• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 10
    • 下载费用:30 金币  

    重庆时时彩后二杀两码公式: 一种茶多酚中EC含量的检测方法.pdf

    关 键 词:
    一种 茶多酚中 EC 含量 检测 方法
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    摘要
    申请专利号:

    CN201610726604.3

    申请日:

    2016.08.25

    公开号:

    CN106404935A

    公开日:

    2017.02.15

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20160825|||公开
    IPC分类号: G01N30/02 主分类号: G01N30/02
    申请人: 江苏天晟药业股份有限公司
    发明人: 季浩; 徐娟; 阚建伟; 于燕燕; 孔繁博; 张宇; 闫成亮; 胡亚京
    地址: 212415 江苏省镇江市句容市宝华镇开发区10号
    优先权:
    专利代理机构: 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 代理人: 许丹丹
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201610726604.3

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.03.15|||2017.02.15

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种茶多酚中EC含量的检测方法,包括(1)设定高效液相色谱条件;(2)制备对照品溶液;(3)制备供试品溶液;(4)含量测定;分别取对照品溶液和供试品溶液,注入液相色谱仪,进行高效液相色谱仪的操作,并记录色谱图,然后利用色谱图计算EC的含量。本发明所述检测方法以梯度洗脱方式,能有效地分离开茶多酚中较难分离的EGCG和EC两种主要成分;且该方法简便,灵敏度高,重现性好,样品分离度、对称性及峰形均较好,且保留时间适中,更加适合于常规检测,可有效用于EC含量的检测和质量控制。

    权利要求书

    1.一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
    (1)设定高效液相色谱条件:色谱柱为C18,以浓度为0.1%-0.2%的乙酸水溶液为流动
    相A,以乙腈为流动相B,洗脱方式为梯度洗脱,流速为0.8-1.2mL·min-1,柱温为20-40℃,检
    测波长为275-281nm,进样量10-20μl;所述流动相A和B在液相进行过程中的体积比为(69-
    92):(8-31);
    (2)制备对照品溶液:称取EC对照品,加入流动相A制成溶液,作为对照品溶液;
    (3)制备供试品溶液:称取茶多酚粉末,加入流动相A,超声提取,静置,摇匀,滤过,作为
    供试品溶液;
    (4)含量测定:分别取对照品溶液和供试品溶液,注入液相色谱仪,进行高效液相色谱
    仪的操作,并记录色谱图,然后,利用色谱图计算EC的含量。
    2.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,步骤(1)所述
    流动相A中乙酸的浓度为0.1%。
    3.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,步骤(1)所述
    检测波长为278nm。
    4.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,还包括对EC对
    照品溶液浓度X和峰面积积分值Y进行线性回归的步骤。
    5.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,还包括对高效
    液相色谱仪进行精密度检测的步骤。
    6.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,还包括对供试
    品溶液的稳定性进行检测的步骤。
    7.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,还包括检验EC
    含量的检测方法的重复性的步骤。
    8.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,还包括进行加
    样回收率实验的步骤。
    9.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,还包括进行EC
    定量限测定的步骤。
    10.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,还包括EC检
    测限测定的步骤。

    说明书

    一种茶多酚中EC含量的检测方法

    技术领域

    本发明涉及一种化合物检测方法,具体涉及一种茶多酚中EC含量的检测方法。

    背景技术

    癌症已成为21世纪威胁人类生存的头号杀手,平均每年有600多万人死于各种癌
    症。中国已成为世界癌症高发国之一,每年新增200多万名癌症患者,占全球总数的20%,并
    且每年呈快速增长趋势。临床上目前治疗癌症的药物主要是化学药品,但由于化学药物毒
    性大,在杀死肿瘤细胞的同时也无选择性的杀死白细胞、淋巴细胞等自身免疫细胞,导致各
    种并发症和严重的不良反应,而且疗程长,费用高,在临床使用中有较大的局限性。中药在
    治疗癌症方面有独特的优势,以中药为代表的天然药物具有毒副作用小、作用靶点多样、耐
    受性好等特点,在治疗肿瘤方面越来越受到重视。

    茶多酚,又名抗氧灵、维多酚、防哈灵,是茶叶中所含的一类多羟基类化合物,简称
    TP,主要化学成分为儿茶素类(黄烷醇类)、黄酮及黄酮醇类、花青素类、酚酸及缩酚酸类、聚
    合酚类等化合物的复合体。其中儿茶素类化合物为茶多酚的主体成分,占茶多酚总量的
    65%~80%。儿茶素类化合物主要包括儿茶素(EC)、没食子儿茶素(EGC)、儿茶素没食子酸
    酯(ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)4种物质。研究表明,茶多酚等活性物质具解
    毒和抗辐射作用,能有效地阻止放射性物质侵入骨髓,并可使锶90和钴60迅速排出体外,被
    健康及医学界誉为“辐射克星”。

    EC为茶多酚中的主要的组成成分之一,本发明的发明者研究发现,目前尚未有有
    效的检测方法对其进行质量控制,研究及开发一种适合于常规检测EC含量的检测方法则显
    得尤为重要。

