• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 7
    • 下载费用:30 金币  

    重庆时时彩外围平台赔率: 一种检测餐具中阿维菌素的检测卡及其检测方法.pdf

    关 键 词:
    一种 检测 餐具 中阿维 菌素 及其 方法
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    摘要
    申请专利号:

    CN201611072105.3

    申请日:

    2016.11.29

    公开号:

    CN106771154A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/558申请日:20161129|||公开
    IPC分类号: G01N33/558 主分类号: G01N33/558
    申请人: 百奥森(江苏)食品安全科技有限公司
    发明人: 周合; 张根义; 张进; 周朱晨; 杨敏; 胡彬; 吴念绮
    地址: 214070 江苏省无锡市滴翠路100号创意园三期A幢303
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201611072105.3

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种检测餐具中阿维菌素的检测卡,包括底板、吸水垫、置物层、引水层和硝酸纤维层,所述底板放置于最下边,底板上的最左边设有吸水垫,吸水垫的右边设有置物层,置物层的右边设有引水层,所述硝酸纤维层设置了底板上的最右端。本发明不仅能够快速的检测餐具中的阿维菌素残信息,而且具有色谱检测方法无法比拟的简单、快速、便于筛查大量样品等优点,是一种在动植物食品或餐具中简单、快速检测阿维菌素药物残留的新型技术,适用于相关检疫检测部门、进出口检疫检测部门及实验室中阿维菌素药物残留的快速检测或大规模筛查,简单、快速、准确,准确率达99%以上,表明本发明检测卡具有很强的实际应用价值,经济和社会效益巨大。

    权利要求书

    1.一种检测餐具中阿维菌素的检测卡,包括底板、吸水垫、置物层、引水层和硝酸纤维
    层,其特征在于,所述底板放置于最下边,底板上的最左边设有吸水垫,吸水垫的右边设有
    置物层,置物层的右边设有引水层,所述硝酸纤维层设置了底板上的最右端,引水层和硝酸
    纤维层的中点位置覆盖有右部覆膜,吸水垫、置物层和硝酸纤维层的中点位置覆盖有左部
    覆膜,硝酸纤维层上自上而下包被有一条抗鼠免疫球蛋白抗体的质控线、一条阿维菌素蛋
    白质偶联物的检测线,置物层上吸附包被有胶体金标记物。
    2.根据权利要求1所述的一种检测餐具中阿维菌素的检测卡,其特征在于,所述底板的
    材质为PVC板,所述吸水垫的材质为引水玻璃纤维,所述置物层的材质为载体玻璃纤维,所
    述引水层的材质为吸水棉浆板。
    3.根据权利要求1所述的一种检测餐具中阿维菌素的检测卡,其特征在于,检测方法
    是:首先将待检测的餐具浸泡在蒸馏水溶液中60min,水样经0.22μm的滤膜过滤,取5.0mL过
    滤水样置于15mL带塞的锥形离心管中,将含有70.0μL三氯甲烷的1.0mL丙酮通过微量进样
    器快速注入离心试管中,然后涡旋10s,混合液从水相被萃取到氯仿溶液中,静置10min,分
    散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管底部,用微量进样器吸取萃取溶剂至10mL离心管
    中,再向过滤水样中加入含有70μL三氯甲烷的1mL丙酮,涡旋10s,静置10min,取下层萃取溶
    剂,合并萃取溶液,氮气吹干,再用50μL甲醇溶解,涡旋30s,作为待检测溶液,将检测卡的吸
    水垫浸没在上述溶液中5min,取出观察。
    4.根据权利要求1所述的一种检测餐具中阿维菌素的检测卡,其特征在于,制备方法
    是,A制备单克隆抗体胶体金标记物:将以体积计的2:1份含有抗阿维菌素蛋白质偶联物单
    克隆抗体的小鼠腹水与2份60mM醋酸缓冲液混合,室温搅拌下逐滴加入辛酸,每1ml小鼠腹
    水加入33μl辛酸,混匀,室温放置30分钟,15000转/分4℃离心20分钟,得上清液,上清液用
    玻璃棉过滤,弃沉淀,过滤后的上清液用NaOH调pH值至7.2,加入硫酸铵,每1mlpH7.2上清液
    加入0.277g硫酸铵,快速使硫酸铵溶解,室温搅拌30分钟,15000转/分4℃离心20分钟,弃上
    清液,得沉淀物,沉淀物用原小鼠腹水1/2体积的0.01M磷酸盐缓冲液溶液溶解,再用0.01M
    磷酸盐缓冲液4℃透析48小时,成单克隆抗体胶体金标记物;B制备胶体金溶液:将蒸馏水煮
    沸4~6分钟,每1000mL蒸馏水中加入质量浓度1%的氯金酸溶液10ml和质量浓度1%的柠檬酸
    三钠溶液15~20ml,搅拌至溶液呈深红色,冷至室温,调pH值至抗阿维菌素蛋白质偶联物单
    克隆抗体的等电点或弱碱性,成抗阿维菌素蛋白质偶联物单克隆抗体预标记的胶体金溶
    液;C制备胶体金标记物:取步骤B制备的胶体金溶液100ml,加入步骤A制备的单克隆抗体胶
    体金标记物1~10μg/ml,搅拌反应2分钟,加入质量浓度10%的牛血清白蛋白,每1ml胶体金
    溶液中加入15μl质量浓度10%的牛血清白蛋白,4℃下15000转/分离心40分钟,弃上清,得沉
    淀,沉淀用PBS稀释至原胶体金溶液体积的30%~40%,成胶体金标记物,D、固化胶体金标记
    物:在载体玻璃纤维层上吸附包被胶体金标记物,干燥,将胶体金标记物固化在载体玻璃纤
    维层上,E、包被膜制备:取抗鼠免疫球蛋白抗体、阿维菌素蛋白质偶联物,分别包被于硝酸
    纤维层上,自上而下形成包被的一条抗鼠免疫球蛋白抗体的质控线、一条阿维菌素蛋白质
    偶联物的检测线,其中,抗鼠免疫球蛋白抗体包被浓度为0.5~5mg/ml,阿维菌素蛋白质偶
    联物包被浓度为0.05~2mg/ml;F、切割:将包括吸附有胶体金标记物的载体玻璃纤维层、包
    被抗鼠免疫球蛋白抗体、阿维菌素蛋白质偶联物的硝酸纤维层后的试纸条载体切割成长
    条,即成本发明试纸条。

