• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 8
    • 下载费用:30 金币  

    重庆时时彩人工计划2: 一株同时降解精氨酸和尿素的粟酒裂殖酵母菌.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201610911832.8

    申请日:

    2016.10.19

    公开号:

    CN106635848A

    公开日:

    2017.05.10

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):C12N 1/16申请日:20161019|||公开
    IPC分类号: C12N1/16; C12N1/20; C12G3/02; C12G3/12; C12R1/645(2006.01)N; C12R1/25(2006.01)N; C12R1/225(2006.01)N 主分类号: C12N1/16
    申请人: 江南大学
    发明人: 杜海; 徐岩
    地址: 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号
    优先权:
    专利代理机构: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 代理人: 张勇
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201610911832.8

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.06.06|||2017.05.10

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一株同时降解精氨酸和尿素的粟酒裂殖酵母菌,属于微生物技术领域。本发明的粟酒裂殖酵母菌S.pombe??C??11对高粱汁中的精氨酸的降解能力达1.01mmol·L??1且只生成较少的尿素(0.54mmol·L??1),对尿素的降解能力高达2.03mmol·L??1;本发明的粟酒裂殖酵母菌,可以用于白酒发酵过程中,通过在发酵过程中适当提高其含量,可以有利于发酵过程中EC含量的降低。

    权利要求书

    1.一株粟酒裂殖酵菌,其特征在于,所述粟酒裂殖酵菌于2016年06月28日保藏于中国
    微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.12715,保藏地址为北
    京市朝阳区北辰西路1号院3号。
    2.一种微生物菌剂,其特征在于,所述微生物菌剂中含有保藏编号为CGMCC NO.12715
    的粟酒裂殖酵菌。
    3.根据权利要求2所述的微生物菌剂,其特征在于,所述微生物菌剂中还含有任何能够
    应用于食品或者食品制备的任意种属的菌株。
    4.根据权利要求3所述的微生物菌剂,其特征在于,所述微生物菌剂中还含有保藏编号
    为CGMCC NO.12717的植物乳杆菌和保藏编号为CGMCC NO.12716的发酵乳杆菌。
    5.根据权利要求3所述的微生物菌剂,其特征在于,所述微生物菌剂是将保藏编号为
    CGMCC NO.12715的粟酒裂殖酵母、保藏编号为CGMCC NO.12716的发酵乳杆菌、保藏编号为
    CGMCC NO.12717的植物乳杆菌分别活化后,按照体积比1:1:1混合得到液体菌剂。
    6.一种发酵食品的制备方法,其特征在于,所述方法使用了权利要求1所述的粟酒裂殖
    酵菌或者权利要求2~5任一所述的微生物菌剂。
    7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述发酵食品为酿造酒或者蒸馏酒。
    8.一种酒精饮品的制备方法,其特征在于,所述方法是在酒精饮料的发酵过程中额外
    接种含有保藏编号为CGMCC NO.12715的粟酒裂殖酵菌的微生物菌剂到发酵基质中。
    9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述微生物菌剂是将保藏编号为CGMCC
    NO.12715的粟酒裂殖酵母、保藏编号为CGMCC NO.12716的发酵乳杆菌、保藏编号为CGMCC
    NO.12717的植物乳杆菌分别活化后,按照体积比1:1:1混合得到液体菌剂。
    10.根据权利要求8~9任一所述的方法,其特征在于,所述方法是在白酒发酵酒醅中额
    外接种微生物菌剂至微生物菌剂含量为107CFU/g酒醅。

