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    重庆时时彩千位计划: 一种甘油三酯的提取方法.pdf

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    一种 甘油 提取 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201611159983.9

    申请日:

    2016.12.15

    公开号:

    CN106770822A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/06申请日:20161215|||公开
    IPC分类号: G01N30/06 主分类号: G01N30/06
    申请人: 南京财经大学
    发明人: 袁建; 袁翔宇; 何荣; 张斌; 赵腾; 鞠兴荣
    地址: 210000 江苏省南京市栖霞区仙林大学城文苑路3号
    优先权:
    专利代理机构: 南京汇盛专利商标事务所(普通合伙) 32238 代理人: 袁静
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201611159983.9

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明提供一种甘油三酯的提取方法,涉及食品分析领域。该甘油三酯的提取方法,包括将植物油溶于有机溶剂、过滤后采用反相高效制备液相色谱进行分离,获得甘油三酯的步骤。本发明提供的甘油三酯提取方法,简单快速、成本较低,可制备较多品种的甘油三酯。

    权利要求书

    1.一种甘油三酯的提取方法,其特征在于包括将植物油溶于有机溶剂、过滤后采用反
    相高效制备液相色谱进行分离,获得甘油三酯的步骤。
    2.根据权利要求1所述甘油三酯标准品的提取方法,其特征在于所述反相高效制备液
    相色谱中色谱柱是规格为25mm×700mm的C18反相柱,流动相为乙腈和异丙醇,柱温为28-32
    ℃,进样量为1-3mL,流速为24-28mL/min。
    3.根据权利要求2所述甘油三酯的提取方法,其特征在于所述植物油为芝麻油时,采用
    梯度洗脱方法分离,收取各洗脱峰,除去溶剂,得到各甘油三酯;所述梯度洗脱方法如下:0
    ~5min,异丙醇的体积百分含量为38~42%;5~23min,异丙醇的体积百分含量为42~
    46%;23~24min,异丙醇的体积百分含量为46%;24~26min,异丙醇的体积百分含量为46
    ~47%;26~63min,异丙醇的体积百分含量为47%;63~66min,异丙醇的体积百分含量为
    47~51%;66~71min,异丙醇的体积百分含量为51%。
    4.根据权利要求2所述甘油三酯的提取方法,其特征在于所述植物油为大豆油时,采用
    梯度洗脱方法分离,收取各洗脱峰,除去溶剂,得到各甘油三酯;所述梯度洗脱方法如下:0
    ~5min,异丙醇的体积百分含量为40~47%;5~55min,异丙醇的体积百分含量为47%;55
    ~60min,异丙醇的体积百分含量为47~55%;60~65min,异丙醇的体积百分含量为55%;
    65~69min,异丙醇的体积百分含量为55~73%;69~78min,异丙醇的体积百分含量为
    73%。
    5.根据权利要求2所述甘油三酯的提取方法,其特征在于所述植物油为玉米油时,采用
    梯度洗脱方法分离,收取各洗脱峰,除去溶剂,得到各甘油三酯;所述梯度洗脱方法如下:0
    ~5min,异丙醇的体积百分含量为40~47%;5~55min,异丙醇的体积百分含量为47%;
    55min~60min,异丙醇的体积百分含量为47~55%;60~65min,异丙醇的体积百分含量为
    55%;65~70min,异丙醇的体积百分含量为55~80%,70~75min,异丙醇的体积百分含量
    为80%。
    6.根据权利要求2所述甘油三酯的提取方法,其特征在于所述植物油为葵花籽油时,采
    用梯度洗脱方法分离,收取各洗脱峰,除去溶剂,得到各甘油三酯;所述梯度洗脱方法如下:
    0~5min,异丙醇的体积百分含量为40~47%;5~55min,异丙醇的体积百分含量为47%;55
    ~60min,异丙醇的体积百分含量为47~55%;60~65min,异丙醇的体积百分含量为55%;
    65~70min,异丙醇的体积百分含量为55~77%;70~73min,异丙醇的体积百分含量为
    77%。
    7.根据权利要求2所述甘油三酯的提取方法,其特征在于所述植物油为花生油时,采用
    梯度洗脱方法分离,收取各洗脱峰,除去溶剂,得到各甘油三酯;所述梯度洗脱方法如下:0
    ~5min,异丙醇的体积百分含量为40~47%;5~55min,异丙醇的体积百分含量为47%;55
    ~60min,异丙醇的体积百分含量为47~51%;60~68min,异丙醇的体积百分含量为51%;
    68~69min,异丙醇的体积百分含量为51~55%;69~76min,异丙醇的体积百分含量为
    55%;76~77min,异丙醇的体积百分含量为55~58%;77~81min,异丙醇的体积百分含量
    为58%;81~83min,异丙醇的体积百分含量为58~68%;83~89min,异丙醇的体积百分含
    量为68%;89~90min,异丙醇的体积百分含量为68~73%;90~92min,异丙醇的体积百分
    含量为73%。
    8.权利要求1-7之一所述方法提取到的甘油三酯在作为检测植物油脂的标准品方面的
    应用。