    说明书

    一种检测餐具中阿维菌素的检测卡及其检测方法

    技术领域

    本发明涉及一种检测卡,具体是一种检测餐具中阿维菌素的检测卡及其检测方
    法。

    背景技术

    阿维菌素作为一种十六元大环内酯新型杀虫剂,由链霉菌中阿维链霉菌发酵产
    生,因化学结构新颖、作用机制独特(干扰虫体的神经生理活动,刺激释放γ-氨基丁酸,从
    而抑制节肢动物的神经传导)、杀虫活性强,具有广谱、高效、持效、相对安全等特点,符合现
    代生态农药要求,被广泛用于体内外各种线虫,节肢动物类寄生虫和昆虫等的驱杀。目前全
    球正大面积推广使用阿维菌素产品。但随着害虫抗性提高,阿维菌素用药量不断增加,对环
    境及人类、动植物危害也日益显现,主要表现为田间土壤的药物残留、人和动物中枢和外周
    神经症状,如震颤、共济失调、精神抑郁、高度昏迷乃至死亡,并产生胚胎毒性。按世界卫生
    组织(WTO)5级分类标准,将其列为高毒化合物。

    鉴于此,食品及餐具产品中阿维菌素药物残留检测成为国家重点监控指标,阿维
    菌素残留检测方法也成为重点研究内容。目前,关于阿维菌素残留检测方法主要为色谱检
    测法和免疫检测法,色谱检测法有薄层色谱法、液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等,这些
    检测方法存在样品前处理复杂、需要专业操作人员、需要昂贵仪器花费较高等不足,常用于
    阿维菌素药物残留的确证分析;在现有技术中,对于阿维菌素的检测已经做出了大量的研
    究,包括有检测阿维菌素的试剂盒、试剂盒的制备方法以及采用试剂盒进行检测阿维菌素
    的方法。但是,在现有技术中,普遍采用的阿维菌素的检测方法有:薄层色谱法(TLC),气相
    色谱法(GC),高效液相色谱法(HPLC),气-质联机(GC/MS),液-质联机(HPLC/MS),毛细管电
    泳(CE)等。用上述方法检测存在着仪器设备复杂、样本前处理和测定操作烦琐的缺陷,不适
    合现场监控和大量样本筛查,而且费用高昂,使其推广使用受到限制。

