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    检测 液态 乳制品 残留 农药 含量 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201510807159.9

    申请日:

    2015.11.19

    公开号:

    CN106770863A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/88申请日:20151119|||公开
    IPC分类号: G01N30/88 主分类号: G01N30/88
    申请人: 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司
    发明人: 魏文平; 扎木则仁; 吴腾; 常建军
    地址: 011500 内蒙古自治区呼和浩特市和林格尔盛乐经济园区
    优先权:
    专利代理机构: 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 代理人: 李志东
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201510807159.9

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.07.13|||2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明提出了一种检测液态乳制品中残留农药含量的方法,具体地,该方法包括:(1)利用乙腈对所述液态乳制品进行萃取,并收集乙腈有机相,其中,在萃取过程中,添加无机盐;(2)将乙腈有机相进行旋转干燥后,利用正己烷和水进行溶解,并收集正己烷有机相;(3)将正己烷有机相用氮气进行吹干,以便获得待测粗品;(4)利用固相萃取柱对待测粗品进行纯化,以便获得洗脱液;(5)将洗脱液与乙二醇混合,并用氮气进行吹扫,以便获得待测样品;以及(6)通过色谱法,对待测样品进行检测,以便确定液态乳制品中残留农药的含量。由此,能够达到节省前处理步骤、减少气相色谱分析杂质的目的,进而提高检测效果。

    权利要求书

    1.一种检测液态乳制品中残留农药含量的方法,其特征在于,包括:
    第一步,将所述待测液体乳制品样品混匀,准确称量9~11g,加入20mL乙腈,然后
    加入3.5~4.5g硫酸镁和1.0~1.5g氯化钠,涡旋1分钟,并在4000~5000rpm条件下进行
    4~6分钟的第一离心处理,静置分层后获得第一有机相和第一水相。随后,向所述第一水
    相中再加入10mL乙腈,通过第二离心混合充分,静置分层后获得第二有机相,将所述第
    二有机相以及所述第一有机相合并,得到乙腈有机相。
    第二步,将所述乙腈有机相在48~52摄氏度的水浴条件下旋转蒸干,然后在旋转蒸发
    瓶中加入约9mL的正己烷,冲洗旋转瓶,再加入约9mL水,进行1分钟的第一震摇,待
    溶液分层清晰后,获得第三有机相以及第二水相。向所述第二水相中再加入6mL的正己烷,
    进行1分钟的第二震摇,静置分层,获得第四有机相。
    第三步,将所述第四有机相与所述第三有机相合并,并用氮气在48~52摄氏度的水浴
    条件下中吹至1mL,获得待测粗品,待用。
    第四步,利用弗罗里硅土SPE柱对待测粗品进行纯化,其中,弗罗里硅土SPE柱首先
    进行活化,所述活化为在所述弗罗里硅土SPE柱中加入3mL正己烷,然后再加入3mL第
    一洗脱剂;将所述待测粗品涡旋30秒后,注入经过所述活化的所述弗罗里硅土SPE柱中,
    当所述待测粗品溶液快要流干时,在盛放样品的玻璃试管中加入6mL所述第一洗脱剂进行
    冲洗,再将所述第一洗脱剂倒入所述弗罗里硅土SPE柱,然后在所述盛放样品的玻璃试管
    中加入3mL所述第二洗脱剂进行冲洗,再将所述第二洗脱剂倒入弗罗里硅土SPE柱,待所
    有洗脱剂流干后,弃去所述弗罗里硅土SPE柱,收集全部洗脱液,
    其中,所述第一洗脱剂为正己烷与三氯甲烷的混合溶剂,并且正己烷与三氯甲烷的体
    积比为9:1,以及所述第二洗脱剂为正己烷与三氯甲烷的混合溶剂,并且正己烷与三氯甲
    烷的体积比为4:1。
    第五步,在所述洗脱液中加入10微升的乙二醇,并用氮气在48~52摄氏度的水浴条件
    下吹扫完正己烷之后,准确加入1.00毫升正己烷,在涡旋混合器上充分振荡溶解残留物,
    经0.45μm有机系滤膜过滤后,获得待测样品,待用。
    第六步,设置气相色谱参数如下:进样口温度260摄氏度~280摄氏度,检测器温度300
    摄氏度,载气为氮气,载气流速1.2mL/分钟,尾吹气为氮气,流速28mL/分钟,并将所述
    待测样品1~2微升注入到CP-Sil19CB毛细管色谱柱中,设置程序升温如下:初始温度80
    摄氏度,以40摄氏度/分钟升至214摄氏度,保持7分钟,以20摄氏度/分钟升至280摄氏
    度,保持7分钟,总时间为25.65分钟。柱流速1.2mL/分钟。
    第七步:结果计算。
    2.一种检测液态乳制品中残留农药含量的方法,其特征在于,包括:
    (1)利用乙腈对所述液态乳制品进行萃取,并收集乙腈有机相,其中,在所述萃取过
    程中,添加无机盐;
    (2)将所述乙腈有机相进行旋转干燥后,利用正己烷和水对所述旋转干燥后的剩余固
    体进行溶解,并收集正己烷有机相;
    (3)将所述正己烷有机相,用氮气进行吹扫,以便获得待测粗品;
    (4)利用固相萃取柱对所述待测粗品进行纯化,以便获得洗脱液;
    (5)将所述洗脱液与乙二醇混合,并用氮气进行吹扫,以便获得待测样品;以及
    (6)通过色谱法,对所述待测样品进行检测,以便确定所述液态乳制品中残留农药的
    含量。
    3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤(1)进一步包括:
    (1-1)将所述液态乳制品与乙腈、无机盐混合后进行第一离心,并分别获得第一有机
    相和第一水相;
    (1-2)将所述第一水相与乙腈混合后进行第二离心,并收集第二有机相;以及
    (1-3)将所述第二有机相与所述第一有机相合并得到所述乙腈有机相。
    4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤(2)进一步包括:
    (2-1)将所述乙腈有机相置于旋转蒸发瓶中进行旋转蒸干;
    (2-2)向经过所述旋转蒸干的所述旋转蒸发瓶中加入正己烷对所述旋转蒸发瓶进行冲
    洗,随后向所述旋转蒸发瓶中加入水进行第一震摇后静置分层,并分别获得第三有机相和
    第二水相;
    (2-3)将所述第二水相与正己烷混合后进行第二震摇,静置分层并收集第四有机相;
    以及
    (2-4)将所述第三有机相与所述第四有机相合并,以便获得所述正己烷有机相。
    5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤(4)中采用弗罗里硅土SPE柱。
    6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,在步骤(4)中使用第一洗脱剂和第二
    洗脱剂,所述第一洗脱剂和所述第二洗脱剂均包括正己烷和三氯甲烷,其中,在所述第一
    洗脱剂中所述正己烷与三氯甲烷的体积比为9:1,在所述第二洗脱剂中,所述正己烷与三
    氯甲烷的体积比为4:1。
    7.根据权利要求2~6任一项所述的方法,其特征在于,基于9~11克所述液态乳制品,
    在步骤(1-1)中,所述乙腈的用量为20ml,所述无机盐包括3.5~4.5克硫酸镁和1.0~1.5
    克氯化钠,所述混合是通过涡旋1分钟进行的,所述第一离心是按照4000~5000rpm的转速
    进行4~6分钟;
    在步骤(1-2)中,所述乙腈的用量为10ml;
    在步骤(2-1)中,所述旋转蒸干是在48~52摄氏度的温度下进行的;
    在步骤(2-2)中,所述正己烷的用量为9毫升,所述水的用量为9毫升,所述第一震
    摇进行1分钟;
    在步骤(2-3)中,所述正己烷的用量为6毫升,所述第二震摇进行1分钟;
    在步骤(3)中,在48~52摄氏度的温度下,用氮气进行吹干;
    在步骤(4)中,所述弗罗里硅土SPE柱被预先活化,所述活化是通过向所述弗罗里硅
    土SPE柱中依次添加3ml正己烷和3ml所述第一洗脱剂而进行的;
    在步骤(4)中,依次采用6ml所述第一洗脱剂和3ml所述第二洗脱剂进行洗脱;以及
    在步骤(5)中,所述乙二醇的用量为10微升,采用氮气在48~52摄氏度的温度下进
    行吹扫,并准确加入1ml正己烷对残留物进行震荡溶解,利用0.45微米的滤膜进行过滤,
    选择所得到的滤液作为所述待测样品,
    所述残留农药包括选自下列的至少之一:α-666,β-666,γ-666,δ-666,p,p’-DDE,
    p,p’-DDD,o,p’-DDT,p,p’-DDT,七氯,环氧七氯,顺式氯丹,反式氯丹,氧化氯丹,α-
    硫丹,β-硫丹,硫丹硫酸盐以及狄试剂以及艾氏剂,
    所述液态乳制品包括牛奶。
    8.根据权利要求2~7任一项所述的方法,其特征在于,在步骤(6)中,所述色谱法
    为气相色谱法。
    9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述气相色谱法采用CP-Sil19CB毛细
    管色谱柱、VF-1701ms毛细管色谱柱或DB-1701毛细管色谱柱。
    10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述气相色谱法采用下列条件:
    进样口温度260摄氏度~280摄氏度,检测器温度300摄氏度,载气为氮气,尾吹气为
    氮气,
    针对CP-Sil19CB毛细管色谱柱,设置初始温度为80摄氏度,保持2分钟,以40摄氏
    度/分钟升温至214摄氏度,保持7分钟,以20摄氏度/分钟升温至280摄氏度,保持7分
    钟,总时间为25.65分钟,其中载体流速为1.2ml/分钟,尾吹气流速为28ml/分钟。
    针对VF-1701ms毛细管色谱柱或DB-1701毛细管色谱柱,设置初始温度为90摄氏度,
    保持1分钟,以40摄氏度/分钟升温至170摄氏度,保持5分钟,以6摄氏度/分钟升温至
    242摄氏度,保持7分钟,以40摄氏度/分钟升温至270摄氏度,保持7分钟,其中,总时
    间为39~42分钟,载气流速为1.0ml/分钟,尾吹气流速为29ml/分钟。

