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    重庆时时彩可以提现: 槐花炭的质量控制方法.pdf

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    槐花 质量 控制 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201611243201.X

    申请日:

    2016.12.29

    公开号:

    CN106770778A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20161229|||公开
    IPC分类号: G01N30/02 主分类号: G01N30/02
    申请人: 南京中医药大学
    发明人: 吴皓
    地址: 210023 江苏省南京市仙林大道138号
    优先权:
    专利代理机构: 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 代理人: 唐循文
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201611243201.X

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    槐花炭的质量控制方法,通过测定槐花炭中黄酮类止血成分Huaicarbon??A/B的含量来控制槐花炭的质量。本发明对槐花炭建立了质量控制方法,该方法提供了利用高效液相色谱法同时测定槐花炭中Huaicarbon??A/B两种止血指标性成分含量的质量控制方法,该质量标准简便,且能更好地控制药品的质量。本发明的质量控制方法,具有较强的专属性和良好的重现性,真正体现体现药品安全有效、质量可控。

    权利要求书

    1.黄酮类止血成分Huaicarbon A和HuaicarbonB在槐花炭质量控制中的应用。
    2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于具体方法为通过测定槐花炭中黄酮类止血
    成分Huaicarbon A和HuaicarbonB的含量来控制槐花炭的质量。
    3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于测定方法为照高效液相法色谱法测定:色谱
    条件:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%甲酸的水溶液为流动相梯度
    洗脱; 检测波长:254nm;梯度洗脱程序:0~10 min,48wt.%甲醇;10~15 min,48wt.%甲醇
    ~60wt.%甲醇;15~30 min,60wt.%甲醇;
    对照品溶液的制备:分别取相同重量的Huaicarbon A、Huaicarbon B对照品各2.0~
    10.0mg,,精密称定,置于10 mL 容量瓶中,用甲醇溶解,并定容至刻度,作为单标母液;精密
    移取Huaicarbon A和HuaicarbonB单标母液混合,体积比5 : 2,并定容至10 mL容量瓶中,
    配制为混标溶液,备用;
    供试品溶液的制备:取槐花炭粉末,0.5~2.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲
    醇20 mL浸泡,称定重量,超声处理30 min,补足减失的重量,滤过,得供试品溶液;
    含量测定:精密吸取对照品及供试品溶液10μL,注入液相色谱仪测定,即得槐花炭中
    Huaicarbon A及Huaicarbon B含量。
    4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于槐花炭中Huaicarbon A含量不低于0.10%,
    Huaicarbon B含量不低于0.03%。

    说明书

    槐花炭的质量控制方法

    技术领域

    本发明涉及中药饮片质量控制领域,具体涉及一种槐花炭的质量控制方法。

    背景技术

    中药制炭后用于止血距今已有两千年的历史,因其功效显著,至今仍广泛用于临
    床?!俺刺看嫘浴弊钤缂窃赜凇督鹭岩苑铰邸?,曰:“烧灰存性,勿令灰过”。宋元时代,开始用
    炒法和煅法来控制存性程度。近现代认为炭药既保存了原药的部分功效,又具有止血及其
    它治疗作用,方可谓之存性?;被ㄌ课夜S弥幸┮?,性凉味苦,入肝和大肠经;主要功
    能清热和凉血止血;善治肠风便血、痔血、尿血、血淋、崩漏、衄血、赤白痢下、风热目赤、痈疽
    疮毒等,止血效果好于生槐花。

    槐花炭临床应用广泛,适用于多种出血症,但目前尚无统一的质量控制方法,难以
    保证其临床疗效的稳定性,所以炭药质量的控制是临床用药的重要保障。有研究认为槐花
    中的槐树皂苷Ⅰ、异鼠李素-3-O-芸香糖苷及芦丁、鞣质是槐花炭中的主要止血成分,且异鼠
    李素-3-O-芸香糖苷的止血作用最优(赵雍,郭静,刘婷等.槐花制炭后新止血成分的药理研
    究[J].中国中药杂志,2010,35(17):2346-2349),但另有研究发现这些成分在加热炮制后
    含量均不同程度下降(王爱芳,华卫国,吴溢敏.槐米炭的炮制研究[J].中国药学杂志,
    1982,10:55.;文献1),此结果与槐花炒炭后止血作用显著增强的变化不一致。故槐花炭由
    于缺少好的质量控制方法,难以保证其临床疗效的稳定性。

    槐花炭加热产物中产生的两种化合物是主要止血成分,并结合NMR和MS数据确定
    其化学结构(见下图),


    被命名为Huaicarbon A和Huaicarbon B(文献1:Chen YQ,Yu HL,Wu H*,Pan YZ,
    Wang KL,Liu LP,Jin YP,Zhang CC.Tracing novel hemostatic compounds from
    heating products of total flavonoids in Flos Sophorae by spectrum-effect
    relationships and column chromatography.

