• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 16
    • 下载费用:30 金币  

    重庆时时彩2码: 一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法.pdf

    关 键 词:
    一种 同时 检测 谷物 多种 真菌 毒素 方法
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    摘要
    申请专利号:

    CN201710028053.8

    申请日:

    2017.01.16

    公开号:

    CN106770836A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/06申请日:20170116|||公开
    IPC分类号: G01N30/06; G01N30/88 主分类号: G01N30/06
    申请人: 安徽省农业科学院植物?;び肱┎分柿堪踩芯克?
    发明人: 段劲生; 孙明娜; 高同春; 董旭; 王梅; 肖青青; 褚玥
    地址: 230031 安徽省合肥市农科南路40号
    优先权:
    专利代理机构: 合肥国和专利代理事务所(普通合伙) 34131 代理人: 孙永刚
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201710028053.8

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法,其包括步骤:用含酸的乙腈??水溶液对待测谷物样品进行提取,盐析净化,离心,膜滤,得样品分析液;利用超高效液相色谱串联质谱方法进行同时检测多种真菌毒素。本发明真菌毒素采用多反应监控模式(MRM)对毒素进行定性和定量。本发明对谷物进行前处理后,利用超高效液相色谱串联质谱法对提取出的10种真菌毒素同时进行检测。用含酸的一定浓度的乙腈水溶液对样品进行提取,对样品提取液进行盐析、净化,利用高效液相色谱串联质谱的多反应监测模式进行检测,提高了检测效率,节省了检测成本,灵敏度高,重复性好,加标回收率高。

    权利要求书

    1.一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法,其特征在于,包括以下步骤:
    (1)对待测谷物样品进行提?。河煤岬囊译?水溶液对待测谷物样品进行振荡提取,
    得样品提取液;
    (2)对样品提取液进行盐析:在样品提取液中加入氯化钠进行盐析、振荡、离心;
    (3)对盐析后的样品进行净化:取盐析离心后的样品即上层清液,加入硫酸镁旋涡振荡
    进行净化,离心,对所得上层清液进行滤膜过滤,得样品分析液;
    (4)利用超高效液相色谱串联质谱方法进行同时检测多种真菌毒素。
    2.如权利要求1所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法,其特征在于,所述步
    骤(1)中含酸的乙腈-水溶液为含0.08%-1.20%体积乙酸的乙腈-水溶液,所述乙腈-水溶
    液中,乙腈与水体积比为82-86:14-18。
    3.如权利要求1所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法,其特征在于,所述步
    骤(3)中滤膜为0.20-0.25um滤膜。
    4.如权利要求1-3任一项所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法,其特征在
    于,所述步骤(4)的高效液相色谱的流动相为:流动相A为0.01%氨水的水溶液,流动相B为
    甲醇,流动相C为含2mmol/L的醋酸铵和0.1%甲酸的水溶液,流动相D为乙腈;质谱条件为:
    采用电喷雾离子源ESI,正离子模式ESI+和负离子模式ESI-进行扫描,毛细管电压(+
    4.5KV,-3.5KV),干燥气流速20L/min,雾化气流速3L/min,利用多反应监测模式MRM检测。
    5.一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法,其特征在于,包括以下步骤:
    (1)称量21.0g待测谷物样品,先用50mL含1%体积乙酸的84%体积浓度的乙腈-水溶液
    对样品进行振荡提取30min,再超声提取10min;
    (2)在所述样品提取液中加入5.0g氯化钠进行盐析,振荡5min,离心;
    (3)将盐析后的样品离心,转移上层乙腈层2.0mL至玻璃试管中,加入200mg硫酸镁后旋
    涡振荡进行净化,静置,用0.22um滤膜进行过滤后,得样品分析液;
    (4)利用超高效液相色谱串联质谱方法检测样品分析液中的10种真菌毒素。
    6.如权利要求5所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法,其特征在于,所述步
    骤(4)的高效液相色谱的流动相为:流动相A为0.01%氨水的水溶液,流动相B为甲醇,流动
    相C为含2mmol/L的醋酸铵和0.1%甲酸的水溶液,流动相D为乙腈;质谱条件为:采用电喷雾
    离子源ESI,正离子模式ESI+和负离子模式ESI-进行扫描,毛细管电压(+4.5KV,-3.5KV),干
    燥气流速20L/min,雾化气流速3L/min,利用多反应监测模式MRM检测。