    说明书

    检测液态乳制品中残留农药含量的方法

    技术领域

    本发明涉及食品检测领域。具体地,本发明涉及检测液态乳制品中残留农药含量的方
    法。

    背景技术

    检测乳制品中各类残留农药的含量是乳制品质量检测中重要的部分。我国2009年实施
    的国家标准GB/T 5009.19-2008《食品中有机氯农药多组分残留的测定》以及国家标准GB/T
    5009.162-2008《动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定》中对于
    多组分残留农药的检测方法以及检出限均作出了明确规定。其中,气相色谱作为色谱法中
    重要的分析手段,被广泛的应用于各类残留农药含量的检测中。

    然而,目前检测乳制品中残留农药含量的方法仍有待改进。

    发明内容

    本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

    本发明是基于发明人的以下发现而完成的:

    对于多种有机残留农药含量的测定,国家标准GB/T 5009.19-2008以及国家标准GB/T
    5009.162-2008中规定的基于气相色谱的检测方法均存在前处理操作复杂,消耗有机溶剂多,
    检测时间长,上机杂质干扰多,且回收率偏低等问题。并且,由于上机杂质干扰较多,上
    述国家标准色谱条件不能实现同时将多种农药残留的气相色谱峰分开,进而严重影响检测
    效果。

    有鉴于此,在本发明的第一方面,本发明提出了一种检测液态乳制品中残留农药含量
    的方法。根据本发明的实施例,该方法包括:一种检测液态乳制品中残留农药含量的方法,
    其特征在于,包括:第一步,将所述待测液体乳制品样品混匀,准确称量9~11g,加入20mL
    乙腈,然后加入3.5~4.5g硫酸镁和1.0~1.5g氯化钠,涡旋1分钟,并在4000~5000rpm
    条件下进行4~6分钟的第一离心处理,静置分层后获得第一有机相和第一水相。随后,向
    所述第一水相中再加入10mL乙腈,通过第二离心混合充分,静置分层后获得第二有机相,
    将所述第二有机相以及所述第一有机相合并,得到乙腈有机相。第二步,将所述乙腈有机
    相在48~52摄氏度的水浴条件下旋转蒸干,然后在旋转蒸发瓶中加入约9mL的正己烷,冲
    洗旋转瓶,再加入约9mL水,进行1分钟的第一震摇,待溶液分层清晰后,获得第三有机
    相以及第二水相。向所述第二水相中再加入6mL的正己烷,进行1分钟的第二震摇,静置
    分层,获得第四有机相。第三步,将所述第四有机相与所述第三有机相合并,并用氮气在
    48~52摄氏度的水浴条件下中吹至1mL,获得待测粗品,待用。第四步,利用弗罗里硅土
    SPE柱对待测粗品进行纯化,其中,弗罗里硅土SPE柱首先进行活化,所述活化为在所述
    弗罗里硅土SPE柱中加入3mL正己烷,然后再加入3mL第一洗脱剂;将所述待测粗品涡
    旋30秒后,注入经过所述活化的所述弗罗里硅土SPE柱中,当所述待测粗品溶液快要流
    干时,在盛放样品的玻璃试管中加入6mL所述第一洗脱剂进行冲洗,再将所述第一洗脱剂
    倒入所述弗罗里硅土SPE柱,然后在所述盛放样品的玻璃试管中加入3mL所述第二洗脱剂
    进行冲洗,再将所述第二洗脱剂倒入弗罗里硅土SPE柱,待所有洗脱剂流干后,弃去所述
    弗罗里硅土SPE柱,收集全部洗脱液,其中,所述第一洗脱剂为正己烷与三氯甲烷的混合
    溶剂,并且正己烷与三氯甲烷的体积比为9:1,以及所述第二洗脱剂为正己烷与三氯甲烷
    的混合溶剂,并且正己烷与三氯甲烷的体积比为4:1。第五步,在所述洗脱液中加入10
    微升的乙二醇,并用氮气在48~52摄氏度的水浴条件下吹扫完正己烷之后,准确加入1.00
    毫升正己烷,在涡旋混合器上充分振荡溶解残留物,经0.45μm有机系滤膜过滤后,获得待
    测样品,待用。第六步,设置气相色谱参数如下:进样口温度260摄氏度~280摄氏度,检
    测器温度300摄氏度,载气为氮气,载气流速1.2mL/分钟,尾吹气为氮气,流速28mL/
    分钟,并将所述待测样品1~2微升注入到CP-Sil19CB毛细管色谱柱中,设置程序升温如下:
    初始温度80摄氏度,以40摄氏度/分钟升至214摄氏度,保持7分钟,以20摄氏度/分钟
    升至280摄氏度,保持7分钟,总时间为25.65分钟。柱流速1.2mL/分钟。第七步:结果
    计算。由此,可以由根据本发明实施例的方法提供前处理充分,杂质含量较少以及成份简
    单、利于气相色谱分析的所述待测样品,并且通过调节气相色谱相关参数,进而可以达到
    将残留农药成份准确定量的目的,从而提高根据本发明的实施例的方法的检测效果。