    说明书

    一种甘油三酯的提取方法

    技术领域

    本发明涉及食品分析领域,具体涉及一种甘油三酯的提取方法。

    背景技术

    目前,检测甘油三酯常用的方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法等,其中高效
    液相色谱法尤其是反相高效液相色谱法的应用尤为普遍。这些方法对甘油三酯进行定性时
    需要相应的甘油三酯标准品作为对照,而目前市面上商品化的甘油三酯标准品的制备方法
    主要是合成的方法,不但价格昂贵种类也非常有限,这就给甘油三酯的定性来一定的困难。

    发明内容

    本发明的目的是提供一种甘油三酯的提取方法,此方法简单快速、成本较低,可制
    备较多品种的甘油三酯。

    本发明的目的采用如下技术方案实现:

    一种甘油三酯的提取方法,包括将植物油溶于有机溶剂、过滤后采用反相高效制
    备液相色谱进行分离,获得甘油三酯的步骤。

    在本发明中,所述反相高效制备液相色谱中色谱柱是规格为25mm×700mm的C18反
    相柱,流动相为乙腈和异丙醇,柱温为28-32℃,进样量为1-3mL,流速为24-28mL/min。

    在本发明中,当所述植物油为芝麻油时,采用梯度洗脱方法分离,收取各洗脱峰,
    除去溶剂,得到各甘油三酯;所述梯度洗脱方法如下:0~5min,异丙醇的体积百分含量为38
    ~42%;5~23min,异丙醇的体积百分含量为42~46%;23~24min,异丙醇的体积百分含量
    为46%;24~26min,异丙醇的体积百分含量为46~47%;26~63min,异丙醇的体积百分含
    量为47%;63~66min,异丙醇的体积百分含量为47~51%;66~71min,异丙醇的体积百分
    含量为51%。

    在本发明中,当所述植物油为大豆油时,采用梯度洗脱方法分离,收取各洗脱峰,
    除去溶剂,得到各甘油三酯;所述梯度洗脱方法如下:0~5min,异丙醇的体积百分含量为40
    ~47%;5~55min,异丙醇的体积百分含量为47%;55~60min,异丙醇的体积百分含量为47
    ~55%;60~65min,异丙醇的体积百分含量为55%;65~69min,异丙醇的体积百分含量为
    55~73%;69~78min,异丙醇的体积百分含量为73%。

    在本发明中,当所述植物油为玉米油时,采用梯度洗脱方法分离,收取各洗脱峰,
    除去溶剂,得到各甘油三酯;所述梯度洗脱方法如下:0~5min,异丙醇的体积百分含量为40
    ~47%;5~55min,异丙醇的体积百分含量为47%;55min~60min,异丙醇的体积百分含量
    为47~55%;60~65min,异丙醇的体积百分含量为55%;65~70min,异丙醇的体积百分含
    量为55~80%,70~75min,异丙醇的体积百分含量为80%。