    说明书

    一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法

    技术领域

    本发明涉及一种检测谷物中多种真菌毒素的方法,尤其涉及一种采用超高效液相
    色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)同时检测谷物中10种真菌毒素的方法,属于食品安全检测领
    域。

    背景技术

    真菌毒素是真菌在在适宜的环境条件下产生的有毒代谢产物,从古至今一直对人
    类、动物和植物具有巨大的潜在威胁。1960年,英国发生了10万多只火鸡中毒死亡事件,研
    究发现,饲料中有从巴西进口的霉变的花生饼粉,用这种花生饼粉喂养大白鼠能诱发肝癌,
    诱发肝癌的物质被证实为黄曲霉的代谢产物,命名为黄曲霉毒素(Aflatoxins)。我国50年
    代发生的马和牛的霉玉米中毒和甘薯黑斑病中毒、长江流域的赤霉病中毒、华南的霉甘蔗
    中毒等,都是与食物中带染真菌和存在真菌毒素有关。受全球气候变暖、干旱等因素的影
    响,食用和饲用农产品受真菌毒素污染日趋严重,世界各地对于真菌毒素污染的报道日渐
    增多,有时同一地区可检出多种真菌毒素或同一真菌毒素同时在世界各地被报道。受污染
    的也不仅限于玉米、小麦、大麦、花生等谷物,亦有干果、水果、中药材、牛奶等。真菌毒素主
    要包括黄曲霉毒素、镰刀菌毒素等。对人类危害大的真菌毒素有十几种,一般由青霉属、曲
    霉属以及镰刀菌属的霉菌产生,具有毒性强和污染频率高的特点,其中包括黄曲霉毒素、赭
    曲霉毒素A、杂色曲霉毒素、展青霉素、玉米赤霉烯酮、串珠镰刀菌素、T-2毒素、HT-2毒素,脱
    氧雪腐镰刀菌烯醇、二乙酸镳草镰刀菌烯醇等。

    由于真菌毒素的低浓度高危害性,目前全世界很多国家都对真菌毒素规定了其在
    食品中的残留限量。我国国家标准(GB 2761-2011)规定了食品中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒
    素M1、赭曲霉毒素A、展青霉素、玉米赤霉烯酮、脱氧镰刀雪腐菌烯醇等6类真菌毒素的限量,
    限量范围从0.5u g/kg到1000u g/kg不等。

    谷类作为中国人的传统饮食,几千年来一直是老百姓餐桌上不可缺少的食物之
    一,在我国的膳食中占有重要的地位,被当作传统的主食,主要包括水稻、小麦和玉米。由于
    真菌在自然界分布极为广泛,谷物从种植、采收到贮藏的过程中易被真菌污染,并在不利的
    环境下大量产生毒素,这些真菌毒素会在人体中蓄积,降解缓慢,因此对人健康危害极大。

    我国针对食品中真菌毒素制定了GB 2761-2011《食品安全国家标准食品中真菌毒
    素限量》,其中包括以下毒素的限量规定:制定了玉米中黄曲霉素B1限量为20μg/kg,脱氧雪
    腐镰刀菌烯醇限量为1000μg/kg,玉米赤霉烯酮限量为60μg/kg;制定了稻谷中黄曲霉素B1
    限量为10μg/kg;制定了小麦中黄曲霉素B1限量为5μg/kg,脱氧雪腐镰刀菌烯醇限量为1000
    μg/kg。但我国尚未规定伏马菌素在食品中限量,美国FDA规定了伏马菌素在玉米中残留限
    量总和为2000μg/kg;除黄曲霉素B1外,我国尚无其他黄曲霉素的限量标准,欧盟规定玉米
    中黄曲霉素B1限量5μg/kg,总量限量为10μg/kg,亦规定谷物中黄曲霉素B1限量2μg/kg,总
    量限量为4μg/kg。同时,国标GB2761-2011也规定了黄曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉
    米赤霉烯酮的检测方法,分别是GB/T 18979-2003、GB/T 23503-2009和GB/T5009.209-
    2011,主要采用免疫亲和柱净化液相色谱检测法和荧光光度法检测,而此类方法采用的免
    疫亲和色谱柱较为昂贵,样品前处理操作方法复杂。