    在本发明的第二方面,本发明提出了一种检测液态乳制品中残留农药含量的方法。根
    据本发明的实施例,该方法包括:(1)利用乙腈对所述液态乳制品进行萃取,并收集乙腈
    有机相,其中,在所述萃取过程中,添加无机盐;(2)将所述乙腈有机相进行旋转干燥后,
    利用正己烷和水对所述旋转干燥后的剩余固体进行溶解,并收集正己烷有机相;(3)将所
    述正己烷有机相,用氮气进行吹扫,以便获得待测粗品;(4)利用固相萃取柱对所述待测
    粗品进行纯化,以便获得洗脱液;(5)将所述洗脱液与乙二醇混合,并用氮气进行吹扫,
    以便获得待测样品;以及(6)通过色谱法,对所述待测样品进行检测,以便确定所述液态
    乳制品中残留农药的含量。由此,通过根据本发明实施例的方法中的萃取过程,能够有效
    的将待检测的液态乳制品中的残留农药成份提取出来,并且通过加入正己烷以及水对萃取
    所得的残留农药成份进行进一步提取以及除杂,进而可以降低待测粗品中的杂质含量,进
    而提高后续分析效果;此外,通过利用固相萃取柱对所述待测粗品进行进一步纯化,有利
    于所述待测粗品中杂质的进一步除去,以便获得具有杂质含量低、成份简单的洗脱液;在
    洗脱液中加入乙二醇,能够避免洗脱液在氮气吹扫过程中完全吹干引起的残留农药成份损
    失,从而提高检测的回收率。因此,利用根据本发明的实施例的方法对残留农药的含量进
    行检测,能够达到节省前处理步骤、提高检测的准确性。

    根据本发明的实施例,步骤(1)进一步包括:(1-1)将所述液态乳制品与乙腈、无机
    盐混合后进行第一离心,并分别获得第一有机相和第一水相;(1-2)将所述第一水相与乙
    腈混合后进行第二离心,并收集第二有机相;以及(1-3)将所述第二有机相与所述第一有
    机相合并得到所述乙腈有机相。由此,通过采用乙腈对所述液态乳制品进行萃取,可以达
    到提取所述乳制品中残留农药成份的目的。并且,通过在上述过程中加入无机盐,能够提
    高乙腈萃取有机农药残留成份的效果。此外,通过对(1-1)中形成的第一水相进行再次萃
    取,能够进一步提高对所述待测乳制品中农药残留成份的提取效果,进而提高根据本发明
    实施例的方法的检测效果。

    根据本发明的实施例,步骤(2)进一步包括:(2-1)将所述乙腈有机相置于旋转蒸发
    瓶中进行旋转蒸干;(2-2)向经过所述旋转蒸干的所述旋转蒸发瓶中加入正己烷对所述旋
    转蒸发瓶进行冲洗,随后向所述旋转蒸发瓶中加入水进行第一震摇后静置分层,并分别获
    得第三有机相和第二水相;(2-3)将所述第二水相与正己烷混合后进行第二震摇,静置分
    层并收集第四有机相;以及(2-4)将所述第三有机相与所述第四有机相合并,以便获得所
    述正己烷有机相。由此,可以通过正己烷的加入,较好的溶解经过旋转蒸干的残留农药提
    取物。并且,通过加入水对所述旋转蒸发瓶进行冲洗,能够在溶解残留农药提取物的过程
    中对可溶于水的部分待测乳制品中的杂质进行溶解分离,并可以将步骤(1)中加入的无机
    盐从残留农药提取物中分离出来,进而达到除杂的目的,从而进一步提高根据本发明实施
    例的方法的后续检测效果。

    根据本发明的实施例,步骤(4)中采用弗罗里硅土SPE柱。由此,可以有所述弗罗里
    硅土SPE柱为根据本发明的实施例的所述待测粗品进行固相萃取净化,从而达到进一步分
    离乙腈等有机溶剂以及残留农药成份的目的,进而进一步提高根据本发明实施例的方法的
    检测效果。

    根据本发明的实施例,在步骤(4)中使用第一洗脱剂和第二洗脱剂,所述第一洗脱剂
    和所述第二洗脱剂均包括正己烷和三氯甲烷,其中,在所述第一洗脱剂中所述正己烷与三
    氯甲烷的体积比为9:1,在所述第二洗脱剂中,所述正己烷与三氯甲烷的体积比为4:1。
    由此,可以由上述洗脱剂对注入到所述弗罗里硅土SPE柱中的待测粗品进行洗脱,从而达
    到分离提纯的目的。

    根据本发明的实施例,基于9~11克所述液态乳制品,在步骤(1-1)中,所述乙腈的
    用量为20ml,所述无机盐包括3.5~4.5克硫酸镁和1.0~1.5克氯化钠,所述混合是通过涡旋
    1分钟进行的,所述第一离心是按照4000~5000rpm的转速进行4~6分钟;在步骤(1-2)
    中,所述乙腈的用量为10ml;在步骤(2-1)中,所述旋转蒸干是在48~52摄氏度的温度下
    进行的;在步骤(2-2)中,所述正己烷的用量为9毫升,所述水的用量为9毫升,所述第
    一震摇进行1分钟;在步骤(2-3)中,所述正己烷的用量为6毫升,所述第二震摇进行1
    分钟;在步骤(3)中,在48~52摄氏度的温度下,用氮气进行吹干;在步骤(4)中,所
    述弗罗里硅土SPE柱被预先活化,所述活化是通过向所述弗罗里硅土SPE柱中依次添加3ml
    正己烷和3ml所述第一洗脱剂而进行的;在步骤(4)中,依次采用6ml所述第一洗脱剂和
    3ml所述第二洗脱剂进行洗脱;以及在步骤(5)中,所述乙二醇的用量为10微升,采用
    氮气在48~52摄氏度的温度下进行吹扫,并且用1ml正己烷对残留物进行震荡溶解,利用
    0.45微米的滤膜进行过滤,选择所得到的滤液作为所述待测样品,所述残留农药包括选自
    下列的至少之一:α-666,β-666,γ-666,δ-666,p,p’-DDE,p,p’-DDD,o,p’-DDT,p,p’-DDT,
    七氯,环氧七氯,顺式氯丹,反式氯丹,氧化氯丹,α-硫丹,β-硫丹,硫丹硫酸盐以及狄试
    剂,以及所述液态乳制品包括牛奶。由此,可以通过调节上述测试调节,例如加入有机溶
    剂的量、无机盐的质量、离心参数以及弗罗里硅土SPE柱活化等参数步骤,进一步提高根
    据本发明实施例的方法的分离提纯效果,从而提高根据本发明实施例的方法的检测效果。