    发明内容

    发明目的:针对现有技术中存在的问题,本发明提供了一种茶多酚中EC含量的检
    测方法,该方法操作简单,具有良好的精密度、重现性和可靠性,可用于EC含量的检测和质
    量控制。

    技术方案:为了实现上述目的一种茶多酚中EC含量的检测方法,其特征在于,包括
    以下步骤:

    (1)设定高效液相色谱条件:色谱柱为C18,以浓度为0.1%-0.2%的乙酸水溶液为
    流动相A,以乙腈为流动相B,洗脱方式为梯度洗脱,流速为0.8-1.2mL·min-1,柱温为20-40
    ℃,检测波长为275-281nm,进样量10-20μl;所述流动相A和B在液相进行过程中的体积比为
    (69-92):(8-31);

    (2)制备对照品溶液:称取EC对照品,加入流动相A制成溶液,作为对照品溶液;

    (3)制备供试品溶液:称取茶多酚粉末,加入流动相A,超声提取,静置,摇匀,滤过,
    作为供试品溶液;

    (4)含量测定:分别取对照品溶液和供试品溶液,注入液相色谱仪,进行高效液相
    色谱仪的操作,并记录色谱图,然后,利用色谱图计算EC的含量。

    作为优选,步骤(1)所述流动相A中乙酸的浓度为0.1%。

    作为优选,步骤(1)所述检测波长为278nm。

    作为优选,步骤(1)所述流速为1.00mL·min-1,柱温为35℃,进样量20μl。

    作为优选,所述流动相A和B在液相进行过程中0分钟开始的体积比为92:8;25分钟
    开始为69:31;35分钟开始后为92:8。

    所述检测方法,还包括对EC对照品溶液浓度X和峰面积积分值Y进行线性回归的步
    骤;所述步骤为制备不同浓度的对照品溶液按上述色谱条件进行测定,得到不同的峰面积
    积分值,以峰面积积分值(Y)和对照品溶液浓度(X)进行线性回归,得回归方程。

    所述检测方法,还包括对高效液相色谱仪进行精密度检测的步骤;所述步骤为将
    制备的对照品溶液,按上述色谱条件连续进样进行测定,得到不同的峰面积积分值,计算
    RSD,分析仪器精密度。

    所述检测方法,还包括对供试品溶液的稳定性进行检测的步骤;所述步骤为制备
    供试品溶液,按上述色谱条件在不同时间分别进样测定,测得不同峰面积积分值,计算RSD,
    分析供试品溶液的稳定性。

    所述检测方法,还包括检验EC含量的检测方法的重复性的步骤;所述步骤为制备
    多份平行供试品溶液,按上述色谱条件分别进样测定,测得不同峰面积积分值,计算RSD,分
    析所述方法重复性。

    所述检测方法,还包括进行加样回收率实验的步骤;所述步骤为取已知含量的EC
    样品,加入相应量的对照品,按上述方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算加样
    回收率。

    所述检测方法,还包括进行EC定量限测定的步骤;所述步骤为将制备的对照品溶
    液稀释测定,测得信噪比10∶1时,分析EC的最低检测浓度。

    所述检测方法,还包括EC检测限测定的步骤;所述步骤为将制备的对照品溶液稀
    释测定,测得信噪比3:1时,分析EC的最低检测浓度。

    有益效果:与现有技术相比,本发明的茶多酚中EC含量的检测方法具有以下优点;
    本发明所述检测方法以梯度洗脱方式,能有效地分离开茶多酚中较难分离的EGCG和EC两种
    主要成分;且该方法简便,灵敏度高,重现性好,样品分离度、对称性及峰形均较好,且保留
    时间适中,更加适合于常规检测,可有效用于EC含量的检测和质量控制。

    附图说明

    图1为EC的结构示意图;

    图2为实施例4EC对照品溶液的高效液相色谱图;

    图3为实施例7EC样品重复性检测的高效液相色谱图;

    图4为某一批次的EC样品的高效液相色谱图;

    图5为另一批次的EC样品的高效液相色谱图。

    具体实施方式

    下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

    实施例1

    检测方法

    (1)设定高效液相色谱条件:色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18:4.6×250mm,
    5um,以浓度为0.1%的乙酸水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,洗脱方式为梯度洗脱,流
    速为1.0mL·min-1,柱温为35℃,检测波长为278nm,进样量20μl,流动相A和B在液相进行过
    程中0分钟开始的体积比为92:8;25分钟开始为69:31;35分钟开始后为92:8;理论板数按EC
    计算应不低于2000。

    (2)制备对照品溶液:称取EC对照品25mg,精密称定,置于50ml容量瓶中,加入流动
    相A,稀释至刻度,摇匀,制成浓度为0.400mg·ml-1的溶液,作为对照品溶液

    (3)制备供试品溶液:称取供试品粉末30mg,置于50ml容量瓶中,加入流动相
    A30ml,超声提取20min,静置,再用流动相A稀释至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,即得
    供试品溶液。