    目前常用的针对食品中真菌毒素残留量的检测技术主要有酶联免疫试剂盒
    (ELISA)、薄层色谱(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)等。酶联免疫法原理是利用抗体与酶复合
    物结合,然后通过显色来检测;薄层色谱法是根据与适宜的对照物按同法所得的色谱图的
    比移值(Rf)作对比,进行含量测定的方法,这两者均为半定量方法,多用于一种或少数几种
    毒素的初步筛查;高效液相色谱法是采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不
    同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进
    入检测器进行检测,从而实现对试样的分析,此法定量准确,但对于同时检测多组分的真菌
    毒素,以及对样品基质净化不完全时,目标化合物在色谱柱上无法实现基线分离,无法对目
    标化合物进行准确定量。

    随着仪器检测技术的发展,前处理净化技术也在不断更新,目前受到广泛研究的
    集中在免疫亲和(Immunoaffinity)、固相萃取(Solid Phase Extraction)方法。免疫亲和
    层析技术是以抗原抗体中的一方作为配基亲和吸附另一方的分离系统,用此技术对样品进
    行前处理,专一性强,样品净化程度高,但目前研制出的免疫亲和抗体种类较少,除少数几
    种化合物(黄曲霉毒素类)无法对多组分化合物同时进行净化,且成本高,样品前处理操作
    复杂,目前有免疫亲和抗体的毒素有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、
    HT-2毒素等少数几种毒素。固相萃取技术是基于液-固相色谱理论,采用选择性吸附、选择
    性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化,是一种包括液相和固相的物理萃取过程;也可
    以将其近似地看作一种简单的色谱过程,此技术选择性吸附和净化程度不如免疫亲和技
    术,可用于一种或几种结构相似毒素的同时净化,但无法对复杂基质中多种毒素同时进行
    吸附和净化,常用于食品中伏马霉素、黄曲霉毒素B1以及赭曲霉素A检测的前处理。谷物的
    基质复杂,尤其在对样品基质净化不完全时,目标化合物在色谱柱上无法实现有效分离,无
    法对目标化合物进行准确定量,用现有技术方法无法全部检测10种真菌毒素,因而目前尚
    未有能够同时检测谷物中10种真菌毒素的方法。

    发明内容

    为解决上述所述技术问题,本发明提供了一种结合改进的分散固相萃取技术和超
    高效液相色谱串联质谱法对谷物中10种真菌毒素进行同时检测的方法,该方法灵敏度高,
    重复性好,回收率高。

    本发明的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法,包括以下步骤:

    (1)对待测谷物样品进行提?。河煤岬囊译?水溶液对待测大米样品进行振荡提
    取,得样品提取液;

    (2)对样品提取液进行盐析:在样品提取液中加入氯化钠进行盐析、振荡、离心;

    (3)对盐析后的样品进行净化:取盐析离心后的样品即上层清液,加入硫酸镁旋涡
    振荡进行净化,离心,对所得上层清液进行滤膜过滤,得样品分析液;

    (4)利用超高效液相色谱串联质谱方法进行同时检测多种真菌毒素。

    上述所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法中,所述步骤(1)中含酸的
    乙腈-水溶液为含0.08%-1.20%体积乙酸(冰醋酸)的乙腈-水溶液,所述乙腈-水溶液中,
    乙腈与水体积比为82-86:14-18。

    上述所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法中,所述步骤(3)中滤膜为
    0.20-0.25um滤膜。

    上述所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法中,所述步骤(4)的高效液
    相色谱的流动相为:流动相A为0.01%氨水的水溶液,流动相B为甲醇,流动相C为含2mmol/L
    的醋酸铵和0.1%甲酸的水溶液,流动相D为乙腈;质谱条件为:采用电喷雾离子源ESI,正离
    子模式ESI+和负离子模式ESI-进行扫描后,毛细管电压(+4.5KV,-3.5KV),干燥气流速20L/
    min,雾化气流速3L/min,利用多反应监测模式MRM检测。

    本发明所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法,其包括以下步骤:

    (1)称量21.0g待测谷物样品,先用50mL含1%体积乙酸的84%体积浓度的乙腈-水
    溶液对样品进行振荡提取30min,再超声提取10min;