    根据本发明的实施例,在步骤(6)中,所述色谱法为气相色谱法。由此,可以由气相
    色谱法为根据本发明的实施例的方法提供检测手段。此外,由于气相色谱法采用气体作为
    流动相,因此待检测组分可以很快在流动相以及固定相之间达到分配平衡;并且由于气相
    色谱法的固定相选择多种多样,因而可以达到快速分析并且具有较高的分离效率,进而可
    以进一步提高根据本发明实施例的方法的检测效果。

    根据本发明的实施例,所述气相色谱法采用CP-Sil19CB毛细管色谱柱、VF-1701ms毛
    细管色谱柱或DB-1701毛细管色谱柱。由此,可以由通过毛细管柱作为所述气相色谱的固
    定相,为根据本发明的实施例的方法提供检测手段。此外,由于根据本发明实施例的方法
    具有良好的样品前处理效果,气相色谱上机前样品中杂质含量少,成份不复杂,因而根据
    本发明的实施例的方法可以选用上述3种毛细管色谱柱中的任意一种,进而达到方便、快
    捷的实现对所述残留农药的含量进行检测的目的。

    根据本发明的实施例,所述气相色谱法采用下列条件:进样口温度260摄氏度~280摄
    氏度,检测器温度300摄氏度,载气为氮气,尾吹气为氮气,针对CP-Sil19CB毛细管色谱
    柱,设置设置初始温度为80摄氏度,保持2分钟,以40摄氏度/分钟升温至214摄氏度,
    保持7分钟,以20摄氏度/分钟升温至280摄氏度,保持7分钟,总时间为25.65分钟,其
    中载体流速为1.2ml/分钟,尾吹气流速为28ml/分钟。

    针对VF-1701ms毛细管色谱柱或DB-1701毛细管色谱柱,设置初始温度为90摄氏度,
    保持1分钟,以40摄氏度/分钟升温至170摄氏度,保持5分钟,以6摄氏度/分钟升温至
    242摄氏度,保持7分钟,以40摄氏度/分钟升温至270摄氏度,保持7分钟,总时间为
    39~42分钟,其中,柱流速为1.0ml/分钟,尾吹气流速为29.0ml/分钟。由此,可以通过对
    上述色谱条件以及程序升温的温度、时间的调控,达到使不同组分的残留农药成份在气相
    色谱的毛细管柱中通过分配分开,进而达到将不同成份的农药残留分离并定量检测的目的,
    从而提高根据本发明实施例的方法的检测效果。

    附图说明

    图1显示了根据本发明一个实施例的检测液态乳制品中残留农药含量的方法的流程示
    意图;

    图2显示了根据本发明另一个实施例的检测液态乳制品中残留农药含量的方法的流程
    示意图;

    图3显示了根据本发明又一个实施例的检测液态乳制品中残留农药含量的方法的流程
    示意图;

    图4显示了根据本发明又一个实施例的检测液态乳制品中残留农药含量的方法的流程
    示意图;

    图5显示了根据本发明又一个实施例的检测液态乳制品中残留农药含量的方法的流程
    示意图;

    图6显示了根据本发明又一个实施例的检测液态乳制品中残留农药含量的方法的流程
    示意图;

    图7和图8显示了实施例1的气相色谱图;

    图9和10显示了实施例2的气相色谱图;

    图11和12显示了对比例1的气相色谱图;

    图13、图14和图15显示了对比例2的气相色谱图;以及

    图16、图17和图18显示了对比例3的气相色谱图。

    具体实施方式

    下面详细描述本发明的实施例,所述实施例的示例在附图中示出,其中自始至终相同
    或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描
    述的实施例是示例性的,仅用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。

    需要说明的是,术语“第一”、“第二”仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示相对重
    要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此,限定有“第一”、“第二”的特征可以明
    示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地,在本发明的描述中,除非另有说明,
    “多个”的含义是两个或两个以上。

    本发明是基于发明人的以下发现而完成的:

    对于多种有机残留农药含量的测定,国家标准GB/T 5009.19-2008以及国家标准GB/T
    5009.162-2008中规定的基于气相色谱的检测方法均存在前处理操作复杂,消耗有机溶剂多,
    检测时间长,上机杂质干扰多,且回收率偏低等问题。并且,由于上机杂质干扰较多,上
    述国家标准不能实现同时将多种农药残留的气相色谱峰分开,进而严重影响检测效果。

    发明人发现,在前期对样品处理阶段,有机试剂萃取提取的残留农药浓缩液中含有大
    量杂质以及萃取过程中加入的无机盐成份,造成浓缩液浑浊、成份复杂,不利于后续分析
    检测。发明人经过大量实验发现,在此过程中通过添加正己烷和水对上述浓缩成份进行萃
    取,能够将大部分可溶于水的杂质以及无机盐成份溶解在水相中进而除去,由此提高前处
    理效果。此外,由于检测过程中由于残留农药成份多为有机物,易挥发,常常造成待测残
    留农药的损失,严重影响分析效果。发明人通过实验发现,在进行氮气吹扫浓缩之前,通
    过在待测样品中加入少量的?;ぜ?,即乙二醇,可以大大缓解由于挥发造成的待测残留农
    药损失,从而提高分析效果。

    基于上述发现,在本发明的第一方面,本发明提出了一种检测液态乳制品中残留农药
    含量的方法。根据本发明的实施例,参考图1,该方法包括:

    S100萃取

    根据本发明的实施例,在S100中,通过在待测液态乳制品中加入乙腈,对上述乳制品
    进行萃取,并在萃取过程中加入无机盐,提取静置分层后形成的乙腈有机相。由此,可以
    通过乙腈以及待测液态乳制品混合,借助相似相容原理将有机农药残留成份提取出来。此
    外,在萃取过程中添加的无机盐能够造成同离子相应,提高分配比,进而进一步提高乙腈
    萃取残留农药成份的效果。

    本领域技术人员能够理解,在S100萃取中使用的有机萃取剂不受特别限制,本领域技
    术人员可以根据实际待检测的乳制品的具体成份选择适当的萃取剂进行对残留农药的萃
    取。例如,根据本发明的实施例,当该液态乳制品为牛奶时,可以选择乙腈作为萃取剂,
    从而达到将残留农药从液态乳制品中分离出来的效果。

    此外,根据本法明的实施例,参考图2,S100可以进一步包含以下步骤:

    S110第一离心

    根据本发明的实施例,基于9~11g的液态乳制品,采用20ml乙腈进行萃取。并且,在
    液态乳制品和乙腈混合溶液中加入3.5~4.5克硫酸镁和1.0~1.5克氯化钠。将上述液态乳制
    品、乙腈以及无机盐混合物通过涡旋1分钟进行充分混合后,按照4000~5000rpm的转速进
    行第一离心,离心时间可以为4~6分钟。然后将经过第一离心的液态乳制品、乙腈和无机
    盐的混合物静置,使该混合物分层,形成第一有机相以及第一水相。由此,可以通过上述
    乙腈以及无机盐实现对液态乳制品中残留农药的高效提取,并通过适当的涡旋时间以及第
    一离心进行充分混合,进而可以提高乙腈对液态乳制品中残留农药的萃取效果,从而提高
    根据本发明实施例的方法的检测效果。

    S120第二离心

    根据本发明的实施例,在S110形成的第一水相中加入10ml乙腈进行再次萃取,静置
    形成第二有机相。由此,可以通过对第一水相的再次萃取,将经过S110后留在第一水相中
    的残留农药成份提取出来,从而完成对残留农药的浓缩,进而提高根据本发明实施例的检
    测方法的后续检测效果以及检测的准确性。