    在本发明中,当所述植物油为葵花籽油时,采用梯度洗脱方法分离,收取各洗脱
    峰,除去溶剂,得到各甘油三酯;所述梯度洗脱方法如下:0~5min,异丙醇的体积百分含量
    为40~47%;5~55min,异丙醇的体积百分含量为47%;55~60min,异丙醇的体积百分含量
    为47~55%;60~65min,异丙醇的体积百分含量为55%;65~70min,异丙醇的体积百分含
    量为55~77%;70~73min,异丙醇的体积百分含量为77%。

    在本发明中,当所述植物油为花生油时,采用梯度洗脱方法分离,收取各洗脱峰,
    除去溶剂,得到各甘油三酯;所述梯度洗脱方法如下:0~5min,异丙醇的体积百分含量为40
    ~47%;5~55min,异丙醇的体积百分含量为47%;55~60min,异丙醇的体积百分含量为47
    ~51%;60~68min,异丙醇的体积百分含量为51%;68~69min,异丙醇的体积百分含量为
    51~55%;69~76min,异丙醇的体积百分含量为55%;76~77min,异丙醇的体积百分含量
    为55~58%;77~81min,异丙醇的体积百分含量为58%;81~83min,异丙醇的体积百分含
    量为58~68%;83~89min,异丙醇的体积百分含量为68%;89~90min,异丙醇的体积百分
    含量为68~73%;90~92min,异丙醇的体积百分含量为73%。

    本发明还提供所述方法提取到的甘油三酯在作为检测植物油脂的标准品方面的
    应用。

    本发明甘油三酯的提取方法,是将植物油采用反相高效制备液相色谱法进行分
    离,然后去除溶剂,同时获得多种甘油三酯。本发明方法原料来源于植物油脂,因此其性质
    与植物油脂中的甘油三酯相似,更适于作为植物油脂检测中的标准品。另外,采用本发明方
    法分离的甘油三酯性质与植物油脂相似,可以作进一步研究,例如结构脂质等。此外,此法
    制备甘油三酯简单快速且成本较低。

    附图说明

    图1是实施例一从芝麻油中提取甘油三酯的制备液相色谱图,纵坐标是反相高效
    制备液相分离时各色谱峰的响应信号值。

    图2是实施例二从大豆油中提取甘油三酯的制备液相色谱图。纵坐标是反相高效
    制备液相分离时各色谱峰的响应信号值。

    图3是实施例三从玉米油中提取甘油三酯的制备液相色谱图。纵坐标是反相高效
    制备液相分离时各色谱峰的响应信号值。

    图4是实施例四从葵花籽油中提取甘油三酯的制备液相色谱图。纵坐标是反相高
    效制备液相分离时各色谱峰的响应信号值。

    图5是实施例五从花生油中提取甘油三酯的制备液相色谱图。纵坐标是反相高效
    制备液相分离时各色谱峰的响应信号值。

    具体实施方式

    本发明用于提取甘油三酯的植物油是指通过压榨或浸出方法制备得到的,未添加
    其他物质。

    实施例一

    1.样品的前处理:称取1.0g芝麻油样溶于体积比为3:7的乙腈和异丙醇的混合溶
    剂,然后采用相同溶剂定容至10mL容量瓶中,配制成浓度为100mg/mL的溶液。经0.22μm尼龙
    微孔滤膜过滤后,用进样针吸取2mL手动进样。