    Journal of separation science,2015,38(10)1691-1699)。

    发明内容

    解决的技术问题:为了解决上述问题,本发明的目的在于提供一种槐花炭的质量
    控制方法。

    技术方案:黄酮类止血成分Huaicarbon A和Huaicarbon B在槐花炭质量控制中的
    应用。

    所述应用的具体方法为,通过测定槐花炭中黄酮类止血成分Huaicarbon A和
    Huaicarbon B的含量来控制槐花炭的质量。

    测定方法为照高效液相法色谱法测定:色谱条件:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅
    胶为填充剂;以甲醇-0.1%甲酸的水溶液为流动相梯度洗脱;检测波长:254nm;梯度洗脱程
    序:0~10min,48wt.%甲醇;10~15min,48wt.%甲醇~60wt.%甲醇;15~30min,60wt.%
    甲醇;对照品溶液的制备:分别取相同重量的Huaicarbon A、Huaicarbon B对照品各2.0~
    10.0mg,,精密称定,置于10mL容量瓶中,用甲醇溶解,并定容至刻度,作为单标母液;精密移
    取Huaicarbon A和Huaicarbon B单标母液混合,体积比5:2,并定容至10mL容量瓶中,配制
    为混标溶液,备用;供试品溶液的制备:取槐花炭粉末,0.5~2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶
    中,精密加甲醇20mL浸泡,称定重量,超声处理30min,补足减失的重量,滤过,得供试品溶
    液;含量测定:精密吸取对照品及供试品溶液10μL,注入液相色谱仪测定,即得槐花炭中
    Huaicarbon A及Huaicarbon B含量。

    槐花炭中Huaicarbon A含量不低于0.10%,Huaicarbon B含量不低于0.03%。

    有益效果:本发明对槐花炭建立了质量控制方法,该方法提供了利用高效液相色
    谱法同时测定槐花炭中Huaicarbon A和Huaicarbon B两种止血指标性成分含量的质量控
    制方法,该质量标准简便,且能更好地控制药品的质量。本发明的质量控制方法,具有较强
    的专属性和良好的重现性,真正体现体现药品安全有效、质量可控。

    附图说明

    图1混合对照品及槐花及其6个炮制品甲醇提取物的HPLC色谱图?;旌隙哉掌?br />(MRS):1、芦??;2、山奈酚-3-O-芸香糖苷;3、异鼠李素-3-O-芸香糖苷;4、槲皮素;5、
    Huaicarbon A;6、Huaicarbon B;7、山奈酚;8、异鼠李素,槐花(FS),槐花250℃炒制8min
    (FSC1)、10min(FSC2)、12min(FSC3)、15min(FSC4),市售槐花炭1(FSCP1)、市售槐花炭2
    (FSCP2)。

    图2为不同批次槐花炭鼠尾出血时间;注:*数据以平均值±SD表示,n=6。与空白
    组比较,*p<0.05,**p<0.01;市售炭品组与相应的自制炭品组比较,##p<0.01。

    具体实施方式

    以下实施例进一步说明本发明的内容,但不应理解为对本发明的限制。在不背离
    本发明精神和实质的情况下,对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换,均属于本发明
    的范围。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

    结合具体实施方式,对本发明进一步说明如下:

    实施例1

    1.两种成分同时测定的含量测定方法为:

    1.1药材、仪器与试剂

    自制的槐花炭(FSC):称取100g槐花(FS)饮片,待锅面温度达到250℃开始投药,不
    断均匀翻炒8min(FSC1)、10min(FSC2)、12min(FSC3)、15min(FSC4),至药物表面呈焦褐色。
    市售的槐花炭1(FSCP1,130430),购自亳州市永刚饮片产有限公司;槐花炭2(FSCP2,
    140920),购自南京海源中药饮片有限公司。

    Waters 2695-2489 PDA高效液相色谱系统;Milli-Q纯水仪;BP211D电子天平(德
    国Sartorius公司);KQ-500DE型医用数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

    分析用对照品:芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山
    奈酚、异鼠李素,纯度均大于98%,购自中国食品药品检定研究院。Huaicarbon A、
    Huaicarbon B(提取纯化依据文献1),纯度大于92%。HPLC用甲醇、乙腈及甲酸均为色谱纯,
    超纯水;其余试剂均为分析纯。

    1.2方法与结果

    1.2.1色谱条件

    Waters 2695-2489 PDA高效液相色谱;色谱柱:Dubhe C18(250mm×4.6mm,5.0μ
    m);流动相:甲醇-0.1%甲酸的水溶液梯度洗脱;流速:1mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL。
    检测波长:254nm。

    梯度洗脱程序:0~10min,48wt.%甲醇;10~15min,48wt.%甲醇~60wt.%甲醇;
    15~30min,60wt.%甲醇。

    1.2.2对照品溶液的制备

    分别取芦丁10mg、山奈酚-3-O-芸香糖苷2.5mg、异鼠李素-3-O-芸香糖苷4mg、槲皮
    素8mg、Huaicarbon A 3mg、Huaicarbon B 3mg、山奈酚3mg、异鼠李素3mg,精密称定,置于
    10mL容量瓶中,用甲醇溶解,并定容至刻度,作为单标母液。取各药物单标溶液,Huaicarbon
    A与Huaicarbon B单标母液混合,体积比5:2,并定容至10mL容量瓶中,配制为混标溶液,备
    用。