    阿维菌素检测卡即是在胶体金免疫层析技术基础上融合现代单克隆抗体技术、新
    材料技术建立的一种简单、快速、经济的免疫检测方法,该检测试纸条操作较酶联免疫法更
    简单、快速、更易判断结果,是又一种新型、经济、环保的检测阿维菌素的技术方法。目前阿
    维菌素胶体金检测试纸条在国内外尚为空白。

    发明内容

    本发明的目的在于提供一种检测餐具中阿维菌素的检测卡及其检测方法,以解决
    上述背景技术中提出的问题。

    为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:

    一种检测餐具中阿维菌素的检测卡,包括底板、吸水垫、置物层、引水层和硝酸纤维层,
    所述底板放置于最下边,底板上的最左边设有吸水垫,吸水垫的右边设有置物层,置物层的
    右边设有引水层,所述硝酸纤维层设置了底板上的最右端,引水层和硝酸纤维层的中点位
    置覆盖有右部覆膜,吸水垫、置物层和硝酸纤维层的中点位置覆盖有左部覆膜,硝酸纤维层
    上自上而下包被有一条抗鼠免疫球蛋白抗体的质控线、一条阿维菌素蛋白质偶联物的检测
    线,置物层上吸附包被有胶体金标记物。

    作为本发明进一步的方案:所述底板的材质为PVC板,所述吸水垫的材质为引水玻
    璃纤维,所述置物层的材质为载体玻璃纤维,所述引水层的材质为吸水棉浆板。

    作为本发明进一步的方案:检测方法是:首先将待检测的餐具浸泡在蒸馏水溶液
    中60min,水样经0.22μm的滤膜过滤,取5.0mL过滤水样置于15mL带塞的锥形离心管中,将含
    有70.0μL三氯甲烷的1.0mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中,然后涡旋10s,混合
    液从水相被萃取到氯仿溶液中,静置10min,分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管底
    部,用微量进样器吸取萃取溶剂至10mL离心管中,再向过滤水样中加入含有70μL三氯甲烷
    的1mL丙酮,涡旋10s,静置10min,取下层萃取溶剂,合并萃取溶液,氮气吹干,再用50μL甲醇
    溶解,涡旋30s,作为待检测溶液,将检测卡的吸水垫浸没在上述溶液中5min,取出观察。

    作为本发明再进一步的方案:所述的大环内脂类抗生素检测线与所述的β-内酰胺
    抗生素检测线并排、所述的氧氟沙星类抗生素检测线与所述的喹诺酮类抗生素检测线并
    排、所述的磺胺类抗生素检测线与所述的头孢类抗生素检测线并排。