    2.采用反相高效制备液相色谱从处理后的芝麻油样中提取甘油三酯:制备液相色
    谱柱是规格为25mm×700mm(内径×长度)的C18反相柱,填料粒径10μm,柱温30℃,流动相为
    乙腈和异丙醇(色谱纯),手动进样,进样量为2mL,流速为26mL/min,采用ELSD蒸发光检测
    器,ELSD参数:漂移管温度50℃,载气流速2.0mL/min,增益为2。反相高效制备液相色谱中采
    用梯度洗脱程序:0~5min,流动相中异丙醇的体积百分含量为38~42%;5~23min,流动相
    中异丙醇的体积百分含量为42~46%;23~24min,流动相中异丙醇的体积百分含量为
    46%;24~26min,流动相中异丙醇的体积百分含量为46~47%;26~63min,流动相中异丙
    醇的体积百分含量为47%;63~66min,流动相中异丙醇的体积百分含量为47~51%;66~
    71min,流动相中异丙醇的体积百分含量为51%。本实施例及以下各实施例的洗脱过程中,
    乙腈与异丙醇的体积百分含量之和为100%。

    3.分别收集各洗脱峰,旋转蒸发除去溶剂,得到各甘油三酯。各甘油三酯的具体名
    称、纯度及保留时间见表1和图1。

    表1从芝麻油中提取到的甘油三酯名称、纯度及保留时间



    注:LLL表示三亚油酸甘油酯;OLL表示2,3-二亚油酸-1-油酸甘油酯;PLL表示2,3-
    二亚油酸-1-棕榈酸甘油酯;LOO表示2,3-二油酸-1-亚油酸甘油酯;PLO表示1-棕榈酸-2-亚
    油酸-3-油酸甘油酯;OOO表示三油酸甘油酯;SOO表示2,3-二油酸-1-硬脂酸甘油酯。

    从图1和表1可以发现,采用本发明方法可以从芝麻油中提取得到7种不同结构的
    甘油三酯,每种甘油三酯均为纯品,可以作为甘油三酯标准品使用。

    各甘油三酯采用高分辨质谱仪检测其结构及纯度:将上述方法收集到的含有各甘
    油三酯的洗脱液通过旋转蒸发仪浓缩至总体积约为2mL,经0.22μm尼龙微孔滤膜过滤后,置
    于2mL进样瓶中,以备检测。高分辨质谱仪检测条件:采用ESI正离子源,TOF-MS采集积累时
    间0.25s,采集范围(m/z)100-1200,离子源温度500℃,电喷雾电压5000V,雾化气压力
    45psi,辅助气压力50psi,气帘气压力35psi,碰撞气体为氮气,去簇电压(DP)80V,碰撞能量
    (CE)35V。

    实例二

    1.样品的前处理:称取1.0g大豆油样溶于体积比为3:7的乙腈和异丙醇的混合溶
    剂,然后采用相同溶剂定容至10mL容量瓶中,配制成浓度为100mg/mL的溶液。经0.22μm尼龙
    微孔滤膜过滤后,用进样针吸取2mL手动进样。

    2.采用反相高效制备液相色谱从处理后的样品中分离提取甘油三酯:制备液相色
    谱柱是规格为25mm×700mm(内径×长度)的C18反相柱,填料粒径10μm,柱温30℃,流动相为
    乙腈和异丙醇(色谱纯),流速为26mL/min,手动进样,进样量为2mL,采用ELSD蒸发光检测
    器,ELSD参数:漂移管温度50℃,载气流速2.0mL/min,增益为2。反相高效制备液相色谱中采
    用梯度洗脱程序:0~5min,流动相中异丙醇的体积百分含量为40~47%;5~55min,流动相
    中异丙醇的体积百分含量为47%;55~60min,流动相中异丙醇的体积百分含量为47~
    55%;60~65min,流动相中异丙醇的体积百分含量为55%;65~69min,流动相中异丙醇的
    体积百分含量为55~73%;69~78min,流动相中异丙醇的体积百分含量为73%。

    3.分别收集各洗脱峰,旋转蒸发除去溶剂,得到各甘油三酯。色谱图如图2,各甘油
    三酯的名称、纯度及保留时间见表2。

    表2从大豆油中分离到的甘油三酯的名称、纯度及保留时间



    注:LLnL表示1,3-二亚油酸-2-亚麻酸甘油酯-;LLL表示三亚油酸甘油酯;OLL表示
    2,3-二亚油酸-1-油酸甘油酯;PLL表示2,3-二亚油酸-1-棕榈酸甘油酯;LOO表示2,3-二油
    酸-1-亚油酸甘油酯;PPL表示1,2-二棕榈酸-3-亚油酸甘油酯;OOO表示三油酸甘油酯;OLS
    表示1-油酸-2-亚油酸-3-硬脂酸甘油酯。

