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    重庆时时彩盛大平台: 一种N乙酰L半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ眉坝τ梅椒?pdf

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    一种 乙酰 半胱氨酸 ?;?纳米 应用 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201611092358.7

    申请日:

    2016.12.01

    公开号:

    CN106770569A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 27/327申请日:20161201|||公开
    IPC分类号: G01N27/327; G01N27/48 主分类号: G01N27/327
    申请人: 山西大学
    发明人: 郭玉晶; 刘志广; 王丽; 任宏瑛
    地址: 030006 山西省太原市小店区坞城路92号
    优先权:
    专利代理机构: 山西五维专利事务所(有限公司) 14105 代理人: 郭海燕
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201611092358.7

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明属于电化学传感器和分子识别技术领域,具体涉及一种N??乙酰L??半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ眉坝τ梅椒?。本发明N??乙酰L??半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ梅椒?,包括以下步骤:a.配制N??乙酰L??半胱氨酸?;さ慕鹉擅兹芤?,采用循环伏安法沉积在玻碳电极表面,得到N??乙酰L??半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂?;b.将步骤a中制得的N??乙酰L??半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂玁ALC??Au/GCE静置在pH为6~7的L??酪氨酸或D??酪氨酸溶液中,采用循环伏安法沉积在电极表面,得到N??乙酰L??半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼嵝奘蔚牟L嫉缂玁ALC??Au/GCE??L??/D??Tyr;c.将步骤b中制得N??乙酰L??半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼嵝奘蔚牟L嫉缂玁ALC??Au/GCE??L??/D??Tyr在铁氰化钾/KCl的溶液中进行循环伏安和电化学阻抗手性识别。

    权利要求书

    1.一种N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ?,其特征在于用于电化学方法手性识别
    酪氨酸。
    2.权利要求1所述的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ玫挠τ梅椒?,其特征在于
    包括以下步骤:
    a.配制溶剂为0.1mol/L的KCl溶液,pH为6~7的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅兹芤?,
    采用循环伏安法沉积在玻碳电极表面,得到N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉?br />极NALC-Au/GCE;
    b.将步骤a中制得的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂玁ALC-Au/GCE静
    置在pH为6~7的L-酪氨酸或D-酪氨酸溶液中,采用循环伏安法沉积在电极表面,得到N-乙
    酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼嵝奘蔚牟L嫉缂玁ALC-Au/GCE-L-/D-Tyr;
    c.将步骤b中制得的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼嵝奘蔚牟L嫉缂玁ALC-
    Au/GCE-L-/D-Tyr在铁氰化钾/KCl的溶液中进行循环伏安和电化学阻抗手性识别。
    3.根据权利要求2所述的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ梅椒?,其特征在于所
    述步骤a中的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅兹芤旱呐ǘ任?0~100mmol/L,溶液pH的缓冲
    对由磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成,pH为6~7。
    4.根据权利要求2所述的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ梅椒?,其特征在于所
    述的步骤a中N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅壮粱缪?0.75~1.6V,沉积圈数2~8圈。
    5.根据权利要求2所述的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ梅椒?,其特征在于所
    述的步骤b中L-酪氨酸或D-酪氨酸溶液浓度为10~769mmol/L,溶液pH的缓冲对由磷酸氢二
    钠和磷酸二氢钾组成,pH为4.07~7。
    6.根据权利要求2所述的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ梅椒?,其特征在于所
    述的步骤b中L-酪氨酸或D-酪氨酸溶液的沉积电位为0.4~1V,沉积圈数为1~6圈。
    7.根据权利要求2所述的的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ梅椒?,其特征在于
    所述的步骤c中铁氰化钾溶液的浓度为1~10mmol/L。