    S130乙腈有机相

    根据本发明的实施例,在该步骤中,通过将S110中的第一有机相以及S120中的第二
    有机相进行混合,形成乙腈有机相。由此,通过将两次萃取所得到的有机相进行混合,达
    到将待测液态乳制品中的残留农药最大程度的提取出来的目的。

    S200收集正己烷有机相

    根据本发明的实施例,将S100中形成的乙腈有机相转移到旋转蒸发瓶中进行旋转蒸
    干,然后利用正己烷和水对上述旋转蒸发瓶中蒸干后的含有残留农药的乙腈有机相进行溶
    剂,并收集正己烷有机相。由此,可以通过旋转蒸干除去大部分的乙腈,剩余的残留农药
    用正己烷和水形成的溶液进行重新溶解、萃取,将残留农药溶解在正己烷中,可溶性杂质
    以及无机盐通过水相除去。由此,可以对S100中萃取出的残留农药进行进一步净化,进而
    提高后续分析检测的效率以及效果。

    根据本发明的实施例,参考图3,S200还可以通过以下步骤实现:

    S210旋转蒸干

    根据本发明的实施例,在该步骤中,将S100形成的乙腈有机相转移到旋转蒸发瓶中,
    并在48~52摄氏度的水浴温度下对上述乙腈有机相进行旋转蒸干。由此,可以通过旋转蒸
    发除去乙腈有机相中的乙腈溶剂部分,剩余残留农药。从而减少后续检测样品中的成分,
    进而提高后续分析检测效果。

    S220第一震摇

    根据本发明的实施例,在S210进行旋转蒸发的旋转蒸发瓶中加入9ml正己烷以及9ml
    水进行冲洗,对上述正己烷以及水的混合冲洗溶液进行震摇混合。根据本发明的实施例,
    可以通过震摇1分钟的方式实现正己烷以及水的充分混合和残留农药成分的充分溶解。随
    后通过静置分层,分别获得第三有机相和第二水相。取出第三有机相备用,第二水相继续
    进行后续处理步骤。在该步骤中,发明人发现,如果仅使用正己烷对旋转蒸发瓶进行冲洗,
    由于液态乳制品中含有的水溶性杂质以及S100中加入的无机盐无法除去,会造成旋转蒸发
    瓶中有白色颗粒物质析出,并且冲洗后的正己烷溶液呈浑浊状态,严重影响后续处理步骤。
    发明人通过实验惊奇的发现,通过分别采用正己烷以及水对旋转蒸发瓶进行冲洗,由于水
    的加入,可以溶解大部分水溶性杂质以及几乎全部的无机盐成份,进而通过后续静置分层
    使杂质以及无机盐与残留农药分开。因此,采用根据本发明实施例的方法可以大幅降低处
    理后第三有机相中的杂质含量,进而提高后续检测效果。

    S230第二震摇

    根据本发明的实施例,在S220形成的第二水相中加入6ml正己烷,通过震摇1分钟充
    分混合,并静置分层,收集第四有机相。由此,可以通过在第二水相中再次加入正己烷,
    进一步提取残留在第二水相中的残留农药成份,进而提高经过处理的残留农药含量,从而
    提高根据本发明的实施例的检测方法的检测效果以及准确性。

    S240正己烷有机相

    在该步骤中,根据本发明的实施例,通过将S220形成的第三有机相以及S230形成的
    第四有机相进行混合,得到正己烷有机相。由此,通过将上述第三有机相以及第四有机相
    混合,得到含有杂质含量较低的正己烷有机相,从而提高后续处理效果,进而进一步提高
    根据本发明实施例的方法的检测效果。

    S300获得待测粗品

    根据本发明的实施例,将S200中形成的正己烷有机相通过氮气吹干,获得待测粗品。
    其中,氮气吹干是通过氮气吹干仪在48~52摄氏度的水浴温度下进行的。由此,可以通过
    氮气吹干,将正己烷有机相中的大部分正己烷除去,获得待测粗品,进而可以提高后续处
    理效果。

    S400纯化

    根据本发明的实施例,在该步骤中,通过固相萃取柱对S300形成的待测粗品进行纯化,
    获得洗脱液。本领域技术人员能够理解,上述固相萃取柱的种类并不受特别限制,本领域
    技术人员可以根据待测液态乳制品的种类和成份选择适当的固相萃取柱完成S400的纯化
    步骤。优选地,根据本发明的实施例,选择弗罗里硅土SPE柱作为固相萃取柱来完成S400
    的纯化步骤。由此,可以通过S400纯化步骤降低待测粗品中除残留农药成份外的杂质成份,
    例如前面各个步骤中引入的有机溶剂等,进而提高后续色谱分析的检测效果。

    根据本发明的实施例,参考图4,S400还可以通过以下步骤实现:

    S410活化

    根据本发明的实施例,弗罗里硅土SPE柱使用前首先经过活化处理。本领域技术人员
    能够理解,上述活化处理的方法不受具体限制,本领域人员可以采用熟悉的试剂以及方法
    对弗罗里硅土SPE柱进行活化处理。具体地,根据本发明的实施例,可以采用依次向弗罗
    里硅土SPE柱中注入3ml正己烷和3ml第一洗脱剂实现的。其中,第一洗脱剂为正己烷和
    三氯甲烷的混合液,并且正己烷和三氯甲烷具有9:1的体积比。由此,可以达到对弗罗里
    硅土SPE柱进行活化的目的,从而提高后续净化处理效果。

    S420第一洗脱剂洗脱

    根据本发明的实施例,在该步骤中,向经过S410活化的弗罗里硅土SPE柱中注入S300
    形成的待测粗品,随后,采用6ml第一洗脱剂对盛放待测粗品的容器进行冲洗,将冲洗后
    的第一洗脱剂倒入弗罗里硅土SPE柱进行洗脱。由此,可以通过第一洗脱剂对待测粗品中
    进行洗脱,洗脱后的溶液中含有的杂质成份较少,分离效果较好,并且第一洗脱剂可以将
    极性较小的组分,例如α-666以及p,p’-DDD洗脱出来。由此,可以提高第一洗脱剂的洗脱
    效果,进而提高后续净化处理效果。

    S430第二洗脱剂洗脱

    根据本发明的实施例,在该步骤中,采用3ml第二洗脱剂对盛放待测粗品的容器进行
    冲洗,将冲洗后的第二洗脱剂倒入弗罗里硅土SPE柱进行洗脱。其中,第二洗脱剂为具有
    体积比为4:1的正己烷和三氯甲烷混合液。由此,可以通过第二洗脱剂对待测粗品中进行
    洗脱,并且第二洗脱剂可以将极性较大的组分,例如狄氏剂洗脱出来。由此,可以提高第
    二洗脱剂的洗脱效果,进而提高后续净化处理效果。

    S440获得洗脱液

    根据本发明的实施例,在该步骤中,收集S420以及S430中从弗罗里硅土SPE柱中流
    出的洗脱液,以备后续检测步骤使用。由此,可以通过收集全部的洗脱液,获得杂质含量
    较少、便于后续色谱分析的洗脱液,进而提高后续处理效果。