    从图2和表2可以发现,采用本发明方法可以从大豆油中提取得到8种不同结构的
    甘油三酯,每种甘油三酯均为纯品,可以作为甘油三酯标准品使用。

    各甘油三酯采用高分辨质谱仪检测其结构及纯度:具体方法同实施例一。

    实例三

    1.样品的前处理:称取1.0g玉米油样溶于体积比为3:7的乙腈和异丙醇的混合溶
    剂,然后采用相同溶剂定容至10mL容量瓶中,配制成浓度为100mg/mL的溶液。经0.22μm尼龙
    微孔滤膜过滤后,用进样针吸取2mL手动进样。

    2.采用反相高效制备液相色谱从处理后的样品中提取甘油三酯:制备液相色谱柱
    是规格为25mm×700mm(内径×长度)的C18反相柱,填料粒径10μm,柱温30℃,流动相为乙腈
    和异丙醇(色谱纯),流速为26mL/min,手动进样,进样量为2mL,采用ELSD蒸发光检测器,
    ELSD参数:漂移管温度50℃,载气流速2.0mL/min,增益为2。反相高效制备液相色谱中采用
    梯度洗脱程序:0~5min,流动相中异丙醇的体积百分含量为40~47%;5~55min,流动相中
    异丙醇的体积百分含量为47%;55min~60min,流动相中异丙醇的体积百分含量为47~
    55%;60~65min,流动相中异丙醇的体积百分含量为55%;65~70min,流动相中异丙醇的
    体积百分含量为55~80%;70~75min,流动相中异丙醇的体积百分含量为80%。

    3.分别收集各洗脱峰,旋转蒸发除去溶剂,得到各甘油三酯。色谱图如图3,各甘油
    三酯的名称、纯度及保留时间具体如表3所示。

    表3从玉米油中分离到的甘油三酯的名称、纯度及保留时间



    注:LLL表示三亚油酸甘油酯;OLL表示2,3-二亚油酸-1-油酸甘油酯;PLL表示2,3-
    二亚油酸-1-棕榈酸甘油酯;LOO表示2,3-二油酸-1-亚油酸甘油酯;OOO表示三油酸甘油酯;
    POO表示2,3-二油酸-1-棕榈酸甘油酯。

    从图3和表3可以发现,采用本发明方法可以从玉米油中分离得到6种不同结构的
    甘油三酯,每种甘油三酯均为纯品,可以作为甘油三酯标准品使用。

    各甘油三酯采用高分辨质谱仪检测其结构及纯度:具体方法同实施例一。

    实例四

    1.样品的前处理:称取1.0g葵花籽油样溶于体积比为3:7的乙腈和异丙醇的混合
    溶剂,然后采用相同溶剂定容至10mL容量瓶中,配制成浓度为100mg/mL的溶液。经0.22μm尼
    龙微孔滤膜过滤后,用进样针吸取2mL手动进样。

    2.采用反相高效制备液相色谱从处理后的样品中提取甘油三酯:制备液相色谱柱
    是规格为25mm×700mm(内径×长度)的C18反相柱,填料粒径10μm,,柱温30℃,流动相为乙
    腈和异丙醇(色谱纯),流速为26mL/min,手动进样,进样量为2mL,采用ELSD蒸发光检测器,
    ELSD参数:漂移管温度50℃,载气流速2.0mL/min增益为2。反相高效制备液相色谱中采用梯
    度洗脱程序:0~5min,流动相中异丙醇的体积百分含量为40~47%;5~55min,流动相中异
    丙醇的体积百分含量为47%;55~60min,流动相中异丙醇的体积百分含量为47~55%;60
    ~65min,流动相中异丙醇的体积百分含量为55%;65~70min,流动相中异丙醇的体积百分
    含量为55~77%;70~73min,流动相中异丙醇的体积百分含量为77%。

