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    重庆时时彩漏洞方法: 一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验方法.pdf

    关 键 词:
    一种 猪瘟 基因工程 单位 疫苗 效力 检验 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201611105766.1

    申请日:

    2016.12.05

    公开号:

    CN106771187A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/569申请日:20161205|||公开
    IPC分类号: G01N33/569 主分类号: G01N33/569
    申请人: 青岛易邦生物工程有限公司
    发明人: 刘蕾; 申洪银; 郭玉广; 邹桂荣; 李金积; 胡潇; 曹志
    地址: 266009 山东省青岛市红岛经济开发区岙东南路21号
    优先权:
    专利代理机构: 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 代理人: 汤东凤
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201611105766.1

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.11.20|||2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明提供一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验方法,猪瘟病毒ELISA抗体为阴性的家兔注射猪瘟基因工程亚单位疫苗(293T??E2)后,免疫一段时间后再注射脾淋源猪瘟活疫苗,?;ぢ蚀锏?00%以上。本发明方法,用家兔进行免疫攻毒和用猪进行免疫攻毒结果是一致的,可替代用猪进行免疫攻毒的检验方法,缩短了检测周期,节约了检测成本,方法可操作性强,结果易于判定,生物安全性高。

    权利要求书

    1.一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验方法,其特征在于,所述的方法包括如下步
    骤:
    1)取健康的易感家兔作为检验对象,按照体重、性别随机分为对照组和免疫组,免疫组
    至少设有2个平行组;
    2)对免疫组家兔进行注射,注射猪瘟基因工程亚单位疫苗,而对照组的家兔不注射任
    何物质;注射疫苗的家兔和对照组的家兔按照正常饲养方式饲养;
    3)步骤2)注射疫苗19日后,免疫组和对照组的家兔每日测温两次;21日后,免疫组和对
    照组的家兔均注射脾淋源猪瘟活疫苗,注射疫苗后每6小时测温一次,共测72小时;
    4)如步骤4)注射脾淋源猪瘟活疫苗前后家兔体温的变化,判定猪瘟基因工程亚单位疫
    苗是否达到?;ぷ饔?,家兔体温变化不超过1℃时判定为达到?;ぷ饔?。
    2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中,所述的易感家兔,为猪瘟病毒
    ELISA抗体为阴性的家兔,体重为1.5-3.0kg。
    3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中,所述的对照组不设平行组;所述的
    免疫组设有平行组,每个平行组设立的家兔只数与对照组相同。
    4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中,所述的猪瘟基因工程亚单位疫苗
    的注射方式为皮下注射,注射部位为家兔的颈部。
    5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中,所述的猪瘟基因工程亚单位疫苗
    的注射剂量为0.2ml/只。
    6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤4)中,所述的脾淋源猪瘟活疫苗的注射
    方式为皮下静脉注射,注射部位为家兔的耳部。
    7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤4)中,所述的脾淋源猪瘟活疫苗的注射
    剂量为1.0ml/只。
    8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤5)中,所述的猪瘟基因工程亚单位疫苗
    免疫兔至少4/5?;?,对照兔全部不?;?。
    9.如权利要求1-8任一项所述的方法,其特征在于,所述的猪瘟基因工程亚单位疫苗为
    293T-E2疫苗。

    说明书

    一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验方法

    技术领域

    本发明属于疫苗检测技术领域,具体涉及一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验
    方法。

    背景技术

    猪瘟(slassical swine fever,CFS)以出血和发热为主要特征,呈急性或慢性经
    过,是一种对猪危害性极大的传染病,被国际兽疫局列为A类动物传染病。目前使用的弱毒
    疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本GPE疫苗和法国的Thireval疫苗。20世纪70年代后
    期,猪瘟的流行形式发生了很大变化。地区散发性流行及非典型猪瘟症状的发生,特别是近
    年来国内外应用单克隆抗体对C-株检测时发现有不同的反应模式,猪瘟免疫屡屡失败等,
    表明猪瘟病毒的抗原性可能存在着变异,从而有人对传统弱毒疫苗提出了质疑。随着传代
    次数的增加和对不同细胞的适应性繁殖,疫苗毒株可能发生异质性或抗原漂移加之数十年
    来CSFV在大规模免疫接种压力下可能出现抗原变异。

    这些情况都表明,现有的传统疫苗已不能适应新形势的需要,研究和开发新型猪
    瘟疫苗机是大势所趋。分子生物学技术的兴起和发展,为新型猪瘟疫苗的研究和开发奠定
    了基础?;蛉笔醵疽呙?、亚单位疫苗和活载体疫苗是目前研究的热点。

    猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗属于灭活疫苗,由于采用靶动物(猪)进行免疫攻
    毒,存在检测周期长(约51天),需要进行强毒(猪瘟病毒石门系)攻击检验,急需建立一种替
    代动物或其他的效力检验方法用于灭活疫苗的效力检验,以解决缩短检测周期,节约检测
    成本,提高生物安全等问题。

    发明内容

    本发所要解决的技术问题是针对现有技术存在的不足,而提供一种猪瘟病毒基因
    工程亚单位疫苗效力检验方法,可替代用猪进行免疫攻毒的效力检验,从而缩短检测周期,
    并减少成本,从而弥补现有亚单位疫苗效力检验的空白。

    为了实现上述技术目的,本发明采用如下技术方案:

    本发明的猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验方法,包括以下步骤:

    1)取健康的易感家兔作为检验对象,按照体重、性别随机分为对照组和免疫组,免
    疫组至少设有2个平行组;

    2)对免疫组家兔进行注射,注射待检测的猪瘟基因工程亚单位疫苗,而对照组的
    家兔不注射任何物质;注射疫苗的家兔和对照组的家兔按照正常饲养方式饲养;

