• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 10
    • 下载费用:30 金币  

    重庆时时彩出现巨奖: 一种CNSUP/SUP检测试剂及其合成方法和应用.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201710003440.6

    申请日:

    2017.01.04

    公开号:

    CN106674048A

    公开日:

    2017.05.17

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C07C 253/30申请日:20170104|||公开
    IPC分类号: C07C253/30; C07C255/41; C09K11/06; G01N21/64 主分类号: C07C253/30
    申请人: 山西大学
    发明人: 霍方俊; 阴彩霞
    地址: 030006 山西省太原市小店区坞城路92号
    优先权:
    专利代理机构: 山西五维专利事务所(有限公司) 14105 代理人: 张福增
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201710003440.6

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.10.16|||2017.06.09|||2017.05.17

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明提供了一种CN??检测试剂及其合成方法和应用,所述检测试剂为(E)??2??(3??(3??甲酸基??4??氢氧苯乙烯基)??5,5??二甲基??2??环乙烯基??1??亚基)丙二腈。合成方法:以异佛尔酮和丙二腈为原料,制得2??(3,5,5??三羟基环己烷??2??烯亚基)丙二腈;再与对羟基苯甲醛反应制得(E)??2(3??(4??氢氧苯乙烯基)??5,5??二甲基??2??环己烯基??1??亚基)丙二腈;加入六亚甲基四胺,F3COOH制得(E)??2??(3??(3??甲酸基??4??氢氧苯乙烯基)??5,5??二甲基??2??环乙烯基??1??亚基)丙二腈。本发明检测CN??的方法:在乙醇中,通过荧光分光光度计定量检测CN??的含量。该方法选择性好、灵敏度高、检测过程简便、快速,可以实现定量检测。

    权利要求书

    1.一种CN-检测试剂,特征在于,其是(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲
    基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈,结构式为:

    2.如权利要求1所述的一种检测CN-试剂的合成方法,其特征在于,步骤为:
    (1)将异佛尔酮和丙二腈等摩尔溶解于无水乙醇中,加入1/100摩尔当量的哌啶于50-
    55℃加热搅拌10-12h。冷却到室温,倒入水中,有大量棕黄色固体析出,抽滤、洗涤、干燥;
    (2)将等摩尔的对羟基苯甲醛和2-(3,5,5-三羟基环己烷-2-烯亚基)完全溶解于乙醇
    中,于60-65℃加热搅拌20-24h,减压蒸馏,硅胶柱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚=
    1:4)得到橘色固体即为(E)-2(3-(4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环己烯基-1-亚基)丙
    二腈;
    (3)将(E)-2(3-(4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环己烯基-1-亚基)丙二腈、F3COOH、
    六亚甲基四胺按摩尔比1:0.07:2回流至反应完全,加入220摩尔当量的盐酸回流1-2h,用二
    氯甲烷萃取,收集有机层,减压蒸馏,柱色谱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚=1:5)得
    到黄色固体即为检测CN-试剂。
    3.一种检测CN-的方法,其特征在于,步骤为:
    (1)、配制2mM的(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯基-1-
    亚基)丙二腈的乙醇溶液;
    (2)、将2000μL的乙醇和5μL(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环
    乙烯基-1-亚基)丙二腈的乙醇溶液加到一个荧光比色皿中,在荧光分光光度仪上检测,随
    着待测样的加入,616nm的荧光强度逐渐减弱,而657nm处的荧光则逐渐增强;
    (3)、将2000μL的乙醇溶液和5μL(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-
    2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈的乙醇溶液加到另外7个荧光比色皿中,分别再加入体积为10、
    20、30、40、50、60、70μL的CN-溶液,在荧光分光光度仪上测定616nm对应的荧光强度I616为
    1003、902、855、812、762、715、663;在657nm处对应的荧光强度I657为704、772、844、895、938、
    1046、1115;以CN-浓度为横坐标,以相对荧光强度I657/I616为纵坐标绘制图,得到CN-浓度的
    工作曲线;线性回归方程为I657/I616=0.0189c+0.03985,c的单位为μM;
    (4)、将2000μL乙醇溶液和5μL的(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-
    2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈的乙醇溶液加到荧光比色皿中,用微量进样器吸取VμL待测样
    品溶液,加入到此荧光比色皿中,在荧光分光光度仪上检测,将测得的荧光强度代入步骤
    (3)的线性回归方程,得到浓度c,待测样品C待测样=2000μL×c×10-6/VμL,即可求得CN-的浓
    度。

    说明书

    一种CN-检测试剂及其合成方法和应用

    技术领域

    本发明涉及CN-的检测技术,具体涉及一种CN-检测试剂及其合成方法,以及将该检
    测试剂用于定量检测CN-。

    背景技术

    氰化物阴离子是哺乳动物中最致命的毒药之一,然而,它被广泛应用于工业生产
    过程中。大量残余的氰化物通常进入环境,包括土壤、植物和河流,这被认为是造成严重的
    健康问题。在活细胞中,氰化物结合血红素单位的Fe3+和影响氧气供应。另外,氰化物可以引
    起无氧代谢,导致血液中的乳酸含量急剧增加。正是由于这种阴离子对人体有着致命的危
    害,因此在食品、饮料及空气中的量应该被严格控制。因此,开发设计一种检测细胞内氰根
    浓度的分析方法具有重要的意义。