    说明书

    一株同时降解精氨酸和尿素的粟酒裂殖酵母菌

    技术领域

    本发明涉及一株同时降解精氨酸和尿素的粟酒裂殖酵母菌,属于微生物技术领
    域。

    背景技术

    氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate,EC)是一种2A类致癌物,被认为是食品中继黄曲
    霉毒素之后的又一重要污染物。很多研究者在许多酒饮料和食品中检测到了氨基甲酸乙酯
    的存在。自此,发酵食品中氨基甲酸乙酯的含量受到广泛关注。已有报道检测了不同香型成
    品白酒中EC的含量,结果显示白酒中EC平均含量约为100μg·L-1,低于150μg·L-1的国际限
    量标准。其中,清香型、酱香型、药香型及特香型白酒中EC含量较低,而浓香型、芝麻香型、凤
    香型等白酒中EC含量偏高。

    在烘焙和发酵食品中,经常在发酵液中添加尿素作为酵母的氮源。已有报道显示
    尿素与乙醇反应可以生成EC;同时发现葡萄汁发酵过程中EC的主要来源是由精氨酸分解而
    来的尿素。日本研究者通过基因工程手段构建了精氨酸酶基因缺失的清酒酵母,利用该酵
    母发酵发现没有尿素的累积,并且EC含量大幅度下降。范文来、徐岩等也发现酒醅中尿素和
    EC的变化趋势类似,二者之间具有一定的相互关系。酒饮料中的EC可能产生于蒸馏前、蒸馏
    时及蒸馏后各个阶段,目前,普遍认为蒸馏前,也就是发酵阶段形成的EC主要来源于尿素。

    因此,获取能降解精氨酸和尿素的粟酒裂殖酵母菌,对于以粟酒裂殖酵母作为主
    要功能微生物的发酵食品的生产就显得尤为重要,对于食品安全具有重要贡献。

    发明内容

    为了解决上述问题,本发明提供了一株降解精氨酸和尿素的粟酒裂殖酵母菌
    (Schizosaccharomyces pombe)。

    所述粟酒裂殖酵母菌(Schizosaccharomyces pombe),已于2016年6月28日保藏于
    中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.12715,保藏地址
    为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

    所述粟酒裂殖酵母菌CGMCC NO.12715是从白酒酒醅中筛选得到的。

    所述粟酒裂殖酵母菌CGMCC NO.12715具有如下特性:

    (1)本发明的粟酒裂殖酵母菌对高粱汁中的精氨酸的降解能力达1.01mmol·L-1且
    只生成较少的尿素(0.54mmol·L-1);

    (2)本发明的粟酒裂殖酵母菌对,对高粱汁中的尿素的降解能力高达2.03mmol·
    L-1;

    (3)产多种风味物质;

    (4)用于酒精饮料发酵过程中,通过在发酵过程中适当提高其含量,可以有效降低
    精氨酸和尿素含量,有利于发酵过程中EC含量的降低。

    本发明的第二个目的是提供含有所述CGMCC NO.12715菌株的微生物菌剂。

    在本发明的一种实施方式中,所述微生物菌剂含有CGMCC NO.12715菌体的活细
    胞、冷冻干燥得到的CGMCC NO.12715干菌体、固定化的CGMCC NO.12715细胞、CGMCC
    NO.12715的液体菌剂、CGMCC NO.12715的固体菌剂,或者以其他任何形式存在的CGMCC
    NO.12715菌株。

    在本发明的一种实施方式中,所述微生物菌剂中还含有任何可以应用于食品或者
    食品制备的任意种属的菌株,比如地衣芽孢杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌等等。

    在本发明的一种实施方式中,所述微生物菌剂中还含有保藏编号为CGMCC
    NO.12717的植物乳杆菌和保藏编号为CGMCC NO.12716的发酵乳杆菌。

    在本发明的一种实施方式中,所述微生物菌剂是将保藏编号为CGMCC NO.12715的
    粟酒裂殖酵母、保藏编号为CGMCC NO.12716的发酵乳杆菌、保藏编号为CGMCC NO.12717的
    植物乳杆菌分别活化后,按照体积比1:1:1混合得到液体菌剂。