    作为本发明再进一步的方案:制备方法是,A制备单克隆抗体胶体金标记物:将以
    体积计的2:1份含有抗阿维菌素蛋白质偶联物单克隆抗体的小鼠腹水与2份60mM醋酸缓冲
    液混合,室温搅拌下逐滴加入辛酸,每1ml小鼠腹水加入33μl辛酸,混匀,室温放置30分钟,
    15000转/分4℃离心20分钟,得上清液,上清液用玻璃棉过滤,弃沉淀,过滤后的上清液用
    NaOH调pH值至7.2,加入硫酸铵,每1mlpH7.2上清液加入0.277g硫酸铵,快速使硫酸铵溶解,
    室温搅拌30分钟,15000转/分4℃离心20分钟,弃上清液,得沉淀物,沉淀物用原小鼠腹水1/
    2体积的0.01M磷酸盐缓冲液溶液溶解,再用0.01M磷酸盐缓冲液4℃透析48小时,成单克隆
    抗体胶体金标记物;B制备胶体金溶液:将蒸馏水煮沸4~6分钟,每1000mL蒸馏水中加入质
    量浓度1%的氯金酸溶液10ml和质量浓度1%的柠檬酸三钠溶液15~20ml,搅拌至溶液呈深红
    色,冷至室温,调pH值至抗阿维菌素蛋白质偶联物单克隆抗体的等电点或弱碱性,成抗阿维
    菌素蛋白质偶联物单克隆抗体预标记的胶体金溶液;C制备胶体金标记物:取步骤B制备的
    胶体金溶液100ml,加入步骤A制备的单克隆抗体胶体金标记物1~10μg/ml,搅拌反应2分
    钟,加入质量浓度10%的牛血清白蛋白,每1ml胶体金溶液中加入15μl质量浓度10%的牛血清
    白蛋白,4℃下15000转/分离心40分钟,弃上清,得沉淀,沉淀用PBS稀释至原胶体金溶液体
    积的30%~40%,成胶体金标记物,D、固化胶体金标记物:在载体玻璃纤维层上吸附包被胶体
    金标记物,干燥,将胶体金标记物固化在载体玻璃纤维层上,E、包被膜制备:取抗鼠免疫球
    蛋白抗体、阿维菌素蛋白质偶联物,分别包被于硝酸纤维层上,自上而下形成包被的一条抗
    鼠免疫球蛋白抗体的质控线、一条阿维菌素蛋白质偶联物的检测线,其中,抗鼠免疫球蛋白
    抗体包被浓度为0.5~5mg/ml,阿维菌素蛋白质偶联物包被浓度为0.05~2mg/ml;F、切割:
    将包括吸附有胶体金标记物的载体玻璃纤维层、包被抗鼠免疫球蛋白抗体、阿维菌素蛋白
    质偶联物的硝酸纤维层后的试纸条载体切割成长条,即成本发明试纸条。

    与现有技术相比,本发明的有益效果是:本发明不仅能够快速的检测餐具中的阿
    维菌素残信息,而且具有色谱检测方法无法比拟的简单、快速、便于筛查大量样品等优点,
    是一种在动植物食品或餐具中简单、快速检测阿维菌素药物残留的新型技术,适用于相关
    检疫检测部门、进出口检疫检测部门及实验室中阿维菌素药物残留的快速检测或大规模筛
    查,简单、快速、准确,准确率达99%以上,表明本发明检测卡具有很强的实际应用价值,经济
    和社会效益巨大。

    附图说明

    图1是本发明的整体结构图。

    具体实施方式

    下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。

    请参阅图1,一种检测餐具中阿维菌素的检测卡,包括底板、吸水垫、置物层、引水
    层和硝酸纤维层,所述底板放置于最下边,底板上的最左边设有吸水垫,吸水垫的右边设有
    置物层,置物层的右边设有引水层,所述硝酸纤维层设置了底板上的最右端,引水层和硝酸
    纤维层的中点位置覆盖有右部覆膜,吸水垫、置物层和硝酸纤维层的中点位置覆盖有左部
    覆膜,硝酸纤维层上自上而下包被有一条抗鼠免疫球蛋白抗体的质控线、一条阿维菌素蛋
    白质偶联物的检测线,置物层上吸附包被有胶体金标记物。

    底板的材质为PVC板,所述吸水垫的材质为引水玻璃纤维,所述置物层的材质为载
    体玻璃纤维,所述引水层的材质为吸水棉浆板。

    检测方法是:首先将待检测的餐具浸泡在蒸馏水溶液中60min,水样经0.22μm的滤
    膜过滤,取5.0mL过滤水样置于15mL带塞的锥形离心管中,将含有70.0μL三氯甲烷的1.0mL
    丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中,然后涡旋10s,混合液从水相被萃取到氯仿溶液
    中,静置10min,分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管底部,用微量进样器吸取萃取溶
    剂至10mL离心管中,再向过滤水样中加入含有70μL三氯甲烷的1mL丙酮,涡旋10s,静置
    10min,取下层萃取溶剂,合并萃取溶液,氮气吹干,再用50μL甲醇溶解,涡旋30s,作为待检
    测溶液,将检测卡的吸水垫浸没在上述溶液中5min,取出观察。

    大环内脂类抗生素检测线与所述的β-内酰胺抗生素检测线并排、所述的氧氟沙星
    类抗生素检测线与所述的喹诺酮类抗生素检测线并排、所述的磺胺类抗生素检测线与所述
    的头孢类抗生素检测线并排。

