数目是1个或2个或3个或4个或5个或6个或7个或8个或9个或10个
    取代基。

    根据某些实施方案,本发明的化合物呈盐形式,典型地呈药学上可接受的盐形式。
    术语“盐形式”表示包含本发明的化合物(即带电荷的络合物)和至少一种反离子的游离碱
    或游离酸形式?!耙┭峡山邮艿难巍敝傅氖嵌杂谠诓溉槎?例如人类)中的药物用途是安
    全的且有效的并且具有期望的生物活性的盐。

    在某些实施方案中,盐选自:盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢
    盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸
    盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛
    酸盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐
    以及双羟萘酸盐。本发明的化合物中合适的其他阴离子例如在Berge等人,"
    Pharmaceutical Salts,"J.of Pharmaceutical Science,66:1-19(1977)中被描述。

    在本发明的方面中的另一个中,本发明提供包含如本文所描述的至少一种化合物
    的纳米载体。在某些实施方案中,纳米载体可以选自:纳米颗粒、纳米胶囊或其混合物。

    如本文所使用,本发明的“纳米载体”是颗粒物质,其是生物相容的并且对化学的
    和/或物理的破坏是足够抗性的,使得足够量的纳米载体在施用到人类或动物身体内之后
    大体上保持完整并持续足以能够到达期望的靶组织(器官)的时间。通常,纳米载体在形状
    上是球形的,具有多达700nm的平均直径。当纳米载体的形状不是球形的时候,直径指的是
    纳米载体的最长尺寸。

    取决于与本发明的化合物有关的多种参数(例如溶解度、分子量、极性、电荷、反应
    性、化学稳定性、生物活性及其他),化合物可以被包含(包封)在纳米胶囊(NC)内和/或被嵌
    入组成纳米颗粒(NP)的基质(matrix making-up nanoparticle)内。对于所选择的应用,纳
    米载体因此可以呈芯/壳(在下文中还被称为纳米胶囊)的形式,具有聚合物壳和包含至少
    一种本发明的化合物的芯。

    可选择地,纳米颗??梢跃哂写筇迳暇鹊淖槌?,不具有明显的芯/壳结构特征。
    这些纳米载体在本文被称为纳米颗粒(NP)。

    在某些实施方案中,纳米载体的平均直径在约100nm和200nm之间。在其他实施方
    案中,平均直径在约200nm和300nm之间。在另外的实施方案中,平均直径在约300nm和400nm
    之间,平均直径在400nm和500nm之间。在另外的实施方案中,平均直径在约600nm和700nm之
    间。

    在某些其他实施方案中,纳米载体的平均直径在约50nm和700nm之间。在其他实施
    方案中,平均直径在约50nm和500nm之间。在其他实施方案中,平均直径在约50nm和400nm之
    间。在另外的实施方案中,平均直径在约50nm和300nm之间。在另外的实施方案中,平均直径
    在约50nm和200nm之间。在另外的实施方案中,平均直径在约50nm和100nm之间。

    纳米载体可以各自大体上具有相同的形状和/或尺寸。在某些实施方案中,纳米载
    体具有直径的分布,使得不多于0.01百分数至10百分数的颗粒具有比上文提及的平均直径
    高或低大于10百分数的直径,并且在某些实施方案中,使得不多于0.1百分数、0.2百分数、
    0.4百分数、0.6百分数、0.8百分数、1百分数、2百分数、3百分数、4百分数、5百分数、6百分
    数、7百分数、8百分数、或9百分数的纳米载体具有比上文提及的平均直径高或低大于10百
    分数的直径。

    用于形成纳米载体、纳米胶囊和/或纳米颗粒的示例性合适的材料是聚酯,包括聚
    乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚羟基丁酸酯和聚己内酯、聚(原酸酯)、聚酸酐、聚氨基酸、聚
    (氰基丙烯酸烷基酯)、聚磷腈、(PLA/PGA)和天冬氨酸酯的共聚物或聚环氧乙烷(PEO)。

    在某些实施方案中,纳米载体是纳米颗粒,所述纳米颗粒包括第一基质,其中所述
    至少一种本发明的化合物被嵌入所述基质内。

    在其他实施方案中,纳米载体是纳米胶囊,所述纳米胶囊包括包封所述至少一种
    本发明的化合物或包含至少一种本发明的化合物的组合物的第一壳。

    纳米载体中的每个可以被另一个包封层进一步封装,从而形成双层?;?。因此,在
    某些实施方案中,纳米载体还被包封在第二壳层内,所述第二壳层可以包含与第一壳层的
    材料相同的或不同的材料。在其他实施方案中,纳米载体还被嵌入第二基质内,第一和第二
    基质可以包含相同的或不同的材料。

    为了增加到达靶器官的活性化合物的量,有时期望的是,提供包含多个被包装在
    单个外壳内的纳米载体的产品。因此,在另一方面中,提供包含多个本发明的纳米载体的纳
    米胶囊或微米胶囊。

    另一个方面提供包含多个本发明的纳米载体的纳米颗?;蛭⒚卓帕?。此类纳米颗
    ?;蛭⒚卓帕5北怀ξ竿獾厥┯檬笨梢愿秤璩ばЪ列?long-acting dosage form),或可
    以被用作用于本发明的化合物的口服、吸入或肺部递送的粉剂。