    在本发明的一种实施方式中,所述微生物菌剂中还含有任意能用于食品的载体。

    本发明的第三个目的是提供所述微生物菌剂在食品技术领域的应用,尤其是应用
    于发酵食品技术领域。

    本发明的第四个目的是提供所述CGMCC NO.12715菌株或者所述含有CGMCC
    NO.12715的微生物菌剂的应用,是应用于食品技术领域,尤其是发酵食品技术领域。

    在本发明的一种实施方式中,所述应用,是应用于酿造酒、蒸馏酒等方面,比如白
    酒、葡萄酒、黄酒、果酒方面。

    在本发明的一种实施方式中,所述应用,是将所述CGMCC NO.12715菌株或者所述
    含有CGMCC NO.12715的微生物菌剂添加到白酒、葡萄酒、黄酒或者果酒酿造过程中。

    本发明的第五个目的是提供一种酒精饮品的制备方法,所述方法是在酒精饮料的
    发酵过程中额外接种含有保藏编号为CGMCC NO.12715的粟酒裂殖酵菌的微生物菌剂到发
    酵基质中。

    在本发明的一种实施方式中,所述微生物菌剂以粟酒裂殖酵菌为唯一微生物;所
    述方法是在白酒发酵酒醅中额外接种CGMCC NO.12715菌株至107CFU/g酒醅。

    在本发明的一种实施方式中,所述微生物菌剂是将保藏编号为CGMCC NO.12715的
    粟酒裂殖酵母、保藏编号为CGMCC NO.12716的发酵乳杆菌、保藏编号为CGMCC NO.12717的
    植物乳杆菌分别活化后,按照体积比1:1:1混合得到液体混合菌剂。

    在本发明的一种实施方式中,所述方法是在白酒发酵酒醅中额外接种微生物菌剂
    至微生物菌剂含量为107CFU/g酒醅。

    在本发明的一种实施方式中,所述方法是微生物制剂按照总接种量107CFU/g酒醅
    接种至固态发酵培养基中,并接种10wt%的大曲,放置30℃恒温培养箱中静置发酵6d。

    其中,固态发酵培养基的制备:称250g高粱,加入350mL蒸馏水,于70-80℃培养箱
    中浸泡24h。将水沥干,称取500g高粱于真空袋中,再加入25mL蒸馏水;121℃,灭菌20min;加
    酶糖化1d。

    本发明的有益效果:

    本发明的粟酒裂殖酵母菌,是目前能同时降解精氨酸和尿素且降解效果最好的粟
    酒裂殖酵母菌。本发明的CGMCC NO.12715对高粱汁中的精氨酸的降解能力达1.01mmol·L-1
    且只生成较少的尿素(0.54mmol·L-1);对高粱汁中的尿素的降解能力高达2.03mmol·L-1;
    产多种风味物质;用于酒精饮料发酵过程中,通过在发酵过程中适当提高其含量,可以有效
    降低精氨酸和尿素含量,有利于发酵过程中EC含量的降低。

    生物材料保藏

    本发明所提供的粟酒裂殖酵母菌,分类学命名为粟酒裂殖酵母菌
    Schizosaccharomyces pombe,已于2016年6月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会
    普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.12715,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3
    号。

    本发明所提供的发酵乳杆菌,分类学命名为发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum,已
    于2016年6月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为
    CGMCC NO.12716,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

    本发明所提供的植物乳杆菌,分类学命名为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum,已
    于2016年6月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为
    CGMCC NO.12717,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

    具体实施方式

    EC含量测定参照文献:顶空固相微萃取(HS-SPME)和气相色谱-质谱(GC-MS)联用
    定量蒸馏酒中氨基甲酸乙酯[J].食品工业科技,2012,33(14):60-63。

    酒醅中尿素含量的测定

    尿素含量测定参照文献:Jimenez-Martin E,Ruiz J,Perez-Palacios T,et
    aL.Gas chromatography-mass spectrometry method for the determination of free
    amino acids as their dimethyl-tert-butylsilyl(TBDMS)derivatives in animal
    source food[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2012,60(10):2456-
    2463。