    制备方法是,A制备单克隆抗体胶体金标记物:将以体积计的2:1份含有抗阿维菌
    素蛋白质偶联物单克隆抗体的小鼠腹水与2份60mM醋酸缓冲液混合,室温搅拌下逐滴加入
    辛酸,每1ml小鼠腹水加入33μl辛酸,混匀,室温放置30分钟,15000转/分4℃离心20分钟,得
    上清液,上清液用玻璃棉过滤,弃沉淀,过滤后的上清液用NaOH调pH值至7.2,加入硫酸铵,
    每1mlpH7.2上清液加入0.277g硫酸铵,快速使硫酸铵溶解,室温搅拌30分钟,15000转/分4
    ℃离心20分钟,弃上清液,得沉淀物,沉淀物用原小鼠腹水1/2体积的0.01M磷酸盐缓冲液溶
    液溶解,再用0.01M磷酸盐缓冲液4℃透析48小时,成单克隆抗体胶体金标记物;B制备胶体
    金溶液:将蒸馏水煮沸4~6分钟,每1000mL蒸馏水中加入质量浓度1%的氯金酸溶液10ml和
    质量浓度1%的柠檬酸三钠溶液15~20ml,搅拌至溶液呈深红色,冷至室温,调pH值至抗阿维
    菌素蛋白质偶联物单克隆抗体的等电点或弱碱性,成抗阿维菌素蛋白质偶联物单克隆抗体
    预标记的胶体金溶液;C制备胶体金标记物:取步骤B制备的胶体金溶液100ml,加入步骤A制
    备的单克隆抗体胶体金标记物1~10μg/ml,搅拌反应2分钟,加入质量浓度10%的牛血清白
    蛋白,每1ml胶体金溶液中加入15μl质量浓度10%的牛血清白蛋白,4℃下15000转/分离心40
    分钟,弃上清,得沉淀,沉淀用PBS稀释至原胶体金溶液体积的30%~40%,成胶体金标记物,
    D、固化胶体金标记物:在载体玻璃纤维层上吸附包被胶体金标记物,干燥,将胶体金标记物
    固化在载体玻璃纤维层上,E、包被膜制备:取抗鼠免疫球蛋白抗体、阿维菌素蛋白质偶联
    物,分别包被于硝酸纤维层上,自上而下形成包被的一条抗鼠免疫球蛋白抗体的质控线、一
    条阿维菌素蛋白质偶联物的检测线,其中,抗鼠免疫球蛋白抗体包被浓度为0.5~5mg/ml,
    阿维菌素蛋白质偶联物包被浓度为0.05~2mg/ml;F、切割:将包括吸附有胶体金标记物的
    载体玻璃纤维层、包被抗鼠免疫球蛋白抗体、阿维菌素蛋白质偶联物的硝酸纤维层后的试
    纸条载体切割成长条,即成本发明试纸条。

    本发明的工作原理是:本发明不仅能够快速的检测餐具中的阿维菌素残信息,而
    且具有色谱检测方法无法比拟的简单、快速、便于筛查大量样品等优点,是一种在动植物食
    品或土壤中简单、快速检测阿维菌素药物残留的新型技术,适用于相关检疫检测部门、进出
    口检疫检测部门及实验室中阿维菌素药物残留的快速检测或大规模筛查,简单、快速、准
    确,经对58批杀虫药物和38处田地土壤进行检测,准确率达99%以上,表明本发明试纸条具
    有很强的实际应用价值,经济和社会效益巨大。

    对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在
    不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论
    从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权
    利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有
    变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

    此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包
    含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当
    将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员
    可以理解的其他实施方式。

    关于本文
    本文标题:一种检测餐具中阿维菌素的检测卡及其检测方法.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-6004837.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
  • 究极绿宝石5.0下载 七星彩论坛 ○qka棋牌官方网站下载 打水果老虎机技巧规律 自己加工手镯赚钱吗 北京11选5投注技巧 2019中日女篮决赛 百变王牌近百期走势图 上海时时最快开奖结果记录 ag麻将老虎机怎么赢 四川时时网 87 88年做什么最赚钱 pk10的位置走势怎么看 辉煌彩票窍门 侏罗纪游戏大全下载 必赢客北京pk拾软件