    说明书

    一种N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ眉坝τ梅椒?/invention-title>

    技术领域

    本发明属于电化学传感器和分子识别技术领域,具体涉及一种N-乙酰L-半胱氨酸
    ?;さ慕鹉擅椎挠τ眉坝τ梅椒?。

    背景技术

    手性识别是化学、生物学、医药学领域的一个常见现象。手性分子是拥有完全相同
    的化学性质和物理性质,但是它们在生物活性和药理方面却有很大的不同,甚至是截然相
    反的效果。比如:天冬氨酸S型是苦味的,而R型是甜味的;沙丁胺醇S型可严重的致畸,而R型
    是镇静剂,可缓解妊娠妇女的晨吐反应。氯胺酮S型是麻醉剂,作为临床术前麻醉使用,而R
    型是致幻剂,禁止使用;乙胺丁醇S型可治疗结核,而R型可致盲。再比如酪氨酸,酪氨酸L型
    为人体非必须氨基酸,缺乏时可能会导致忧郁症及其他心理疾病,而过量的话会增加姐妹
    染色体交换的机率,影响下一代儿童的健康发育。而酪氨酸D型作为非蛋白氨基酸的一种,
    在研讨蛋白质的结构和运作机能方面有重要的意义。因而手性识别对映异构体具有重要的
    意义。

    目前,手性识别方法主要有以下几种:毛细管电泳法、高效液相色谱法、荧光光谱
    检测法和电化学方法。其中毛细管电泳法、高效液相色谱法分析成本高,分析时间长,不利
    于快速检测;荧光光谱检测法检测范围窄。因此,亟待发展一种简单、快速、灵敏的手性识别
    方法。

    发明内容

    本发明的目的是一种N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ眉坝τ梅椒?。

    本发明的技术方案为:

    一种N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ?,用于电化学方法手性识别酪氨酸。

    本发明N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ梅椒?,包括以下步骤:

    a.配制溶剂为0.1mol/L的KCl溶液,pH为6~7的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅?br />溶液,采用循环伏安法沉积在玻碳电极表面,得到N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚?br />玻碳电极NALC-Au/GCE;

    b.将步骤a中制得的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂玁ALC-Au/
    GCE静置在pH为6~7的L-酪氨酸或D-酪氨酸溶液中,采用循环伏安法沉积在电极表面,得到
    N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼嵝奘蔚牟L嫉缂玁ALC-Au/GCE-L-/D-Tyr;

    c.将步骤b中制得的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼嵝奘蔚牟L嫉缂?br />NALC-Au/GCE-L-/D-Tyr在铁氰化钾/KCl的溶液中进行循环伏安和电化学阻抗手性识别。

    进一步地,本发明所述步骤a中的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅兹芤旱呐ǘ任?br />10~100mmol/L,溶液pH的缓冲对由磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成,pH为6~7。

    本发明所述的步骤a中N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅壮粱缪?0.75~1.6V,沉
    积圈数2~8圈。

    本发明所述的步骤b中L-酪氨酸或D-酪氨酸溶液浓度为10~769mmol/L,溶液pH的
    缓冲对由磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成,pH为4.07~7。

    本发明所述的步骤b中L-酪氨酸或D-酪氨酸溶液的沉积电位为0.4~1V,沉积圈数
    为1~6圈。

    本发明所述的步骤c中铁氰化钾溶液的浓度为1~10mmol/L。

    本发明采用上述技术方案,基于电化学阻抗的方法,进行酪氨酸对映异构体的识
    别,试验证明该方法制备工艺简单,检测成本低廉,稳定性好。

    附图说明

    图1为实施例1中N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂投訪-酪氨酸
    或D-酪氨酸对映体识别的循环伏安图;图1中a:GCE,b:N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔?br />饰的玻碳电极,c:N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀蚅-Tyr修饰的玻碳电极,d:N-乙酰L-半
    胱氨酸?;さ慕鹉擅缀虳-Tyr修饰的玻碳电极;

    图2为实施例2中N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂投訪-酪氨酸
    或D-酪氨酸对映体识别的阻抗图,由图2可见,D型酪氨酸的阻抗值明显大于L型酪氨酸的阻
    抗值;图2中a:GCE,b:N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂?,c:N-乙酰L-半胱氨
    酸?;さ慕鹉擅缀蚅-Tyr修饰的玻碳电极,d:N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀虳-Tyr修饰
    的玻碳电极;

    图3为实施例3中,N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅壮粱κ缘缂奘蔚挠跋?;

    图4为实施例3中,酪氨酸溶液沉积圈数对手性识别酪氨酸的影响;

    图5为实施例4中,酪氨酸溶液pH对手性识别酪氨酸的影响;