    在某些实施方案中,包含多个本发明的纳米载体的纳米颗?;蛭⒚卓帕?梢杂墒?br />水性聚合物形成。

    在这样的实施方案中,多个纳米载体可以(i)通过疏水性交联蛋白例如人血清白
    蛋白(HSA)被包封(即形成双纳米包封)或(ii)被嵌入基质例如由疏水性聚合物掺合物形成
    的基质内。此类疏水性聚合物掺合物可以是Eudragit:HPMC掺合物,其中Eudragit具有pH依
    赖性溶解度,而HPMC是水溶性的,不管pH怎样。

    在本发明的方面中的另一个中,本发明提供包含如本文描述的化合物、纳米载体、
    纳米胶囊或微米胶囊、或纳米颗?;蛭⒚卓帕5淖楹衔?。典型地,组合物是药物组合物。

    如本文所使用,“药物组合物”包含治疗有效量的本发明的化合物连同合适的稀释
    剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂和/或载体。此类组合物是液体或冻干的或以其他方式干
    燥的制剂并且包括具有多种缓冲剂内容物(例如,Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)、pH和离子强
    度的稀释剂、添加剂例如防止吸附至表面的白蛋白或明胶、洗涤剂(例如Tween 20(吐温
    20)、Tween 80(吐温80)、Pluronic F68、胆汁酸盐)、增溶剂(例如甘油、聚乙二醇)、抗氧化
    剂(例如抗坏血酸、焦亚硫酸钠)、防腐剂(例如硫柳汞、苄醇、对羟基苯甲酸酯类)、膨胀物质
    (bulking substance)或张力改性剂(例如乳糖、甘露醇)、聚合物例如聚乙二醇至蛋白质的
    共价附接、与金属离子的络合、或材料至聚合物化合物例如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝胶等等
    的颗粒制剂中或至该颗粒制剂上的并入、或材料至带负电荷或带正电荷的脂质体、微乳剂、
    胶束、单层或多层囊泡、红细胞血影、或原生质球或纳米乳剂上的并入。此类组合物将影响
    物理状态、溶解度、稳定性、体内释放速率、以及体内清除速率??厥突蚧菏妥楹衔锇ㄔ谇?br />脂性储库(lipophilic depot)(例如脂肪酸、蜡、油)中的制剂。

    适于口服施用的制剂可以由以下组成:(a)液体溶液,例如溶解在稀释剂例如水、
    盐水、或橙汁中的有效量的化合物;(b)胶囊、小袋、片剂、锭剂、以及糖锭,每个包含预定量
    的作为固体或粒剂的活性成分;(c)粉剂;(d)在适合的液体中的悬浮液;以及(e)合适的乳
    液或自乳化制剂。液体制剂可以包括稀释剂,例如水和醇,例如乙醇、苄醇、以及聚乙烯醇,
    添加或不添加药学上可接受的表面活性剂、悬浮剂或乳化剂。胶囊形式可以是普通的硬壳
    或软壳的明胶类型,包含例如,表面活性剂、润滑剂以及惰性填充剂。片剂形式可以包括以
    下中的一种或更多种:乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸、微晶纤维素、阿
    拉伯胶、明胶、瓜尔胶、胶体二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬
    脂酸锌、硬脂酸,以及其他赋形剂、着色剂、稀释剂、缓冲剂、崩解剂、润湿剂、防腐剂、调味
    剂、以及药理学上相容的载体。锭剂形式可以包括调味料通常地蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶
    中的活性成分,以及包含惰性基质(例如明胶和甘油,或蔗糖和阿拉伯胶、乳剂、凝胶)中的
    活性成分的软锭剂,以及除了活性成分之外还包含如本领域已知的此类载体的类似物。

    适于肠胃外施用的制剂包括无菌的纳米乳剂、可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌
    剂、和致使制剂与所意图的接受者的血液等渗的溶质的含水和非含水的等渗无菌注射溶
    液、以及包含悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、和防腐剂的含水和非含水的无菌悬浮液?;?br />合物可以以药物载体中的生理学上可接受的稀释剂例如无菌的液体或液体的混合物被施
    用,所述无菌液体包括:水、盐水、含水右旋糖和有关的糖溶液,诸如乙醇、异丙醇、或十六醇
    的醇,诸如丙二醇或聚乙二醇的二醇类,诸如2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇的甘油缩
    酮类(glycerol ketals),诸如聚(乙二醇)400的醚类,油,脂肪酸,脂肪酸酯或甘油酯,或乙
    ?;闹舅岣视王?,添加或不添加药学上可接受的表面活性剂例如皂或洗涤剂、悬浮剂、
    例如果胶、卡波姆(carbomer)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、或羧甲基纤维素、或乳化剂
    以及其他药物佐剂。

    可以在肠胃外制剂中被使用的油包括石油、动物油、植物油、或合成油。油的特定
    的实例包括花生油、豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄榄油、矿脂、以及矿物油。用于肠胃外
    制剂的合适的脂肪酸包括油酸、硬脂酸、以及异硬脂酸。