    3.分别收集各洗脱峰,旋转蒸发除去溶剂,得到各甘油三酯。色谱图如图4,各甘油
    三酯的名称、纯度及保留时间具体如表4所示。

    表4从葵花籽油中分离到的甘油三酯的名称、纯度及保留时间



    注:LLL表示三亚油酸甘油酯;OLL表示2,3-二亚油酸-1-油酸甘油酯;PLL表示2,3-
    亚二油酸-1-棕榈酸甘油酯;LOO表示2,3-二油酸-1-亚油酸甘油酯;OOO表示三油酸甘油酯;
    OLS表示1-油酸-2-亚油酸-3-硬脂酸甘油酯。

    从图4和表4可以发现,采用本发明方法可以从葵花籽油中提取得到6种不同结构
    的甘油三酯,每种甘油三酯均为纯品,可以作为甘油三酯标准品使用。

    各甘油三酯采用高分辨质谱仪检测其结构及纯度:具体方法同实施例一。

    实例五

    1.样品的前处理:称取1.0g花生油样溶于体积比为3:7的乙腈和异丙醇的混合溶
    剂,然后采用相同溶剂定容至10mL容量瓶中,配制成浓度为100mg/mL的溶液。经0.22μm尼龙
    微孔滤膜过滤后。

    2.采用反相高效制备液相色谱从处理后的样品中提取甘油三酯:制备液相色谱柱
    是规格为25mm×700mm(内径×长度)的C18反相柱,填料粒径10μm,柱温30℃,流动相为乙腈
    和异丙醇(色谱纯),流速为26mL/min,手动进样,进样量为2mL,采用ELSD蒸发光检测器,
    ELSD参数:漂移管温度50℃,载气流速2.0mL/min,增益为2。反相高效制备液相色谱中采用
    梯度洗脱程序:0~5min,流动相中异丙醇的体积百分含量为40~47%;5~55min,流动相中
    异丙醇的体积百分含量为47%;55~60min,流动相中异丙醇的体积百分含量为47~51%;
    60~68min,流动相中异丙醇的体积百分含量为51%;68~69min,流动相中异丙醇的体积百
    分含量为51~55%;69~76min,流动相中异丙醇的体积百分含量为55%;76~77min,流动
    相中异丙醇的体积百分含量为55~58%;77~81min,流动相中异丙醇的体积百分含量为
    58%;81~83min,流动相中异丙醇的体积百分含量为58~68%;83~89min,流动相中异丙
    醇的体积百分含量为68%;89~90min,流动相中异丙醇的体积百分含量为68~73%;90~
    92min,流动相中异丙醇的体积百分含量为73%。

    3.分别收集各洗脱峰,旋转蒸发除去溶剂,得到各甘油三酯。色谱图如图5,各甘油
    三酯的名称、纯度及保留时间具体见表5。

    表5从花生油中分离到的甘油三酯的名称、纯度及保留时间



    注:LLL表示三亚油酸甘油酯;OLL表示2,3-二亚油酸-1-油酸甘油酯;PLL表示2,3-
    亚二油酸-1-棕榈酸甘油酯;LOO表示2,3-二油酸-1-亚油酸甘油酯;PPL表示1,2-二棕榈酸-
    3-亚油酸甘油酯;OOO表示三油酸甘油酯;POO表示2,3-二油酸-1-棕榈酸甘油酯;BLL表示2,
    3-二亚油酸-1-山嵛酸甘油酯;SLL表示2,3-二亚油酸-1-硬脂酸甘油酯。

    从图5和表5可以发现,采用本发明方法可以从花生油中提取得到9种不同结构的
    甘油三酯,每种甘油三酯均为纯品,可以作为甘油三酯标准品使用。

    各甘油三酯采用高分辨质谱仪检测其结构及纯度:具体方法同实施例一。

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