    (2)在所述样品提取液中加入5.0g氯化钠进行盐析,振荡5min,离心;

    (3)将盐析后的样品离心,转移上层乙腈层2.0mL至玻璃试管中,加入200mg硫酸镁
    后旋涡振荡进行净化,静置,用0.22um滤膜进行过滤后,得样品分析液;

    (4)利用超高效液相色谱串联质谱方法检测样品分析液中的10种真菌毒素。

    上述所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法中,所述步骤(4)的高效液
    相色谱的流动相选自如下中的至少一种:流动相A为0.01%氨水的水溶液,流动相B为甲醇,
    流动相C为含2mmol/L的醋酸铵和0.1%甲酸的水溶液,流动相D为乙腈;质谱条件为:采用电
    喷雾离子源ESI,正离子模式ESI+和负离子模式ESI-进行扫描后,毛细管电压(+4.5KV,-
    3.5KV),干燥气流速20L/min,雾化气流速3L/min,利用多反应监测模式MRM检测。

    上述所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法中,流动相A和流动相B的体
    积比为10-90:90-10,梯度洗脱;质谱条件的质谱电离模式为负离子模式。

    上述所述的一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法中,流动相C和流动相D的体
    积比为:10-70:30-90,梯度洗脱;质谱条件的质谱电离模式为正负离子模式。

    本发明所述谷物可以为小麦或水稻或玉米等。

    本发明检测的真菌毒素包括:黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2)、伏马毒素(FB1、FB2)、玉米
    赤霉烯酮(ZEN)、脱氧镰刀雪腐菌烯醇(DON)、3-乙?;蜒趿堆└┐?3-ADON)以及
    15-乙?;蜒趿堆└┐?15-ADON)。

    本发明真菌毒素采用多反应监控模式(MRM)对毒素进行定性和定量。本发明对谷
    物进行前处理后,利用超高效液相色谱串联质谱法对提取出的10种真菌毒素同时进行检
    测。用含酸的一定浓度的乙腈水溶液对样品进行提取,对样品提取液进行盐析、净化,利用
    高效液相色谱串联质谱的多反应监测模式进行检测,提高了检测效率,节省了检测成本,灵
    敏度高,重复性好,加标回收率高。

    采用本发明的方法测定小麦、水稻、玉米中的毒素含量准确、可靠。DON、15Ac-DON、
    3Ac-DON的出峰时间为1-2分钟,检出限均为1ng/g;黄曲霉素B1、黄曲霉素B2、黄曲霉素G1、黄
    曲霉素G2的出峰时间为3-4分钟,检出限为0.2ng/g、0.2ng/g、0.2ng/g和1ng/g;伏马毒素
    FB1、伏马毒素FB2的出峰时间为3-4分钟,检出限均为10ng/g;ZEA的出峰时间为3-5分钟,检
    出限为5ng/g。以上毒素的检出限较之国标的单一毒素检测方法均有所降低,灵敏度有所提
    高。

    附图说明

    图1为空白基质DON标准试样多反应监测(MRM)色谱图(50μg/L);

    图2空白基质15A-DON标准试样多反应监测(MRM)色谱图(50μg/L);

    图3空白基质3A-DON标准试样多反应监测(MRM)色谱图(50μg/L);

    图4空白基质黄曲霉素B1标准试样多反应监测(MRM)色谱图(50μg/L);

    图5空白基质黄曲霉素B2标准试样多反应监测(MRM)色谱图(50μg/L);

    图6空白基质黄曲霉素G1标准试样多反应监测(MRM)色谱图(50μg/L);

    图7空白基质黄曲霉素G2标准试样多反应监测(MRM)色谱图(50μg/L);

    图8空白基质伏马毒素B1标准试样多反应监测(MRM)色谱图(50μg/L);

    图9空白伏马毒素B2标准试样多反应监测(MRM)色谱图(50μg/L);

    图10空白基质玉米赤霉烯酮标准试样多反应监测(MRM)色谱图(50μg/L)。

    具体实施方式

    实施例1

    (1)将不少于1000g小麦或大米(已脱壳)或玉米籽?;煸?,四分法取样,放入食品
    加工机粉碎,过20目筛,制成试样,放入试样瓶中密封,做上标记,并置于-20℃条件下保存,
    待测。