    本发明的化合物可以被制成可注射制剂。对用于可注射组合物的有效药物载体的
    要求是本领域普通技术人员熟知的。见Pharmaceutics and Pharmacy Practice,
    J.B.Lippincott Co.,Philadelphia,Pa.,Banker和Chalmers,编辑,第238-250页(1982),
    以及ASHP Handbook on Injectable Drugs,Toissel,第4版,第622-630页(1986)。

    另外,本发明的化合物通过与多种基质例如乳化基质或水溶性基质混合,可以被
    制成栓剂。适于阴道施用的制剂可以作为除了活性成分之外还包含如本领域已知的合适的
    此类载体的阴道栓、止血栓、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂被呈递。

    在某些实施方案中,组合物适于口服施用。

    在其他实施方案中,组合物适于静脉内施用。

    在某些其他实施方案中,组合物呈纳米乳剂形式。乳剂可以包括但不限于形式O/
    W、W/O、W/O/W、O/W/O、W/O1/O2、W/O2/O1、O1/W/O2、O1/O2/W、O2/O1/W、O2/W/O1以及这些形式与连
    续相或双连续相的组合。

    本发明的另一方面提供用于治疗增殖性紊乱或延迟增殖性紊乱的进展的如本文
    描述的化合物、纳米载体、纳米胶囊或微米胶囊、或纳米颗?;蛭⒚卓帕?。

    在又另一方面中,提供如本文描述的化合物、纳米载体、纳米胶囊或微米胶囊、或
    纳米颗?;蛭⒚卓帕S糜谥票赣糜谥瘟圃鲋承晕陕一蜓映僭鲋承晕陕业慕沟囊┘恋挠?br />途。

    本发明的另外的方面提供用于治疗增殖性紊乱或延迟或预防增殖性紊乱的进展
    的方法,该方法包括向需要其的受试者施用有效量的如本文描述的化合物、纳米载体、纳米
    胶囊或微米胶囊、或纳米颗?;蛭⒚卓帕?。

    术语“增殖性紊乱”涵盖影响细胞生长、分化或增殖过程的疾病或紊乱。在某些实
    施方案中,增殖紊乱是癌症。如本文所使用,术语“癌症”涵盖特征是引起恶性生长或肿瘤的
    异常的且不受控制的细胞分裂的任何赘生性疾病。如本文所使用,癌症可以指的是实体肿
    瘤或肿瘤转移。

    癌症的非限制性实例是卵巢癌;以及胰腺癌;鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌);
    肺癌,其包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌以及肺的鳞状癌;腹膜癌;肝细胞癌;胃
    部(gastric)癌或胃(stomach)癌,其包括胃肠道癌;胰腺癌;恶性胶质瘤;宫颈癌;卵巢癌;
    肝癌;膀胱癌;肝细胞瘤;乳腺癌;结肠癌;直肠癌;结肠直肠癌;子宫内膜癌或子宫癌;唾液
    腺癌;肾脏癌或肾癌;前列腺癌;外阴癌;甲状腺癌;肝恶性肿瘤;肛门癌;阴茎癌;以及头颈
    癌。实体癌症以许多形式出现,例如乳腺癌、前列腺癌、肉瘤、以及皮肤癌。皮肤癌的一种形
    式是黑素瘤。

    在某些实施方案中,癌症选自:肺癌、结肠癌、胰腺癌以及卵巢癌。

    如本文所用,术语“治疗”指的是施用治疗量的、对减轻与疾病相关的不期望的症
    状有效的本发明的组合物,以在此类症状发生之前预防它们的表现,以减缓疾病的进展(本
    文还被称为“延迟进展”)、减缓症状的恶化,以增强缓解期的开始、减缓在疾病的进展慢性
    阶段引起的不可逆的损害,以延迟所述进展阶段的开始,以减轻严重程度或治愈疾病,以改
    进存活率或更迅速的恢复,或以防止疾病发作或以上两种或更多种的组合。

    如本文所使用,术语“有效量”通过如可以是本领域已知的此类考量来确定。量必
    须对实现如上文描述的期望的治疗效果是有效的,其尤其取决于将被治疗的疾病的类型和
    严重程度和治疗方案。有效量典型地在合适地设计的临床试验(剂量范围研究)中被确定并
    且本领域技术人员将了解如何适当地进行此类试验以确定有效量。如众所周知的,有效量
    取决于多种因素,包括配体与受体的亲和力、其在体内的分布概况、多种药理学参数例如在
    体内的半衰期,取决于不期望的副作用(如果有的话),取决于例如年龄和性别的因素等等。

    在某些实施方案中,有效量的化合物通过以下途径中的一种或更多种被施用:口
    服的、直肠的、经粘膜的、经鼻的、肠道的、肠胃外的、肌内的、皮下的、髓内注射、鞘内的、直
    接心室内的、静脉内的、腹膜内的、鼻内的、或眼内的注射。

    本发明的另外的方面提供包含如本文描述的组合物和使用说明书的试剂盒。

    在另一方面中,本发明提供作为前药的本发明的化合物。如本文所使用,术语“前
    药”指的是通过某些生理化学过程在体内被转化成母体药物(活性成分)的剂(例如,在生理
    条件下被转化成期望的药物形式的前药)。本发明的前药是有用的,因为其可以比母体药物
    更易于施用,其是较小毒性的并且提供改进的生物利用度。在施用之后,前药酶促地或化学
    地被裂解以在血液或组织中递送活性药物。