    实施例1:本发明的粟酒裂殖酵母对精氨酸、尿素的降解情况

    酵母是将精氨酸转化为尿素的主要菌群,由于生长需求,酵母需大量的氮源?;肪?br />中的精氨酸和尿素都可作为氮源供酵母吸收利用,但酵母优先利用精氨酸。因此,环境中精
    氨酸、尿素和酵母菌等都会影响发酵过程中尿素的含量,从而影响EC的含量。而酵母的数量
    和代谢能力是影响尿素水平的重要因素,研究发酵体系中酵母将精氨酸代谢成尿素的能力
    很有必要。

    根据酒醅中精氨酸和尿素检测结果设计代谢实验中精氨酸添加量为300mg L-1(高
    粱汁培养基中本身含有一定的精氨酸,额外添加300mg L-1后总精氨酸含量约690mg/L,接近
    真实酒醅中精氨酸含量),尿素添加量为200mg L-1。发酵采用高粱汁对实验菌株进行精氨
    酸、尿素的代谢实验。

    实验及对照组设定:

    空白1:高粱汁培养基按2%接种量接种,不添加精氨酸及尿素;

    实验组1:添加300mg L-1精氨酸的高粱汁培养基按2%接种量接种;

    实验组2:添加200mg L-1尿素的高粱汁培养基按2%接种量接种;

    其中,实验菌株是按2%接种量接种到培养基中,30℃下静置培养48~54h。测定发
    酵起点、发酵终点的发酵液中精氨酸、尿素的含量以及活菌数。

    高粱汁培养基:将高粱:水=1:4(M:V),加淀粉酶蒸煮液化,60℃加糖化酶糖化,过
    滤离心,调节糖度至10°Bx。

    选取发酵酒醅中筛出的4株对精氨酸和/或尿素代谢能力相对较强的酵母
    Saccharomyces cerevisiae C3、Zygosaccharomyces bailii C7、
    Schizosaccharomycespombe C11和Issatchenkia orientalis C16进行精氨酸和尿素的代
    谢能力实验。

    结果如表1所示。从表1中可以看出4株酵母菌都可以降解精氨酸生成尿素,但其能
    力有强有弱。S.cerevisiae C-3降解精氨酸生成尿素的能力虽然很强,但是对尿素的降解
    能力较弱,只有0.56mmol·L-1。S.pombe C-11对精氨酸的降解能力达1.01mmol·L-1且只生
    成较少的尿素(0.54mmol·L-1),对尿素的降解能力高达2.03mmol·L-1,是4株酵母中最强
    的。针对这一特点,若在发酵过程中适当提高其含量,可以有利于发酵过程中EC含量的降
    低。

    表1 4株酵母菌对精氨酸和尿素的代谢能力


    粟酒裂殖酵母菌Schizosaccharomycespombe C11,已于2016年6月28日保藏于中
    国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.12715。

    此外,本发明还得到的能同时高效降解精氨酸和尿素的发酵乳杆菌CGMCC
    NO.12716(L. fermentum JSA30)、植物乳杆菌CGMCC NO.12717(L.plantarum JD19),如表2
    所示。同时,植物乳杆菌CGMCC NO.12717和发酵乳杆菌CGMCC NO.12716,都能够代谢产生酸
    类、醇类、酮类、酚类等物质,为白酒提供重要的风味化合物;CGMCC NO.12717和CGMCC
    NO.12716,于MRS培养基、30℃厌氧发酵2d后进入稳定期,菌体浓度分别可达OD600=3.5、
    OD600=2.4,发酵液pH分别为3.8、4.3;发酵36h后乳酸含量分别可达到24g/L、12g/L;发酵3d
    的乙酸产量分别可达5.7g/L、6g/L。