    (2)称取样品21.0g,加入含1%(体积)乙酸的乙腈水混合溶剂(乙腈:水=84:16,
    V:V)50mL,振荡30min,超声提取10min,加入5g氯化钠,5000r/min离心3min。取上清夜即乙
    腈提取液2mL,待净化。

    (3)取2mL上述乙腈提取液于5mL玻璃试管中,加入200mg无水硫酸镁吸附剂,涡动
    混合1min,静置,过0.22μm滤膜,得样品分析液供液相色谱-串联质谱仪测定。

    本发明所用检测仪器与设备:SHIMADZU LC超高效液相色谱仪(配有四元泵;脱气
    机和自动进样器),MS-8030质谱同时检测器(配有电喷雾离子源)。色谱柱:Shim-packXR-
    ODSⅢ色谱柱(2.0mm×50mm,1.6μm);流动相:采用甲醇/含有0.01%氨水的水溶液用于检测
    负离子模式下真菌毒素,采用乙腈/含2mmol/L的醋酸铵和0.1%甲酸的水溶液用于检测正
    负离子模式下真菌毒素,其梯度洗脱的程序见表1和表2。

    液相色谱条件

    a)色谱柱:C18分析柱,150mm L.×2.0mm,I.D.2.2μm;

    b)流动相:A:0.01%体积浓度氨水溶液;B:甲醇;C:含2mmol/L的乙酸铵及0.1%体
    积浓度甲酸的水溶液;D:乙腈;液相色谱流动相梯度洗脱具体见表1、表2。

    c)流速:400μL/min;

    d)柱温:40℃;

    e)进样量:5μL。

    表1液相流动相梯度洗脱程序(测DON、15A-DON、3A-DON)

    时间min
    流速mL/min
    流动相A(0.01%氨水溶液)%
    流动相B(甲醇)%
    2.0
    0.4
    10
    90
    4.0
    0.4
    10
    90
    4.1
    0.4
    90
    10
    5.0
    0.4
    90
    10

    表2液相流动相梯度洗脱程序(测黄曲霉素B1、B2、G1、G2、伏马毒素FB1、FB1、ZEA)

    时间min
    流速mL/min
    流动相C(含2mmol/L的乙酸铵和0.1%甲酸的水)%
    流动相D(乙腈)%
    0.5
    0.4
    70
    30
    3.5
    0.4
    10
    90
    5.0
    0.4
    10
    90
    5.1
    0.4
    70
    30
    6.0
    0.4
    70
    30

    质谱条件

    a)离子源:电喷雾离子源(ESI),450℃;

    b)扫描方式:正负离子扫描;

    c)检测方式:多反应监测(MRM);

    d)干燥气温度:250℃;

    e)干燥气流速:20L/min;

    f)雾化器流速:3.0L/min;

    g)离子源接口电压:ESI+,+4.5kV;ESI-,-3.5kV

    h)10种真菌毒素监测离子对、保留时间、碰撞电压及碰撞能量参见表3。

    表3 8种真菌毒素监测离子对、保留时间、碰撞电压及碰撞能量



    根据表1-3,高效液相色谱流动相为流动相A与流动相B的混合溶液,质谱条件的质
    谱电离模式为负离子模式;高效液相色谱流动相为流动相C与流动相D的混合溶液,质谱条
    件的质谱电离模式为正负离子模式,即流动相C和流动相D测黄曲霉毒素B1/B2/G1/G2和伏
    马毒素FB1/FB2,均为正离子模式,流动相C和流动相D测玉米赤霉烯酮ZEA,为负离子模式。

    液相色谱-质谱/质谱测定

    1定性测定

    在相同实验条件下进行样品测定时,如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品一
    致,并且在扣除背景后的样品质谱图中,所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相
    一致。

    2定量测定

    本方法采用外标校准曲线法单离子定量测定。为了减少基质对定量测定的影响,
    需用空白样液来制备所使用的一系列基质标准工作溶液,用基质标准工作溶液按浓度由小
    到大的顺序,分别进样来绘制标准曲线。并且保证所测试样中真菌毒素的响应值均在仪器
    的线性范围内,以峰面积y对样品浓度x做线性回归,见表4?;旌匣时曜既芤旱囊合嗌?br />质谱/质谱多反应监测(MRM)色谱图参见图1-10。