    在某些实施方案中,前药在生理pH(7.4)中释放活性剂(活化的)。在某些实施方案
    中,前药在低于生理pH的pH下被活化。在某些实施方案中,前药在约6的pH下被活化。

    附图简述

    为了更好地理解本文公开的主题并且为了例示主题可以如何在实践中进行,现在
    将参照附图通过仅非限制性实施例的方式描述实施方案,在附图中:

    图1A是OXA-PAL-ACT的合成的描述;图1B示出OXA-PAL-ACT NP构建体的示意图。用
    于在人类癌细胞内释放活性奥沙利铂的Pt(IV)前药细胞内还原的化学结构。

    图2A示出OXA-PAL-ACT 1H-NMR光谱;图2B示出OXA-PAL-ACT195Pt-NMR光谱:
    1589ppm。

    图3A-C示出OXA-PAL-ACT NP的TEM图像。

    图4A-B示出OXA-PAL-ACT NP的SEM图像:(图4A)SE模式和(图4B)BSE模式。

    图5示出OXA-PAL-ACT NP的尺寸的代表性测量。

    图6A示出OXA-PAL-ACT NP在SKOV-3细胞系内的细胞毒性的体外评估;图6B示出
    OXA-PAL-ACT NP在SKOV-3-luc细胞系内的细胞毒性的体外评估。

    图7A-B示出奥沙利铂衍生物对PC-3细胞系的细胞毒性作用:(A)全部浓度范围;
    (B)0-5μg/ml。

    图8A-D示出(图8A)奥沙利铂衍生物对代表前列腺癌的PC-3luc细胞系单层的细胞
    毒活性;(图8B)奥沙利铂衍生物对BxPC-3细胞系的细胞毒活性;(图8C)奥沙利铂衍生物对
    代表卵巢癌的ovcar-8细胞系单层的细胞毒活性;以及(图8D)奥沙利铂衍生物对代表卵巢
    癌的SKOV-3细胞系单层的细胞毒活性。

    图9示出用于奥沙利铂和OXA-PAL-ACT(SKOV-3细胞系)的MTT板。

    图10A-B示出奥沙利铂和OXA-PAL-ACT对代表卵巢癌的(图10A)A2780-cisR细胞系
    和(图10B)A2780细胞系的细胞毒性作用。

    图11示出OXA-PAL-ACT对非癌症细胞系的细胞毒性作用。在HaCaT和RASM中的治疗
    比率分别高于1.8和2。HaCaT细胞系单层代表人类角质细胞,RASM系单层代表大鼠主动脉平
    滑肌细胞。

    图12A-C示出SKOV-3细胞凋亡。在SKOV-3细胞中的凋亡细胞死亡通过使用膜联蛋
    白V和碘化丙啶(PI)双染色的流式细胞仪分析来评估。将细胞用5μg/ml(图12B)和50μg/ml
    (图12C)OXA-PAL-ACT处理持续24h。对照在图12A中被示出。凋亡细胞是[膜联蛋白V(+)PI
    (+)细胞和膜联蛋白V(+)PI(-)细胞]。

    图13A-B示出用变化的药物浓度温育之后,在SKOV-3-luc细胞中暴露24h之后如通
    过ICP-MS测量的全细胞Pt累积(细胞摄取)。值是平均值±标准偏差(n=3):(图13A)24h处
    理SKOV-3-luc之后,体外Pt累积/细胞;(图13B)24h处理SKOV-3-luc之后,体外Pt累积/蛋白
    质。

    图14A-B示出用变化的药物浓度温育之后,在SKOV-3细胞中暴露24h之后如通过
    ICP-MS测量的全细胞Pt累积(细胞摄取)。值是平均值±标准偏差(n=3):(图14A)24h处理
    SKOV-3之后,体外Pt累积/细胞;(图14B)24h处理SKOV-3之后,体外Pt累积/蛋白质。

    图15示出在SKOV-3细胞中暴露24h之后如通过ICP-MS测量的DNA铂化(DNA
    platination)的程度。值是平均值±标准偏差(n=7)。统计学分析使用SPSS进行并且揭示,
    观察到的DNA铂化值的差异是显著的(**P<0.01,ANOVA以及**P<0.01,克鲁斯卡尔-沃利斯检
    验(Kruskal-Wallis Test))。事后分析示出,OXA和OXA-PAL-ACT溶液/NP之间存在显著性差
    异(**P<0.01,Tukey)。

    图16A示出通过生物发光荧光素酶成像测定的在活体小鼠中的SKOV-3luc肿瘤生
    长的纵向检测(longitudinal detection)和定量。统计学分析使用SPSS进行并且揭示,观
    察到的差异是显著的(单向ANOVA**P<0.01)。使用Dunnett检测(2-侧)的事后分析示出,在对
    照组和每个OPA治疗组之间存在显著性差异(**P<0.01)。图16B示出从肿瘤细胞注射当天直
    到死亡(根据批准的伦理委员会安乐死要求。该研究在第93天时终止)的卡普兰-迈耶存活
    曲线(Kaplan-Meier survival curve)。

    图17示出从肿瘤接种(第0天)开始贯穿全部研究时间段直到安乐死的体重跟踪。
    变化被记录为在肿瘤细胞注射之前一天观察到的初始体重的百分数(在第0天时是100%)。
    结果作为平均值±SD被提供,直到最后存活的动物(根据批准的伦理委员会安乐死要求)。