    表2CGMCC NO.12716和CGMCC NO.12717对精氨酸和尿素的代谢情况


    实施例2:粟酒裂殖酵母产风味物质测定

    高粱浸出汁培养基:高粱200g→粉碎→加水800mL和高温淀粉酶200μL→蒸煮20min
    →加入高温淀粉酶200μL,蒸煮20min→冷却后加入液化酶1mL→55℃保温4h→过滤得滤液。

    将粟酒裂殖酵母菌CGMCC NO.12715菌株种子液摇瓶培养1d后,按107CFU/mL接种
    量接入高粱浸出汁培养基于30℃培养箱中恒温静置培养6d。并检测发酵结束时发酵液的风
    味物质。

    运用顶空固相微萃取技术(HS-SPME)和气相色谱-质谱(GC-MS)方法分析。分别取
    8mL离心后的上清液和蒸馏液,放入装有3g钠盐的顶空进样瓶中。以4-甲基-2-戊醇为内标。
    旋紧瓶盖,将顶空瓶置于50℃恒温萃取45min。萃取完后进GC-MS分析,GC-MS分析条件见文
    献。结果如表3所示。

    表3主要风味物质


    实施例3:CGMCC NO.12715的固态模拟发酵

    固态发酵培养基的制备:称250g高粱,加入350mL蒸馏水,于70-80℃培养箱中浸泡
    24h。将水沥干,称取500g高粱于真空袋中,再加入25mL蒸馏水。121℃,灭菌20min。加酶糖化
    1d。

    对照组:在额外有添加300mg L-1的精氨酸的固态发酵培养基中接种10wt%的大
    曲,30℃ 恒温培养箱中静置发酵6d。

    实验组1:将粟酒裂殖酵母菌CGMCC NO.12715的种子液以终浓度107CFU/g酒醅的
    接种量接种至额外有添加300mg L-1的精氨酸的固态发酵培养基中,并接种10wt%的大曲,
    放置30℃恒温培养箱中静置发酵6d。

    实验组2:将保藏编号为CGMCC NO.12715的粟酒裂殖酵母、保藏编号为CGMCC
    NO.12716的发酵乳杆菌、保藏编号为CGMCC NO.12717的植物乳杆菌分别活化后,按照体积
    比1:1:1混合得到液体混合菌剂。测定液体混合菌剂中的细胞浓度,然后以107CFU/g酒醅的
    接种量接种至额外有添加300mg L-1的精氨酸的固态发酵培养基中,并接种10wt%的大曲,
    放置30℃恒温培养箱中静置发酵6d。

    实验组3:与实验组1相比,仅仅是将额外添加的300mg L-1精氨酸替换成额外添加
    200mg L-1尿素。

    实验组4:与实验组2相比,仅仅是将额外添加的300mg L-1精氨酸替换成额外添加
    200mg L-1尿素。

    实验组和对照组各3个平行,结果取平均值,如表4-5所示。由表4可知,通过接种
    CGMCC NO.12715或者本发明的混合微生物菌剂强化发酵,可以有效降解精氨酸和尿素。同
    时,实验组得到的产品风味更佳优良,尤其是实验组2。

    表4发酵结果


    其中,Cit为瓜氨酸、Arg为精氨酸,Orn为鸟氨酸。Δ代表发酵后相应物质的含量-
    发酵前的含量,比如ΔCit代表发酵6d后发酵物中瓜氨酸含量减去初始培养基中的瓜氨酸
    含量。

    表5发酵结果


    可以理解的是,对本领域普通技术人员来说,可以根据本发明的技术方案及其发
    明构思加以等同替换或改变,而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保
    护范围。

    关 键 词:
    同时 降解 精氨酸 尿素 粟酒裂殖 酵母菌
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    关于本文
    本文标题:一株同时降解精氨酸和尿素的粟酒裂殖酵母菌.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-6084147.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03