    S500获得待测样品

    根据本发明的实施例,将洗脱液与乙二醇进行混合后,采用氮气进行吹扫。用正己烷
    对所得到的混合物进行震荡溶解,从而获得待测样品。由此,可以通过氮气吹扫过程除去
    大部分有机溶剂,并且通过乙二醇的加入,?;げ辛襞┮┎辉诤笮觳夤讨杏捎诨臃⒃?br />成大量损失,进而避免了对检测结果的负面影响,提高了根据本发明实施例的方法的检测
    效果。

    根据本发明的实施例,参考图5,S500可以进一步包含以下步骤:

    S510氮气吹干

    根据本发明的实施例,在该步骤中,首先在洗脱液中加入10微升乙二醇,然后进行氮
    气吹扫处理。本领域技术人员能够理解,在S510中的氮气吹干的具体条件不受特别限制,
    只要能够满足根据本发明的实施例的要求,达到对洗脱液进行吹干处理并不造成残留农药
    的损失即可。具体地,根据本发明的实施例,氮气吹扫可以是通过氮气吹干仪在48~52摄
    氏度的水浴温度下进行的。由此,可以通过氮气吹扫,将前面各步骤中引入的有机相溶剂
    除去,进而可以提高后续处理效果。此外,加入乙二醇作为?;ぜ?,可以避免在氮气吹扫
    过程中洗脱液被完全吹干而造成残留农药成份大量损失,进而可以提高根据本发明实施例
    的检测方法的回收率。

    S520震荡溶解

    根据本发明的实施例,将经过氮气吹扫后的洗脱液残渣进行震荡溶解,使洗脱液残渣
    中的残留农药成份充分溶解在残留溶液中。由此,可以进一步提高根据本发明实施例的方
    法的检测准确性。

    S530过滤获得待测样品

    根据本发明的实施例,在该步骤中,采用0.45微米的滤膜对经过震荡溶解的含有残留
    农药成分的溶液进行过滤,由此可以除去震荡溶解步骤中未完全溶解的残渣部分,进而提
    高根据本发明的实施例的方法的检测效果。此外,本领域技术人员能够理解的是,在该步
    骤中所使用的过滤手段不受特别限制。本领域技术人员可以根据实际震荡溶解情况选择任
    何熟悉的过滤手段获得待测样品,只要能够满足根据本发明实施例的过滤效果,并不造成
    严重的待测样品损失即可。

    S600色谱法检测

    根据本发明的实施例,在S600中,采用配备电子捕获检测器的气相色谱对待测样品进
    行残留农药含量的色谱分析定量检测。并且,根据本发明的实施例,该气相色谱是通过毛
    细管柱作为固定相完成的。此外,由于前面描述的各个步骤为S600提供了杂质含量少、组
    成简单并且有利于色谱分析的待测样品,因此在S600中可以选择多种毛细管色谱柱作为固
    定相,并达到较好的定量分析效果。根据本发明的实施例,在S600中可以检测出的残留农
    药成分包括α-666,β-666,γ-666,δ-666,p,p’-DDE,p,p’-DDD,o,p’-DDT,p,p’-DDT,七
    氯,环氧七氯,顺式氯丹,反式氯丹,氧化氯丹,α-硫丹,β-硫丹,硫丹硫酸盐以及狄试剂、
    艾氏剂。并且,通过对S600中气相色谱的相关参数设置,可以达到同时准确检测出上述
    18种残留农药?;痪浠八?,在气相色谱定量分析中,待测样品中的上述18中残留农药的
    特征峰可以被完全的区分开。由此,可以通过具有快速分析以及准确定量检测性能的气相
    色谱为根据本发明实施例的方法提高可靠的定量检测结果。

    根据本发明的实施例,参考图6,S600可以进一步包含以下步骤:

    S610设置参数

    根据本发明的实施例,在气相色谱检测步骤,首先对气相色谱相关的各个参数进行设
    置。其中,此处提到的各个参数包括气相色谱法检测过程中涉及到的能够进行设置的所有
    参数。本领域技术人员能够理解,S610中设置的参数的具体数值不受特别限制,只要能够
    满足根据本发明的实施例,达到准确定量检测残留农药含量,并且将前面描述的18中残留
    农药的色谱峰完全分开即可。具体地,根据本发明的实施例,可以对气相色谱的参数进行
    如下设置:进样口温度260摄氏度~280摄氏度,检测器温度300摄氏度,载气为氮气,尾
    吹气为氮气。由此,可以通过S610为根据本发明的实施例的气相色谱法检测残留农药含量
    提供范围适当的参数设置,由此进一步提高气相色谱法分析的准确性以及定量效果。

    S620程序升温

    根据本发明的实施例,在该步骤中,通过设置程序升温的具体参数,达到使气相色谱
    的色谱柱温度按照设定的梯度进行升温,使待测样品中的各个组分的沸点与柱温相互对应,
    进而达到分离沸点不同的各个组分的目的,使色谱峰分布均匀。程序升温是决定气相色谱
    法分析效果的关键步骤之一,因此,本领域技术人员可以根据实际待测样品的具体情况对
    S620中程序升温的温度梯度以及升温速度进行调节。具体地,根据本发明的实施例,针对
    不同的毛细管色谱柱,可以设定不同的升温程序。例如,针对CP-Sil19CB毛细管色谱柱,
    设置初始温度为80摄氏度,保持2分钟,以40摄氏度/分钟升温至214摄氏度,保持7分
    钟,以20摄氏度/分钟升温至280摄氏度,保持7分钟,总时间为25.65分钟,其中载体流
    速为1.2ml/分钟,尾吹气流速为28ml/分钟。针对VF-1701ms毛细管色谱柱或DB-1701
    毛细管色谱柱,设置初始温度为90摄氏度,保持1分钟,以40摄氏度/分钟升温至170摄
    氏度,保持5分钟,以6摄氏度/分钟升温至242摄氏度,保持7分钟,以40摄氏度/分钟
    升温至270摄氏度,保持7分钟,其中,总时间为39~42分钟,柱流速为1.0ml/分钟。由
    此,可以通过对上述色谱条件以及程序升温的温度、时间的调控,达到使不同组分的残留
    农药成份在气相色谱的毛细管柱中通过分配分开,进而达到将不同成份的农药残留分离并
    定量检测的目的,从而提高根据本发明实施例的方法的检测效果。

    S630色谱分析

    根据本发明的实施例,在S630色谱分析步骤,利用氮气作为载气,选用毛细管色谱柱
    以及电子捕获器作为检测器,对待测样品中的各个残留农药组分的含量进行定量。由此,
    可以通过适当的参数设定,达到完全分离前面描述的18种农药成分的色谱峰的目的。根据
    本发明的实施例,具体地,利用外标法对上述待测样品进行定量分析。例如,根据本发明
    的实施例,首先配制具有已知浓度的含有特定农药成分的溶液作为标准工作液,根据获得
    的待测样品中的残留农药峰面积,根据下列公式对各个残留农药组分进行定量计算:


    其中,Ai为待测样品中各个残留农药的峰面积;C为标准工作液的浓度,单位为μg/mL;
    V为残留物溶液的体积,为1.00mL;As为标准工作液中农药残留的峰面积;m为残留物
    溶液的质量,单位为g。

    由此,通过上述公式以及S630获得的待测样品的色谱峰,对残留农药进行定量检测,
    进而达到准确定量的检测上述18中残留农药在液体乳制品中的含量的目的。

    下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员能够理解,下面的实施
    例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的,
    按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注
    明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。