    图18A通过生物发光荧光素酶成像测定的、在SCID-bg活体小鼠(n=7-9)中从细胞
    注射开始(第0天直至第47天)的BxPC-3-luc2肿瘤生长的纵向检测和定量。结果作为平均值
    ±SEM被提供。统计学分析使用SPSS进行并且揭示,观察到的组之间的差异是显著的(单向
    ANOVA**P<0.01)。图18B示出从肿瘤接种(第0天)开始贯穿全部研究时间段直到安乐死的体
    重跟踪。结果作为平均值±SD被提供,直到最后存活的动物(根据批准的伦理委员会安乐死
    要求)。

    图19通过生物发光荧光素酶成像测定的、在SCID-bg活体小鼠(n=9-10)中从细胞
    注射(第0天直至第33天)的HCT-116-luc2肿瘤生长的纵向检测和定量。结果作为平均值±
    SEM被提供。统计学分析使用SPSS进行并且揭示,观察到的组之间的差异是显著的(单向
    ANOVA**P<0.01)。

    具体实施方式

    材料和方法

    材料

    奥沙利铂从AK Scientific,Inc.USA获得。棕榈酸、噻唑蓝溴化四唑、氯甲酸乙酯
    以及半胱氨酸购自Sigma-Aldrich。油酸(Fisher Scientific)和PLGA 50KDa、
    RG 504H(Boehringer Ingelheim批号1035006)。Lipoid E80(Lipoid GmbH-Germany,批号
    1031157)。所有有机溶剂是HPLC级别的并且购自J.T Baker(Deventer,Holland)。

    乙酸棕榈酸奥沙利铂(OXA-PAL-ACT,图1A中的化合物B)合成

    OXA-ACT-OH(A)的合成

    将100mg(0.252mmol)的奥沙利铂溶解在20mL乙酸中并且向其添加1μL的30%H2O2。
    将混合物在室温下搅拌直到所有奥沙利铂完全溶解(4-5小时)。将过量的乙酸通过真空蒸
    发除去并且将产生的白色固体用二乙醚和丙酮洗涤并且通过真空蒸发干燥。将化合物通
    过195Pt NMR和1H NMR表征。收率:51%。

    OXA-PAL-ACT(B)的合成

    棕榈酸酐的合成

    将500mg棕榈酸(1.95mmol)溶解在20mL二氯甲烷中并且向其添加201.2mg N,N'-
    二环己基碳二亚胺(0.5当量,0.975mmol)。将反应混合物在室温下搅拌持续12h。反应的进
    程通过用乙酸乙酯作为流动相的TLC来检测。将形成的N,N'-二环己基脲从反应混合物中滤
    去并且将过量的二氯甲烷通过蒸发除去。

    在除去二氯甲烷之后,将获得的白色固体重新溶解在小量的二氯甲烷中并且将沉
    淀的N,N'-二环己基脲滤去。将此过程重复四次以完全除去N,N'-二环己基脲。形成的棕榈
    酸酐通过1H NMR来表征。收率:89%。

    OXA-PAL-ACT的合成

    将50mg OXA-ACT-OH(0.106mmol)溶解在5mL DMF中并且向其添加78.4mg棕榈酸酐
    (1.5当量,0.159mmol)。将反应混合物在400℃下搅拌持续12h(过夜)。反应的完成通过195Pt
    NMR来检查(在+1390ppm处的峰的消失以及在+1589ppm处的新的峰的形成)。将未反应的酸
    酐从反应混合物中滤去并且将DMF通过真空蒸发除去,产生粘至圆底烧瓶的壁的浅黄色固
    体。

    OXA-PAL-ACT的纯化

    在DMF的蒸发之后,将1mL甲醇添加至获得的固体并且将混合物充分地振摇(以通
    过甲醇溶解杂质和未反应的棕榈酸酐)。将不溶性白色沉淀通过离心收集并且用小量的甲
    醇洗涤两次并且在真空中干燥。然后,将产物使用HPLC进一步纯化。将获得的化合物通过
    195Pt NMR和1H NMR表征。收率:31%。

    LogP确定

    OXA-PAL-ACT的分配系数(Pow)在正辛醇和水中通过摇瓶法被确定,并且LogP被如
    下计算:


    体外研究

    细胞系和细胞温育条件

    体外实验在肺癌(A549)、前列腺癌(DU145和PC-3)、胰腺癌(BxPC-3)和卵巢癌
    (SKOV-3和OVCAR-8)的细胞系中进行。A549细胞、BxPC-3细胞和OVCAR-8细胞在补充有10%
    牛胎儿血清(Gibco)、1%L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素以及0.13%w/w庆大
    霉素的RPMI培养基中生长。PC-3细胞在DMEM加10%牛胎儿血清、1%L-谷氨酰胺、100U/ml青
    霉素、100μg/ml链霉素以及1%丙酮酸盐中培养。DU145细胞在补充有10%牛胎儿血清、
    100U/ml青霉素、以及100μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中生长。SKOV-3细胞在补充有10%
    牛胎儿血清、100U/ml青霉素、以及100μg/ml链霉素的McCoy’s 5A培养基中培养。将细胞系
    保持在37℃下在5%CO2下。所有细胞培养产品从Biological Industries(Beit HaEmek,
    Israel)获得。将药物溶解在DMSO中并且添加至合适的培养基。在绝不会使细胞暴露至大于
    0.5%DMSO即50μg/ml最大浓度的范围内选择药物浓度;将0.5mg的OXA-PAL-ACT溶解在50μl
    DMSO中并且然后添加至10ml细胞培养基。