    1.2.3供试品溶液的制备

    取槐花炭粉末0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇20mL浸泡,称定重量,
    超声处理30min,补足减失的重量,滤过,得供试品溶液。

    1.2.4线性关系考察

    取1.2.2项下的混合对照品溶液,精密稀释至母液的1/2、1/4、1/8、1/16、1/32,制
    备6个浓度水平的对照品溶液,进样分析,以峰面积和进样浓度建立每个目标分析物的回归
    方程。结果见表1,所有化合物在检测范围内有较好的线性。线性回归分析结果表明标准曲
    线的相关系数值>0.9990。数据呈现良好的重现性。

    1.2.5最低检测限和最低定量限

    取1.2.2项下的混合对照品溶液,加入各药物分析用的起始流动相,稀释成一系列
    浓度由高到低的溶液,取信噪比为(S/N)3及10时的对照品浓度为最低检测限(LOD)和最低
    定量限(LOQ)。结果见表1,LOD值在0.17~0.72μg/mL,LOQ值在0.60~2.5μg/mL。

    表1槐花各标准品的线性回归方程、相关系数、线性范围、最低检测限及最低定量





    1.2.6精密度试验

    精密吸取1.2.2项下的混合对照品溶液10μL,连续进样6次,考察日内精密度,连续
    分析3天,考察日间精密度。用于目标分析物定量的精密度结果见表2,结果显示所有的相对
    标准差(RSD)值不超过5.0%。

    1.2.7稳定性和重复性试验

    精密吸取1.2.3项下制备的供试品溶液适量,于0h、4h、8h、12h、24h及48h测定样
    品,考察定量分析的稳定性。按照1.2.3项下供试品制备的方法制备6份样品,分别进样,考
    察定量分析的重复性。用于目标分析物定量的重复性、稳定性结果见表2,结果显示所有的
    相对标准差(RSD)值不超过5.0%。

    1.2.8加样回收率

    取已知被测成分含量的样品6份,精密称定,分别精密加入一定量的被测成分对照
    品(加入量与所取样品含量之比为1:1),按1.2.3项下的方法制备样品后进样。按回收率
    (%)=(加标样品测定值-样品测定值)/加标量×100%计算回收率。结果见表2,所有待测
    成分的回收率值在95.32%~103.29%范围内,符合要求。

    表2槐花各标准品重复性、稳定性、精密度及加样回收率的测定结果





    1.2.9样品含量测定

    取1.2.2项下各药物的混合对照品溶液及1.2.3项下各药物供试品溶液,进样10μ
    L,各批次槐花炭色谱图见图1将得到的各药物中待测成分的峰面积代入线性方程中计算含
    量,结果见表3。

    表3槐花及槐花炭中黄酮类成分定量分析结果



    从结果可见,生品中含有多种黄酮类成分,炒炭后黄酮苷类均减少,而黄酮苷元增
    加,并且生成了Huaicarbon A和Huaicarbon B?;仆赵醇兄寡饔玫谋ǖ?,而
    Huaicarbon A和Huaicarbon B被认为具有显著的止血作用(见文献1)。

    2.不同批次炭药及huaicarbonA/B的止血作用差异

    2.1分组及给药

    取大鼠42只,随机分为空白组、阳性药组、FSC3组、FSCP1组、FSCP2组、Huaicarbon
    A和Huaicarbon B组,每组6只。按等效给药剂量=临床剂量/60kg×6.3,再折算成生药剂量
    为1.05g/kg,0.5%CMC-Na溶液作空白,云南白药(YNBY)作阳性对照药(0.3g/kg);动物适应
    性饲养一段时间后开始灌胃,一天两次,药物的灌胃给药体积为1.0mL/100g。于第4天灌胃
    后的30min开始指标测定。

    2.2鼠尾出血时间(Bleeding Time,BT)测定

    用1%戊巴比妥钠(40mg/kg,腹腔注射)将大鼠麻醉。先将鼠尾沉浸在37℃生理盐
    水中预温2min,距鼠尾1mm处用干净的手术刀剪断诱导出血。出血时间是从剪断开始出血到
    停止出血所需时间,待血流停止30s为停止出血。

    2.3结果

    由见图2结果显示。与空白组比较,自制的槐花炭3(FSC3)及Huaicarbon A和
    Huaicarbon B能极显著缩短出血时间,说明它们均有止血作用。

    与不含huaicarbon B及huaicarbon A含量极低的市场购买炭品(FSCP2)比较,自
    制炭品(FSC3)及和含huaicarbonA/B市售炭品(FSCP1)的止血作用显著强于FSCP2,因
    Huaicarbon A和Huaicarbon B具有止血作用(文献1),表明Huaicarbon A和Huaicarbon B
    可能是槐花炭的主要止血活性成分,也说明炒炭的炮制工艺会显著影响炭品的体内药效。
    Huaicarbon A和Huaicarbon B的存在与否,将显著影响槐花炭的止血作用。各批次槐花炭
    鼠尾出血时间见图2。

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