    到目前为止,已经有很多方法用来检测体内及体外氰根的浓度,如:毛细管电泳
    法、色谱分析法及荧光探针。其中,小分子荧光探针检测由于其具有高灵敏度、高选择性、非
    侵入性、操作简便及实时成像的特征已被视为是最有前景的检测技术?;诖朔⒄挂恢旨?br />测过程简单、灵敏、成本低、适合临床、科研使用的检测CN-的方法非常必要。

    发明内容:

    本发明的目的是提供一种CN-检测试剂及其合成方法,以及将该检测试剂用于定
    量检测CN-,而且检测时,选择性高、灵敏度高、速度快,可以实现定量检测。

    本发明提供的一种检测试剂是(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲
    基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈,英文名(E)-2-(3-(3-formyl-4-hydroxystyryl)-5,5-
    dimethylcyclohex-2-en-1-ylidene)malononitrile,结构式为:


    一种CN-检测试剂(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯
    基-1-亚基)丙二腈的合成方法,步骤为:

    (1)将异佛尔酮和丙二腈等摩尔溶解于无水乙醇中,加入1/100摩尔当量的哌啶于
    50-55℃加热搅拌10-12h。冷却到室温,倒入水中,有大量棕黄色固体析出,抽滤、洗涤、干
    燥;

    (2)将等摩尔的对羟基苯甲醛和2-(3,5,5-三羟基环己烷-2-烯亚基)完全溶解于
    乙醇中,于60-65℃加热搅拌20-24h,减压蒸馏,硅胶柱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯:石油
    醚=1:4)得到橘色固体即为(E)-2(3-(4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环己烯基-1-亚
    基)丙二腈;

    (3)将(E)-2(3-(4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环己烯基-1-亚基)丙二腈、
    F3COOH、六亚甲基四胺按摩尔比1:0.07:2回流至反应完全,加入220摩尔当量的盐酸回流1-
    2h,用二氯甲烷萃取,收集有机层,减压蒸馏,柱色谱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚
    =1:5)得到黄色固体即为检测CN-试剂(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲
    基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈。

    本发明提供的一种快速检测CN-的方法,是基于(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙
    烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈化合物,在乙醇溶液中定量地检测CN-的含
    量,具体步骤为:

    (1)、配制2mM的(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯
    基-1-亚基)丙二腈的乙醇溶液;

    (2)、将2000μL的乙醇和5μL(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-
    2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈的乙醇溶液加到一个荧光比色皿中,在荧光分光光度仪上检
    测,随着待测样的加入,616nm的荧光强度逐渐减弱,而657nm处的荧光则逐渐增强;

    (3)、将2000μL的乙醇溶液和5μL(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二
    甲基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈的乙醇溶液加到另外7个荧光比色皿中,分别再加入体积
    为10、20、30、40、50、60、70μL的CN-溶液,在荧光分光光度仪上测定616nm对应的荧光强度
    I616为1003、902、855、812、762、715、663;在657nm处对应的荧光强度I657为704、772、844、
    895、938、1046、1115;以CN-浓度为横坐标,以相对荧光强度I657/I616为纵坐标绘制图,得到
    CN-浓度的工作曲线;线性回归方程为I657/I616=0.0189c+0.03985,c的单位为μM;

    (4)、将2000μL乙醇溶液和5μL的(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二
    甲基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈的乙醇溶液加到荧光比色皿中,用微量进样器吸取VμL待
    测样品溶液,加入到此荧光比色皿中,在荧光分光光度仪上检测,将测得的荧光强度代入步
    骤(3)的线性回归方程,得到浓度c,待测样品C待测样=2000μL×c×10-6/VμL,即可求得CN-的
    浓度。

    该检测方法对CN-显示了高的灵敏性和选择性,检测过程简便、快速,检测结果准
    确。

    与现有技术相比,本发明具有如下优点和效果:1、检测体系成本低廉,合成简单;
    2、本发明的检测方法,对CN-显示了高的灵敏性和选择性;3、检测手段简单,只需要借助荧
    光分光光度仪即可实现。

    附图说明:

    图1实施例1制备的CN-检测试剂的核磁氢谱图

    图2实施例1制备的CN-检测试剂的核磁碳谱图

    图3实施例1制备的CN-检测试剂的质谱图

    图4实施例2制备的CN-检测试剂与CN-作用的荧光发射图

    图5实施例3CN-检测试剂与各种分析物的荧光柱状图

    图6实施例4测定CN-的工作曲线

    图7测定样品的荧光发射图

    具体实施方式:

    实施例1(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯基-1-亚
    基)丙二腈化合物的制备及表征

    将异佛尔酮(3.8g,27.6mmol)和丙二腈(1.82g,27.6mmol)完全溶解于80毫升无水
    乙醇中,加入几滴哌啶(23mg,0.276mmol)于50℃加热搅拌10h。冷却到室温,倒入水中,有大
    量棕黄色固体析出,抽滤、洗涤、干燥,产率85%;

    将对羟基苯甲醛(0.61g,5mmol)和2-(3,5,5-三羟基环己烷-2-烯基)(0.93g,
    5mmol)完全溶解于60mL乙醇中,于60℃加热搅拌20h,减压蒸馏,硅胶柱层析纯化(乙酸乙
    酯:石油醚=1:4)得到橘色固体即为(E)-2(3-(4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环己烯
    基-1-亚基)丙二腈;

    将(E)-2(3-(4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环己烯基-1-亚基)丙二腈(0.29g,
    1mmol)、F3COOH(5mL)和六亚甲基四胺(2mmol)在100℃回流3h反应完全,加入1mol/L的盐酸
    (8mL)100℃下回流1h。用二氯甲烷萃取,收集有机层,减压蒸馏和柱色谱层析纯化(乙酸乙
    酯:石油醚=1:5)分离得到黄色固体,即得到(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-
    二甲基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈。

    1H NMR(600MHz,25℃,DMSO-d6):δ11.16(s,1H),10.22(s,H)7.96(s,H),7.87(s,
    H),7.30(d,2H),7.02(s,H,),6.86(s,H),2.539(d,2H),1.01(m,6H)(图1);13C NMR(150MHz,
    DMSO-d6):δ189.97,169.64,161.08,155.45,136.04,134.44,128.09,127.31,126.98,
    121.96,121.52,117.31,113.25,112.42,75.01,41.62,39.68,37.49,26.75(图2);
    calcd.for C20H18N2O2[M+1]+:319.14,found 319.14(图3)。

    实施例2

    用乙醇配制2mM(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯
    基-1-亚基)丙二腈的溶液;把2mL的乙醇溶液及5μL试剂的乙醇溶液加到荧光比色皿中,取
    CN-的溶液,逐渐用微量进样器加到此比色皿中,边加样边在荧光分光光度仪上检测,随着
    CN-的加入,616nm处荧光强度逐渐减弱,而657nm处的荧光则逐渐增强。荧光发射图(见图
    4)。

    实施例3

    用乙醇配制2mM的(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯
    基-1-亚基)丙二腈溶液;在13个荧光比色皿中,各加入2mL的乙醇溶液和5μL的(E)-2-(3-
    (3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈的乙醇溶液,再分
    别加入14摩尔当量CN-,以及100摩尔当量的各种分析物:在荧光分光光度仪上检测,绘制不
    同分析物对应的I657/I616处的相对荧光强度的柱状图,(见图5)。CN-使得(E)-2-(3-(3-甲酸
    基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈的荧光发生比率型的变化,
    其它的分析物基本没有引起(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙
    烯基-1-亚基)丙二腈荧光强度的变化。

    经实验证明,其它分析物不干扰体系对CN-的测定。

    实施例4

    用乙醇配制2mM的(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯
    基-1-亚基)丙二腈溶液,用蒸馏水配制2mM的CN-溶液;把2mL的乙醇溶液和5μL的(E)-2-(3-
    (3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈的乙醇溶液加到荧
    光比色皿中,分别再加入CN-溶液的体积为10、20、30、40、50、60、70μL时,在荧光分光光度仪
    上测定616nm对应的荧光强度F为1003、902、855、812、762、715、663;在657nm处对应的荧光
    强度F为704、772、844、895、938、1046、1115;以CN-浓度为横坐标,以相对荧光强度I657/I616
    为纵坐标绘制图,得到CN-浓度的工作曲线(见图6);线性回归方程为I657/I616=0.0189c+
    0.03985;c的单位为μM;

    实施例5

    配制2mM的CN-水溶液,并用乙醇配制2mM的(E)-2-(3-(3-甲酸基-4-氢氧苯乙烯
    基)-5,5-二甲基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈溶液;把2mL乙醇溶液和5μL的(E)-2-(3-(3-
    甲酸基-4-氢氧苯乙烯基)-5,5-二甲基-2-环乙烯基-1-亚基)丙二腈的乙醇溶液加到荧光
    比色皿中,取CN-的溶液38μL,用微量进样器加到此比色皿中,同时在荧光光谱仪上测定
    616nm的对应的荧光强度I616为823,657nm处对应的荧光强度I657则为906。通过实施例4的线
    性回归方程,求得c=5.601×10-5mol/L,偏差为0.82%,见图7。

    关 键 词:
    一种 CNSUP SUP 检测 试剂 及其 合成 方法 应用
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    关于本文
    本文标题:一种CNSUP/SUP检测试剂及其合成方法和应用.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-6083028.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03