    体外细胞毒性测定

    为了评估多种药物的效力,将细胞接种在无菌24孔板中并且在药物的存在下在37
    ℃、5%CO2下温育持续72h/120h。使用(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5二苯基溴化四唑)
    (MTT)测定法定量活细胞数。将细胞用MTT温育持续2h,添加DMSO以溶解晶体并且将板在
    540nm下测量。相对于每个测定的对照,构建生活力(%)图。将数据在图中标绘,线将点连
    接,并且值从内推的图中被确定。

    在细胞中的铂含量的确定

    将SKOV-3细胞和SKOV-3LUC细胞一式三份地接种在24孔板中(50×103个细胞/
    孔),允许达到80%-90%细胞覆盖(confluence),并且用奥沙利铂、OXA-PAL-ACT和OXA-
    PAL-ACT NP 5μg/ml、15μg/ml、25μg/ml处理持续24h(37℃)。

    在温育之后,将包含药物的培养基除去,并且将细胞用冷的PBS冲洗两次,胰蛋白
    酶化并且离心成沉淀物(4400rpm,5min)。将500μl的硝酸添加至细胞沉淀物,并且在70℃下
    温育过夜。通过使用0.1%SDS和1%硝酸裂解溶液稀释来制备样品,并且通过ICP-MS分析Pt
    含量。用DNeasy血液和组织试剂盒(Qiagen)从细胞系中分离并且纯化DNA。

    OXA-PAL-ACT纳米颗粒的制备

    OXA-PAL-ACT的纳米球通过溶剂沉积法(纳米沉淀)来制备。典型地,将7mg OXA-
    PAL-ACT、14mg PLGA 50KDa、7mg lipoid E80和1.5mg OCA溶解在4ml(1:20)乙醇/丙酮混合
    物中。将有机相添加至2.5ml的包含0.1%w/vHS 15的水溶液。将悬浮液在900rpm
    下搅拌超过15min,并且然后使用空气流通过溶剂的蒸发浓缩至2.5ml的最终体积,随后在
    4400rpm下离心持续10min。

    结果和讨论

    OXA-PAL-ACT合成和表征

    OXA-PAL-ACT使用1H-NMR、195Pt-NMR、HPLC(图2A-2B)和元素分析(表1)来鉴定。

    表1:OXA-PAL-ACT的元素分析值


    C
    H
    N
    理论值(%)
    43.87
    6.80
    3.94
    分析结果(%)
    43.69
    6.61
    3.89

    观察到的LogP值是2.76±0.14(n=5),而计算值(CLogP)是8.57(通过Chemdraw软
    件)。

    OXA-PAL-ACT NP的制备和表征

    在合成OXA-PAL-ACT化合物之后,获得它的球形纳米颗粒。

    TEM、SEM和AFM被用于表征OXA-PAL-ACT NP的形态学和尺寸。结果示出,其全部采
    取球形形状,其平均直径在从150nm至230nm的范围内,还通过Malvern Zetasizer(Malvern
    Instruments,Malvern UK)确定。ζ电势值在从-45mV至-50mV的范围内。此外,注意到,获得
    OXA-APL-ACT的高包封收率(encapsulation yield)(>95%),并且在NP内的OXA-APL-ACT的
    并入在21.5%w/w至22.7%w/w的范围内。(图3-5和表2)

    表2:OXA-PAL-ACT和空白NP的物理化学性质



    以药物用途为目的,为了储存较大批量的NP,对于开发用于这些NP的冻干的工艺
    存在需求。在药物包封之后,使用martin christ epsilon 2-6d仪器冷冻干燥NP。当用蔗糖
    (5%w/v)作为防冻剂冻干时,NP在物理上是稳定的。在冷冻干燥的NP保持在4℃持续1个月
    之后,没有尺寸、ζ电势或药物含量的显著变化被检测到,此外,NP的体外细胞毒活性被保持
    (图6A-6B)。

    OXA-PAL-ACT生物性质的评估

    如在图7-11和表3A-3B中可以看到的,奥沙利铂衍生物的IC50值在多种癌细胞系中
    在120h处理之后被确定。OXA-PAL-ACT具有针对癌细胞的独特的效能,具有比奥沙利铂更大
    的效力,此外OXA-PAL-ACT具有针对对铂疗法典型地是耐药的多种癌细胞的广谱的活性。

    表3A:在多种癌细胞系中在120h处理之后,奥沙利铂衍生物的IC50值的总结





    *N.D-未确定(IC50值高于最大测试浓度-50μg/ml)。

    **数据来自三次独立的实验。

    表3B:在多种癌细胞系中在120h处理之后,奥沙利铂衍生物的IC50值的总结



    *N.D-未确定(IC50值高于最大测试浓度-50μg/ml)。

    **数据来自三次独立的实验。

    如在图10中所示出,OXA和OXA-PAL-ACT针对两种卵巢癌细胞系的活性被确定。
    A2780是顺铂耐药性细胞系A2780-cisR的母系,因此,耐药性因子(resistance factor)从
    剂量应答曲线的IC50值来计算。OXA和OXA-PAL-ACT的耐药性因子分别是5.2和1,这指示OXA-
    PAL-ACT可以针对对铂疗法典型地是耐药的癌症类型是有效的。