    在下面的实施例中,如果没有明确说明,则采用仪器和耗材为:

    气相色谱仪:配电子捕获检测器。

    旋转蒸发仪:配真空系统和加热装置。

    天平:感量为1mg(称量样品)和0.1mg(称量标准品)。

    氮吹仪:水浴温度为48~52摄氏度。

    离心机:最高转速可达到5000转/分钟。

    涡旋混合器。

    玻璃试管:推荐采用规格为15×150mm和18×180mm。

    佛罗里硅藻土SPE净化小柱:500mg/3mL。

    CP-Sil19CB毛细管色谱柱:50m×0.25mm×0.20μm,或具有同等性能的毛细管色谱柱;
    30m×0.32mm×0.25μm,或具有同等性能的毛细管色谱柱。另外,如果30m色谱柱能够满足
    根据本发明实施例的要求,可不采用50m色谱柱。

    VF-1701ms毛细管色谱柱,安捷伦公司(Agilent):30m×0.32mm×0.25μm,或具有同
    等性能的毛细管色谱柱。

    DB-1701毛细管色谱柱,安捷伦公司(Agilent):30m×0.25mm×0.25μm,或具有同等性
    能的毛细管色谱柱。

    试剂和药品:

    氯化钠、硫酸镁(MgSO4·7H2O或者无水硫酸镁)均为分析纯。

    除特殊规定外,根据本发明的实施例所用的乙腈,三氯甲烷,正己烷、乙二醇有机溶
    剂均为色谱纯,实验用水应符合GB/T 6682三级水的要求。

    实施例1

    第一步,将待测液体乳制品样品混匀,准确称量10.000g于50mL离心管中,加入20mL
    乙腈,然后加入4g硫酸镁和1g氯化钠,涡旋1分钟,并在4000rpm条件下进行4分钟的
    第一离心处理。静置分层后,获得第一有机相和第一水相。随后,第一水相中再加入10mL
    乙腈,通过第二离心混合充分。根据本发明的实施例,第二离心的时间以及转速不受具体
    限制,只要能够满足充分混合第一水相以及乙腈即可。静置分层后,将第二有机相以及第
    一有机相合并,得到乙腈有机相。

    第二步,将乙腈有机相50摄氏度的水浴条件下旋转蒸干。然后在旋转蒸发瓶中加入约
    9mL的正己烷,冲洗旋转瓶,再加入约9mL水,进行1分钟的第一震摇,待溶液分层清晰
    后,获得第三有机相以及第二水相。下层第二水相中再加入约6mL的正己烷,进行1分钟
    的第二震摇,静置分层,获得第四有机相。

    第三步,将第四有机相与第三有机相合并,并用氮气在50摄氏度的水浴条件下中吹至
    约1mL,获得待测粗品,待用。

    第四步,利用弗罗里硅土SPE柱对待测粗品进行纯化。其中,弗罗里硅土SPE柱首先
    进行活化:在SPE柱中加入约3mL正己烷,然后再加入约3mL第一洗脱剂。将上述待测
    粗品涡旋30秒后,注入弗罗里硅土SPE柱中。当待测粗品溶液快要流干时,在盛放样品
    的玻璃试管中加入约6mL第一洗脱剂进行冲洗,再将上述第一洗脱剂倒入弗罗里硅土SPE
    柱,然后在盛放样品的玻璃试管中加入约3mL第二洗脱剂进行冲洗,再将上述第二洗脱剂
    倒入弗罗里硅土SPE柱,待所有洗脱剂流干后,弃去弗罗里硅土SPE柱,收集全部洗脱液。

    第五步,在所述洗脱液中准确加入10微升的乙二醇,并用氮气在48~52摄氏度的水浴
    条件下吹扫完正己烷之后,准确加入1.00毫升正己烷,在涡旋混合器上充分振荡溶解残留
    物,经0.45μm有机系滤膜过滤后,获得待测样品,待用。

    第六步,设置气相色谱参数如下:进样口温度280摄氏度,检测器温度300摄氏度,
    载气为氮气,尾吹气为氮气。以正己烷配制浓度已知的含有前面描述的18种残留农药的混
    合标准工作液。并将待测样品1微升注入到VF-1701ms毛细管色谱柱中,设置初始温度为
    90摄氏度,保持1分钟,以40摄氏度/分钟升温至170摄氏度,保持5分钟,以6摄氏度/
    分钟升温至242摄氏度,保持7分钟,以40摄氏度/分钟升温至270摄氏度,保持7分钟,
    其中,总时间为38分钟,柱流速为1.0ml/分钟。

    第七步:结果计算。得到样品溶液中18种残留农药的峰面积,然后通过以下公式计算
    残留农药含量:


    其中,Ai为待测样品中各个残留农药的峰面积;C为标准工作液的浓度,单位为μg/mL;
    V为残留物溶液的体积,为1.00mL;As为标准工作液中农药残留的峰面积;m为残留物
    溶液的质量,单位为g。

    如图7、图8所示,采用上述方法通过气相色谱可以将18种残留农药成份的色谱峰完
    全分开并准确定量。图7和图8出峰顺序为:(1)α-666 13.752min(2)γ-66615.282min(3)艾氏
    剂15.996min(4)七氯16.933min(5)β-666 17.955min(6)δ-666 18.728min(7)氧化氯丹19.013
    min(8)环氧七氯19.361min(9)α-硫丹20.229min(10)反式氯丹20.407min(11)顺式氯丹20.674
    min(12)p,p’-DDE 20.930min(13)狄试剂21.574min(14)o,p’-DDT 22.786min、
    (15)p,p’-DDD24.405min(16)β-硫丹24.762min(17)p,p’-DDT 25.316min(18)硫丹硫酸盐
    29.718min。因此,采用根据本发明实施例的方法进行液态乳中残留农药的检测,可以对多
    种残留农药成份进行区分并准确定量,进而提高了根据本发明实施例的方法检测残留农药
    的效率以及效果。

    此外,为了说明根据本发明的实施例的检测方法的优点,下面对根据GB/T 5009.19-2008
    第一法得到的回收率与根据实施例1得到的回收率进行比较:

    表1 18种农药残留加标回收率实验结果(μg/Kg)


    由表1提供的以上数据可以看出,实施例1回收率有较大的提高。

    实施例2

    第一步,将待测液体乳制品样品混匀,准确称量10g于50mL离心管中,加入20mL
    乙腈,然后加入4.2g硫酸镁和1.2g氯化钠,涡旋1分钟,并在4500rpm条件下进行5分
    钟的第一离心处理。静置分层后,获得第一有机相和第一水相。随后,第一水相中再加入
    10mL乙腈,通过第二离心混合充分。根据本发明的实施例,第二离心的时间以及转速不受
    具体限制,只要能够满足充分混合第一水相以及乙腈即可。静置分层后,将第二有机相以
    及第一有机相合并,得到乙腈有机相。

    第二步,将乙腈有机相50摄氏度的水浴条件下旋转蒸干。然后在旋转蒸发瓶中加入约
    9mL的正己烷,冲洗旋转瓶,再加入约9mL水,进行1分钟的第一震摇,待溶液分层清晰
    后,获得第三有机相以及第二水相。下层第二水相中再加入约6mL的正己烷,进行1分钟
    的第二震摇,静置分层,获得第四有机相。