    图6为实施例5中,酪氨酸溶液浓度对手性识别酪氨酸的影响。

    具体实施方式

    实施例1

    N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅椎挠τ梅椒ǎ?br />

    制备N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅祝?br />

    称取0.227g N-乙酰L-半胱氨酸,溶解于10mL体积比为6:1的甲醇一冰乙酸溶液
    中。称取0.182g氯金酸,溶解于10mL体积比为6:1的甲醇一冰乙酸溶液中。将氯金酸溶液转
    移至100mL的圆底烧瓶里,冰浴搅拌下加入已配好的N-乙酰L-半胱氨酸甲醇一冰乙酸溶液,
    当溶液由金黄色变为橙色时,一次性快速加入5mL含硼氢化钠(0.35g)的乙醇超声分散溶
    液,反应30min,加入50mL丙酮停止反应。离心收集沉淀。用适量丙酮和水将上述沉淀物反复
    溶解、沉淀、离心、洗涤,再用8000-14000Da的透析袋透析以除去溶液中存在的杂质离子,氮
    气吹干后置于4℃冰箱保存。

    a.配制N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅兹芤?5mmol/L(溶剂为0.1mol/LKCl,pH=
    6.53),采用循环伏安法沉积在玻碳电极表面,沉积电压为-0.75~1.6V,沉积圈数6圈,得到
    N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂?,由图1(b)、图2(b)可知,N-乙酰L-半胱氨
    酸?;さ慕鹉擅滓殉晒π奘蔚讲L嫉缂砻?。

    b.将步骤(a)得到的电极静置在L-酪氨酸或D-酪氨酸溶液(pH=6.53)中,采用循
    环伏安法将L-酪氨酸或D-酪氨酸沉积在电极表面,得到N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀?br />酪氨酸的修饰电极。由图1(c)、1(d)和图2(c)、2(d)可知,酪氨酸成功的修饰到电极表面。

    c.将步骤(b)中制得的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼岬男奘蔚缂糜?br />5mmol/L铁氰化钾/0.1mol/L KCl溶液中,采用循环伏安法和电化学阻抗表征。由图2(c)、2
    (d)可知,D型酪氨酸阻抗值明显高于L型酪氨酸。循环伏安法电位范围为-0.2~0.6V,扫速
    为0.1V/s。电化学阻抗法频率范围为0.1~6·105Hz,幅度为0.01V。

    实施例2

    考察N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅壮粱κ挠跋?。

    N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼岬男奘蔚缂闹票竿凳├?,NALC-
    Au沉积圈数分别采用2、3、5、6、7、8圈,其结果见图3,可见当NALC-Au沉积圈数为6圈时,形成
    的N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂奘蔚缂哪さ暮穸茸钍屎?,电极表面
    的膜裸露的面积最大,可以更多的与L-酪氨酸或D-酪氨酸结合。

    实施例3

    考察酪氨酸沉积圈数对酪氨酸对映体识别能力的差异。

    N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼岬男奘蔚缂闹票竿凳├?,NALC-
    Au沉积圈数分别采用1、2、3、4、5圈,进行酪氨酸对映体的识别,其结果见图4,在沉积圈数为
    3圈时,N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂岳野彼岫杂程迨侗鹉芰ψ詈?。

    实施例4

    考察酪氨酸在不同pH下,N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘尾L嫉缂岳野?br />酸对映体识别能力的差异。

    N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼岬男奘蔚缂闹票竿凳├?,酪氨酸
    溶液分别采用pH4.07、pH5.13、pH5.66、pH5.91、pH6.53、pH7.00,进行酪氨酸对映体的识别,
    其结果见图5,可见当pH为6.53时,N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂岳野?br />酸对映体识别能力差别最大。

    实施例5

    考察酪氨酸在不同浓度下,N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘尾L嫉缂岳?br />氨酸对映体识别能力的差异。

    N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅缀屠野彼岬男奘蔚缂闹票竿凳├?,酪氨酸
    浓度分别采用10、25、50、164、323、476、769mmol/L进行对映体的识别,其结果见图6,在酪氨
    酸的浓度为245mmol/L,N-乙酰L-半胱氨酸?;さ慕鹉擅仔奘蔚牟L嫉缂岳野彼岫杂程?br />识别能力最好。

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