    在SKOV-3细胞中的凋亡细胞死亡通过使用膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)双染色的流
    式细胞仪分析来评估。将细胞用5μg/ml和50μg/mlOXA-PAL-ACT处理持续24h。结果在图12中
    被提供。

    铂的细胞累积是细胞铂药物药理学中的关键步骤。为了检查OXA-PAL-ACT在癌细
    胞中的相对累积,在SKOV-3细胞和SKOV-3-luc细胞暴露至在变化的药物浓度下的奥沙利
    铂、OXA-PAL-ACT或OXA-PAL-ACT NP之后,在SKOV-3细胞和SKOV-3-luc细胞中的总Pt含量被
    测量。被归一化成总细胞蛋白质或1x105个细胞的数据在图13-14中被提供。相比于奥沙利
    铂的细胞累积,OXA-PAL-ACT和OXA-PAL-ACTNP的细胞累积是明显较高的。

    在图15中示出的、在SKOV-3细胞24h暴露至25μg/ml的奥沙利铂、OXA-PAL-ACT或
    OXA-PAL-ACT NP之后测量的核DNA铂化的程度的分析指示相比于奥沙利铂,OXA-PAL-ACT的
    较高的DNA铂化。普遍接受的是,通过铂药物的结合诱导的DNA损伤是其细胞毒性性质的主
    要原因。因此,针对SKOV-3人类卵巢癌细胞系,较高的DNA铂化不令人惊讶地表现为OXA-
    PAL-ACT相比于游离的奥沙利铂的增加的细胞毒性。

    NP在SKOV-3细胞中通过CLSM的细胞摄取

    在温育之后15min,已经观察到NP的细胞摄取和定位(localization)并且在第6h
    是最明显的。将核通过DAPI染色,而使用若丹明荧光标记的NP在细胞质内容易地被可视化。
    事实上,观察到NP的增加的细胞质累积作为稀释(1:100相对于1:200)的函数并且相比于1、
    3时间间隔,在第6h,具有更显著的核周围的定位模式和核定位模式。

    卵巢癌小鼠模型

    为了卵巢癌小鼠模型的诱导,分成4个组的5-6周龄的重症综合免疫缺陷(SCID)小
    鼠用2x 106SKOV-3luc细胞直接注射到腹腔中(腹腔注射(i.p.))。将细胞悬浮在100μl PBS
    中。

    给药方案

    将治疗通过静脉内注射施用一周一次,总计4次治疗。治疗组包括在5mg/kg体重的
    剂量下的游离的奥沙利铂、在15mg/kg体重的剂量下的OXA-PAL-ACT、作为对照的注射溶液
    (媒介物)、以及15mg/kg的OXA-PAL-ACT NP。所有治疗以相同治疗方案被给出。对于肿瘤验
    证和肿瘤生长跟踪,使用CCCD摄像机(IVIS,Caliper Life Sciences,Xenogen
    Corporation)每7天进行生物发光成像。腹膜内注射D-荧光素并且将小鼠通过3%异氟烷麻
    醉。将动物放在IVIS成像盒中的黑色纸上并且背侧地和腹侧地成像。以辐射亮度单位(光
    子/秒/cm2)记录总发光(背侧的和腹侧的)。在细胞注射和肿瘤接种的验证后第30天,将动
    物分成具有相等的平均辐射亮度值的四个组。

    如在图16A中可以看到的,治疗从第30天开始。OXA溶液的最大耐受剂量是5mg/kg,
    而由于媒介物的毒性,在溶液中的OXA-PAL-ACT的最大耐受剂量是15mg/kg。注意的是,并入
    在NP内的OXA-PAL-ACT在30mg/kg的剂量下是良好地耐受的??梢怨鄄斓降氖?,从第60天,在
    溶液和在NP中的OXA-PAL-ACT两者均比OXA更有效。在相同剂量下的OXA-PAL-ACT溶液和NP
    之间不存在差异,如在图16B中所描述。此外,在图17中,随时间的体重变化被提供。尽管如
    通过从细胞接种接近第50天开始的明显的重量减少所反映的,OXA是毒性的,然而包括OXA-
    PAL-ACT溶液和NP的剩余的制剂与对照媒介物类似地不减少动物体重并且还注意到一些增
    加,这示出OXA-PAL-ACT制剂在视觉上是良好地耐受的。这些结果是非常令人鼓舞的并且在
    将来向临床医生打开新颖的治疗机会,提供战胜威胁生命的癌症疾病的新的治疗武器
    (therapeutic arsenal)的。