    3)步骤2)注射疫苗19日后,免疫组和对照组的家兔每日测温一次;21日后,免疫组
    和对照组的家兔均注射脾淋源猪瘟活疫苗,注射疫苗后每6小时测温一次,共测72小时;

    4)根据步骤3)注射脾淋源猪瘟活疫苗前后家兔体温的变化,判定猪瘟基因工程亚
    单位疫苗是否达到?;ぷ饔?,家兔体温变化不超过1℃时判定为达到?;ぷ饔?。

    优选的,步骤1)中,所述的易感家兔,为猪瘟病毒ELISA抗体为阴性的家兔。

    优选的,步骤1)中,所述的易感家兔,体重为1.5-3.0kg。

    优选的,步骤1)中,所述的对照组不设平行组;所述的免疫组设有平行组,每个平
    行组设立的家兔只数与对照组相同。

    优选的,步骤2)中,所述的猪瘟基因工程亚单位疫苗为293T-E2疫苗。

    本发明的方法在对猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗进行效力检测时,可用家兔来替
    代猪进行免疫攻毒的效力检验,由于检验动物家兔易获得,节约检验成本,且检验周期短
    (约24天),不涉及用猪瘟强毒攻击,生物安全性高。

    具体实施方式

    本发明采用健康易感家兔免疫猪瘟基因工程亚单位疫苗,免疫后一定时间攻毒,
    通过兔体反应热判定疫苗的免疫效果,从而有效的节约检验成本,且缩短了检验周期。

    下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

    实施例1:

    一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验方法,包括以下步骤:

    (1)取健康的易感(瘟病毒ELISA抗体均为阴性)家兔(体重为1.5-3.0kg)作为检验
    对象,按照体重、性别,将20只家兔随机分为4组,每组5只,3组作为免疫组,分别免疫
    201401、201402、201403批猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗(293T-E2),1组作为对照组;

    (2)对免疫组家兔的颈部进行皮下静脉注射,注射猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗
    (293T-E2)(0.2ml/只),而对照组的家兔不注射任何物质;注射疫苗的家兔和对照组的家兔
    按照正常饲养方式饲养;

    (3)步骤(2)注射疫苗19日后,免疫组和对照组的家兔每日测温一次;21日后,免疫
    组和对照组的家兔均兔耳静脉注射脾淋源猪瘟活疫苗(1.0ml/只),注射疫苗后每6小时测
    温一次,共测72小时;

    (4)根据步骤(3)注射脾淋源猪瘟活疫苗前后家兔体温的变化,判定猪瘟病毒基因
    工程亚单位疫苗(293T-E2)是否达到?;ぷ饔?,家兔体温变化不超过1℃时判定为达到?;?br />作用。结果如表1所示:



    表2:猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗(293T-E2)对家兔的?;ぷ饔?br />

    分组
    动物种类
    动物数量
    ?;ぢ?br />不?;ぢ?br />
    201401批免疫组
    家兔
    5只
    100%
    0%
    201402批免疫组
    家兔
    5只
    100%
    0%
    201403批免疫组
    家兔
    5只
    100%
    0%
    对照组
    家兔
    5只
    0%
    100%

    由表1、表2可知,家兔注射猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗(293T-E2)免疫后21日,
    再次被病毒攻击后,3批疫苗免疫家兔均无体温反应,?;ぢ蚀锏?00%,而对照组5只家兔
    在攻毒后30小时,体温开始升高1.0℃以上,稽留12小时以上,?;ぢ饰?。

    实施例2:

    实施例1中所述的猪瘟基因工程亚单位疫苗(293T-E2)效力检验方法,以猪进行免
    疫攻毒的效力检验时:

    取健康易感(瘟病毒PCR检测阴性,ELISA抗体为阴性)的35-60日龄猪20头,随机分
    成4组,每组5头;1-3组为免疫组,各头颈部肌肉注射201401、201402、201403批猪瘟病毒基
    因工程亚单位疫苗(293T-E2)1.0ml/头;第4组为对照组。免后35日,所有猪注射猪瘟病毒石
    门系强毒1.0ml/头;攻毒前2日每日测量猪体温两次,攻毒后日测温两次,共测16日,观察攻
    毒猪的临床表现(眼结膜炎、食欲下降或食欲废绝、便秘和腹泻交替出现、精神沉郁)。根据
    攻毒前2日及攻毒后测温和临床观察综合判定,体温变化不超过1℃时且无临床表现判定为
    达到?;ぷ饔?。结果如表表3、表4、表5所示:

    表3:攻毒猪临床观察和剖检统计表



    注:“√”表示出现此症状或有体温反应;“-”表示无此症状或无体温反应。




    表5:猪瘟基因工程亚单位疫苗(293T-E2)对30-60日龄猪?;ぷ饔?br />

    分组
    动物种类
    动物数量
    ?;ぢ?br />不?;ぢ?br />
    201401批免疫组
    30-60日龄猪
    5头
    100%
    0%
    201402批免疫组
    30-60日龄猪
    5头
    100%
    0%
    201403批免疫组
    30-60日龄猪
    5头
    100%
    0%
    对照组
    30-60日龄猪
    5头
    0%
    100%

    上述的结果表明,3批疫苗免疫猪后,用强毒攻击,测温16日体温未见明显变化,临
    床未见眼结膜炎、精神沉郁等症状,均健活,?;ぢ示?00%,对照组攻毒后5/5发病,5/5
    死亡。

    根据以上试验结果可见,用家兔进行免疫攻毒和用猪进行免疫攻毒结果是一致
    的。

    上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点,并不能以此限制本发明的
    ?;し段?。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰,都应该涵盖在本发明的?;し段?br />之内。

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