    表4标准曲线方程


    分别称取10种真菌毒素标准品(购自sigma公司),用乙腈配制成1000mg/L的上述
    10种真菌毒素的各自标准储备溶液,将10种标准储备液用空白样品基质溶液配制成不同浓
    度的基质混合标准工作溶液,待用?;时曜脊ぷ饕合峙湎钟?。

    3平行试验

    按以上步骤,对同一试样进行平行测定。

    4空白实验

    除不称取试样外,均按上述步骤测定。

    5结果计算

    使用基质标准工作溶液进样,绘制基质标准工作曲线。待测物残留的响应值应在
    检测方法的线性范围之内。

    试样中10种真菌毒素的残留量按下式计算:


    式中:

    X——试样中被测组分的残留量,单位为毫克每千克(mg/kg);

    C——从标准曲线上得到的被测组分溶液质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);

    V——试样定容体积,单位为毫升(mL);

    m——试样溶液所代表试样的重量,单位为克(g)。

    计算结果应扣除空白值。

    6方法准确度和精密度

    准确度

    本方法在0.01~0.5mg/kg间添加浓度的回收率在76.6%~103.0%之间,
    0.0002mg/kg~1.0mg/kg间添加浓度的回收率在72.5%~108.3%之间。

    精密度

    本方法标准精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,获得重复
    性和再现性的值是以95%的可信度来计算,本方法的精密度数据参见表6。

    谷物中10种标准真菌毒素的加标回收率的检测:

    (1)样品制备:在谷物中分别添加以下10种真菌毒素标准物质:黄曲霉毒素(B1、B2、
    G1、G2)、伏马毒素(FB1、FB2)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧镰刀雪腐菌烯醇(DON)、3-乙?;?br />氧镰刀雪腐菌烯醇(3-ADON)以及15-乙?;蜒趿堆└┐?15-ADON),制得单加标的
    真菌毒素样品,其中谷物为21g,添加10种真菌毒素标准物质,制得总加标的真菌毒素样品。

    (2)样品处理:将单加标的真菌毒素样品、总加标的真菌毒素样品分别进行以下处
    理过程:称取样品21.0g,加入含1%(体积)乙酸的乙腈水混合溶剂(乙腈:水=84:16,V:V)
    50mL,振荡30min,超声提取10min,加入5g氯化钠,5000r/min离心3min。取上清夜即乙腈提
    取液2mL,待净化。取2mL上述乙腈提取液于5mL玻璃试管中,加入200mg无水硫酸镁吸附剂,
    涡动混合1min,静置,过0.22μm滤膜,得样品分析液。

    (3)样品分析液的检测:利用超高效液相色谱串联质谱方法检测样品分析液中的
    10种真菌毒素,其中流动相在正离子模式、负离子模式下的梯度洗脱程序见表1所示,质谱
    的检测模式及参数见表3所示;同时表3给出了各种单加标的真菌毒素的定性离子(单位为
    m/z)、定量离子(单位为m/z)及其所对应的碰撞能量(单位为V);表5和表6则给出了各种单
    加标的真菌毒素的检出限(3S/N,根据3倍性噪比计算得出)、重复性限和再现性限等;另外
    真菌毒素10种标样分析液的多反应监测(MRM)色谱图如图1-10所示,可看出谷物样品中10
    种真菌毒素标准物质的分离度好,对提高灵敏度有很大帮助,又根据表5结果可知,本发明
    的检出限低,符合《出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素生物学检验方法标准编写的基
    本规定》(SN/T 0005-1996)中关于回收率、灵敏度等的要求。

    表5 10种真菌毒素中英文名称、方法检出限



    表6 10种真菌毒素精密度数据表





    以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出,对
    于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行
    若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求的?;し段?。

    关于本文
    本文标题:一种同时检测谷物中多种真菌毒素的方法.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-6004681.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
  • 沈阳娱网棋牌下载安装 晓游游戏棋牌大厅苹果版下截 复式双色球中奖查询表 黑龙江十一选五的中奖号码 六开彩开奖现场直播 广东十一选五现场开奖 股票指数数据 新11选5是什么 腾讯分分彩走势图网站 双色球走势图表 北京pk10直播现场 胜负彩17146期开奖奖金 大神棋牌游戏官网下载 澳门三分彩开奖记录 上证指数2010年走势图 安徽11选5遗漏数据