    (4)含量测定:分别取对照品溶液和供试品溶液,注入液相色谱仪,进行高效液相
    色谱仪的操作,并记录色谱图,然后利用色谱图计算EC的含量。

    实施例2

    设定高效液相色谱条件中:以浓度为0.2%的乙酸水溶液为流动相A,以乙腈为流
    动相B,洗脱方式为梯度洗脱,流速为1.2mL·min-1,柱温为40℃,检测波长为281nm,进样量
    15μl。其他步骤与实施例1相同。

    实施例3

    设定高效液相色谱条件中:以浓度为0.15%的乙酸水溶液为流动相A,以乙腈为流
    动相B,洗脱方式为梯度洗脱,流速为0.8mL·min-1,柱温为20℃,检测波长为275nm,进样量
    10μl。其他步骤与实施例1相同。

    实施例4:对EC对照品溶液浓度X和峰面积积分值Y进行线性回归

    精密量取对照品贮备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL,置于10mL容量瓶中,加流动相稀
    释至刻度,摇匀,得到含EC分别为0.004、0.008、0.02、0.04、0.08mg·mL-1的对照品溶液,分
    别精密吸取上述各对照品溶液20μL,按实施例1色谱条件进行测定,分别得到峰面积积分值
    为135112、309673、734238、1478214、2966634,以峰面积积分值(Y)对对照品溶液浓度(X)进
    行线性回归,得回归方程为A=37105X-3222.3(R=0.9999)。

    图2为EC对照品溶液的高效液相色谱图。

    如图2所示:EC检测浓度在0.004-0.080mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的
    线性关系。

    实施例5:对高效液相色谱仪进行精密度检测

    精密吸取浓度为0.400mg·mL-1的对照品溶液20μL,按实施例1色谱条件连续进样6
    次,测定峰面积积分值分别为:15067888、15014204、15056252、15009851、15001185、
    15063647。结果,RSD=0.2%,表明仪器精密度良好。

    实施例6:对供试品溶液的稳定性进行检测

    精密量取同一供试品溶液20μL,分别在0、2、4、6、8、12、24h按实施例1色谱条件进
    样测定,测得峰面积积分值分别为:15023546、15020217、15018955、15000503、15021305、
    15022587、15021849,结果:RSD=0.1%,表明供试品溶液在24h内稳定。

    实施例7:检验EC的含量检测方法的重复性

    称取同一EC样品粉末约30mg,平行6份,精密称定,按实施例1所述方法制备供试品
    溶液,精密吸取20μL,按按实施例1色谱条件测定。图3为EC样品的高效液相色谱图。如图3所
    示:上述平行六份样品,最终测得峰面积积分值分别为:14830292、14930292、14883765、
    14812486、14829659、14873144;结果,RSD=0.3%,表明本发明所述方法重复性较好。

    实施例8:加样回收率实验

    取已知含量的EC样品9份,每份约10mg,精密称定,加入相应量的对照品,按实施例
    1方法制备供试品溶液,按按实施例1色谱条件测定,计算加样回收率,结果见表1。

    表1加样回收率试验结果(n=9)



    实施例9:EC定量限的测定

    将对照品溶液稀释测定,测得信噪比为10∶1时,EC的最低检测浓度为0.13μg·mL
    -1。

    实施例10:EC检测限的测定

    将对照品溶液稀释测定,测得信噪比为3∶1时,EC的最低检测浓度为0.045μg·mL
    -1。

    试验例1:样品含量测定

    取2个不同批次的供试品粉末各约30mg,精密称定,按照实施例1的方法制成供试
    品溶液,分别取供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,按实施例1的色谱条件进行高效液相
    色谱仪的操作,并记录色谱图,然后,利用色谱图计算EC的含量。

    图4为某一批次的EC样品的高效液相色谱图序号为1,批次20160201;图5为另一批
    次的EC样品的高效液相色谱图序号为1,批次20160202。

    根据图4和图5的高效液相色谱图,得到各批次的EC样品含量测定结果如表2所示:

    表2不同批次的EC样品含量测定结果

    序号
    批次
    含量
    1
    20160201
    70.2%
    2
    20160202
    71.5%

    上述EC含量测定方法实现了对EC的质量检测,经过试验表明,该方法线性关系、重
    现性、精密度、稳定性、回收率均较好,且本发明所述方法准确、简便、快捷,能够更有效、全
    面的控制EC的质量。

    关于本文
    本文标题:一种茶多酚中EC含量的检测方法.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-6013943.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
  • 河内5分彩计划软件宝典 大公鸡七星彩旧版 排列三6码复式多少钱 怎么买北京pk10 彩票和值大小单双 分分快三计划稳赚软件 天津时时开奖记录记录 腾讯分分彩组三预测 摇皇上骰子玩法 双色球预测最准确 pk10app做号 好运来计划软件app 485585财神六肖 十分快三计划技巧规律如何找 福彩3d稳赚不赔投注 技巧规律