    胰腺癌

    将5-6周龄SCID小鼠用2x106BxPC-3-luc细胞皮下地接种。在肿瘤接种后第7天,将
    小鼠分成具有相等的平均辐射亮度值的四个组。

    将治疗通过静脉内注射(尾部)施用一周一次,总计4次治疗。

    新颖的化合物(游离的和并入NP内的)和OXA的抗增殖活性在HCT116-luc2细胞系
    (人类结肠直肠癌)和BxPc-3-luc2细胞系(人类胰腺癌)中通过MTT测定法来确定。产生的
    50%生长抑制浓度(IC50)值在表4中被提供。

    表4.OXA、OXA-PAL-ACT(OPA)、以及OPA NP在两种癌症细胞系中的IC50值。


    胰腺肿瘤通过荧光素酶转染的胰腺癌细胞BxPc-3-luc2至SCID-bg小鼠的皮下注
    射被诱导。肿瘤发育和进展通过生物发光成像来验证。在肿瘤细胞注射之后第八天,开始四
    次治疗的周期(静脉内途径)(一周一次)。相比于OXA和对照,OPA和OPA NP在胰腺肿瘤生长
    抑制方面是相等地且显著地更有效。此外,在此特定的细胞系中没有示出任何效力的对照
    和OXA之间不存在差异。

    结肠癌模型

    将5-6周龄SCID小鼠用1x106HCT-116-luc2细胞皮下地接种。在肿瘤接种之后第1
    天,开始治疗。将治疗通过静脉内注射(尾部)施用每四天一次,总计4次治疗。

    图19示出通过生物发光荧光素酶成像测定的、在SCID-bg活体小鼠(n=9-10)中从
    细胞注射(第0天直至第33天)的HCT-116-luc2肿瘤生长的纵向检测和定量。结果作为平均
    值±SEM被提供。统计学分析使用SPSS进行并且揭示,观察到的组之间的差异是显著的(单
    向ANOVA**P<0.01)。事实上,等效剂量被感染,因为9mg/kg OPA等效于5mg/kg OXA??梢宰?br />意到,对照的肿瘤随时间逐渐地且显著地生长,而最显著的抑制效果由OPA NP在从肿瘤接
    种的33天的时间间隔时被引出。OPA NP的结果在肿瘤的抑制方面比由OXA在等效的剂量下
    引出的抑制效果明显地更有效。然而,在OPA溶液和OPA NP之间或在OPA溶液和OXA溶液之间
    不存在明显的效力差异(图19)。

    比较研究

    新的Pt化合物的分配系数在正辛醇和水中通过摇瓶法被确定。产生的logP值在表
    5中被报告。如所预期,新的衍生物的测量的logP值大于OXA,指示其固有的亲脂性特性。

    表5.Pt化合物的195Pt NMR位移、实验地测量的logP、以及通过循环伏安法测量的
    还原电势。[a]相对于Ag/AgCl。


    OXA-PAL-ACT(OPA)生物性质的评估

    新颖的化合物和奥沙利铂的抗增殖活性在PC-3细胞系、PC-3-luc(人类前列腺癌)
    细胞系、BxPC-3(人类胰腺癌)细胞系、OVCAR-8细胞系、SKOV-3(人类卵巢癌)细胞系、CT-26-
    luc(鼠科结肠直肠癌)细胞系中通过MTT测定法被确定。将细胞连续地处理持续120h。产生
    的50%生长抑制浓度(IC50)值在表6中被总结。OPA示出针对不同癌细胞系的独特的效能,具
    有比OXA更强的细胞毒性。此外,其具有针对对基于铂的化合物典型地耐药的癌细胞的广谱
    的活性。

    表6.在多种癌细胞系中120h温育之后,OXA衍生物的IC50值。



    *值是从三次独立的实验获得的平均值±标准偏差。

    OXA和OPA针对一对顺铂敏感性和耐药性的卵巢癌细胞系A2780和A2780-cisR的活
    性作为浓度的函数被确定。A2780cisR通过减少的摄取、增强的DNA修复/耐受、以及升高的
    还原的谷胱甘肽(GSH)水平的组合对顺铂是耐药的。

    耐药性因子是在耐药细胞系中的IC50值与在母体细胞系中的IC50值的比率(表7),
    其指示OPA可以克服获得性顺铂耐药性并且可以针对对铂疗法典型地是耐药的癌症类型是
    有效的。

    表7.化合物针对A2780、A2780-cisR的IC50(μM)值和RF



    [a]IC50值是对于50%细胞死亡所需的药物浓度并且是三次独立的实验的平均值±
    SD。[b]代表耐药性因子的RF是在耐药细胞系中的IC50值与在母体细胞系中的IC50值的比率。

    应当强调的是,不考虑细胞系,OPA一直是比ODP二棕榈酸奥沙利铂更有细胞毒性
    的且更有效的,这表明LogP的值不是影响细胞毒性效果的唯一的参数,而且分子的两亲性
    也确实影响细胞毒性效果。显然地,需要接近2的值的一定的log P值以允许癌细胞的良好
    的且迅速的可渗透性,如由表6和表7中所描述的结果反映的。

    在温育之后15min,已经观察到NP的细胞摄取和定位并且最明显的是在第6h。将核
    通过DAPI染色,而使用PE丽丝胺若丹明B荧光标记的NP在细胞质内容易地被可视化。事实
    上,观察到NP的增加的细胞质累积作为稀释(1:100相对于1:200)的函数并且相比于1、3时
    间间隔,在第6h,具有更显著的核周围的定位模式和核定位模式。

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