    第三步,将第四有机相与第三有机相合并,并用氮气在50摄氏度的水浴条件下中吹至
    约1mL,获得待测粗品,待用。

    第四步,利用弗罗里硅土SPE柱对待测粗品进行纯化。其中,弗罗里硅土SPE柱首先
    进行活化:在SPE柱中加入约3mL正己烷,然后再加入约3mL第一洗脱剂。将上述待测
    粗品涡旋30秒后,注入弗罗里硅土SPE柱中。当待测粗品溶液快要流干时,在盛放样品
    的玻璃试管中加入约6mL第一洗脱剂进行冲洗,再将上述第一洗脱剂倒入弗罗里硅土SPE
    柱,然后在盛放样品的玻璃试管中加入约3mL第二洗脱剂进行冲洗,再将上述第二洗脱剂
    倒入弗罗里硅土SPE柱,待所有洗脱剂流干后,弃去弗罗里硅土SPE柱,收集全部洗脱液。

    第五步,在所述洗脱液中准确加入10微升的乙二醇,并用氮气在48~52摄氏度的水浴
    条件下吹扫完正己烷之后,准确加入1.00毫升正己烷,在涡旋混合器上充分振荡溶解残留
    物,经0.45μm有机系滤膜过滤后,获得待测样品,待用。

    第六步,设置气相色谱参数如下:进样口温度280摄氏度,检测器温度300摄氏度,
    载气为氮气,尾吹气为氮气。以正己烷配制浓度已知的含有前面描述的18种残留农药的混
    合标准工作液。并将待测样品1微升注入到CP-Sil19CB毛细管色谱柱,设置初始温度为
    80摄氏度,保持2分钟,以40摄氏度/分钟升温至170摄氏度,保持4分钟,以23摄氏度
    /分钟升温至242摄氏度,保持10分钟,以40摄氏度/分钟升温至270摄氏度,保持5分钟
    总时间为27.08分钟,其中载体流速为1ml/分钟,尾吹气流速为29ml/分钟

    第七步:结果计算。得到样品溶液中18种残留农药的峰面积,然后通过以下公式计算
    残留农药含量:


    其中,Ai为待测样品中各个残留农药的峰面积;C为标准工作液的浓度,单位为μg/mL;
    V为残留物溶液的体积,为1.00mL;As为标准工作液中农药残留的峰面积;m为残留物
    溶液的质量,单位为g。

    如图9和图10所示,采用CP-Sil19CB毛细管色谱柱,也可以将18种残留农药成份的
    色谱峰完全分开并准确定量。图9和图10出峰顺序为:(1)α-666 7.713min(2)γ-666 8.348min
    (3)艾氏剂8.709min(4)七氯9.276min(5)β-666 9.888min(6)δ-666 10.589min(7)
    氧化氯丹10.690min(8)环氧七氯11.186min(9)α-硫丹12.168min(10)反式氯丹12.359
    min(11)顺式氯丹12.681min(12)p,p’-DDE 13.024min(13)狄试剂13.783min(14)
    o,p’-DDT 15.481min(15)p,p’-DDD17.416min(16)β-硫丹17.597min(17)p,p’-DDT 18.193
    min(18)硫丹硫酸盐20.741min。因此,采用根据本发明实施例的方法进行液态乳中残留
    农药的检测,可以对多种残留农药成份进行区分并准确定量,进而提高了根据本发明实施
    例的方法检测残留农药的效率以及效果。

    此外,为了说明根据本发明的实施例的检测方法的优点,下面对根据GB/T
    5009.162-2008第二法得到的回收率与根据实施例2得到的回收率进行比较:

    表2 18种农药残留加标回收率实验结果(μg/Kg)


    由表2提供的以上数据可以看出,实施例2回收率有较大的提高。

    明显地,国标GB/T5009.19-2008中程序升温条件下(初始温度为90摄氏度,保持1
    分钟,以40摄氏度/分钟升温至170摄氏度,保持5分钟,以2.3摄氏度/分钟升温至230
    摄氏度,保持17分钟,以40摄氏度/分钟升温至280摄氏度,保持5分钟,总时间为57.34
    分钟,柱流速为1.0ml/分钟,尾吹气为25ml/分钟)采用气相色谱检测样品的时间约为57
    分钟,国标GB/T5009.162-2008第二法(初始温度为60摄氏度,保持1分钟,以40摄氏
    度/分钟升温至170摄氏度,保持5分钟,以2摄氏度/分钟升温至235摄氏度,保持5分钟,
    以40摄氏度/分钟升温至280摄氏度,保持5分钟,总时间为52.38分钟,柱流速为1.0ml/
    分钟,尾吹气为50ml/分钟)中程序升温条件下采用气相色谱检测样品的时间约为53分钟;
    而本发明中实施例1的检测时间为38分钟,实施例2的检测时间约为26分钟,与上述国
    标检测时间相比,根据本发明实施例的检测时间明显缩短,进而提高了根据本发明实施例
    的方法的检测效率。

    对比例1

    为了说明根据本发明实施例的检测方法中,在第二步中使用水冲洗旋转蒸发瓶对盐分
    等杂质的去除作用,下面引入对比例进行具体说明。对比例1中的检测方法与实施例2相
    同,但在第二步中,不采用水对旋转蒸发瓶进行清洗。

    参考图11、图12,通过对比实施例2以及对比例1可以发现,当不使用水对旋转蒸发
    瓶进行清洗时,由于无机盐以及部分易溶于水的杂质不能除去,因此采用对比例2的方法
    得到的气相色谱图谱中包含多个杂质峰,进而对依靠气相色谱对残留农药的定量分析产生
    负面影响。

    对比例2

    为了说明在根据本发明实施例的检测方法中,在第五步中添加乙二醇作为?;ぜ恋淖?br />用,下面引入对比例进行具体说明。对比例2中的检测方法与实施例2相同,但在第五步
    中,在经过弗罗里硅土SPE柱处理待吹扫的待测样品中没有加入乙二醇,并继续进行后续
    处理。

    表3 对比例2以及实施例2气相色谱对积峰面积比较

    组分名称
    对比例3峰面积
    实施例2峰面积
    α-六六六
    894081
    1012779
    γ-六六六
    759584
    917985
    艾氏剂
    1636103
    1855900
    七氯
    988308
    1137488
    β-666
    311433
    319394
    δ-666
    293583
    297883
    氧化氯丹
    101245
    116393
    环氧七氯
    1466977
    1550040
    α-硫丹
    1220197
    1376529
    反式氯丹
    469454
    502489
    顺式-氯丹
    142021
    150977
    p,p’-DDE
    1175866
    1286121

    狄氏剂
    1402493
    1635565
    o,p’-DDT
    393318
    471987
    p,p’-DDD
    761936
    905985
    β-硫丹
    969354
    1218417
    p,p’-DDT
    422709
    575830
    硫丹硫酸酯
    1522547
    1718053

    参考图13、图14以及图15,通过对比实施例2以及对比例2以发现,当不加入乙二
    醇作为?;ぜ潦?,含有残留农药的待测样品因易挥发,会在检测过程有较多损失。参考表
    3,不加入乙二醇作为?;ぜ恋亩员壤?中的各个残留农药成份的峰面积与采用实施例2的
    方法得到的气相色谱峰面积相比,均明显减小。由此,不加入乙二醇作为?;ぜ潦?,待测
    样品中的残留农药成份由于挥发损失,导致气相色谱峰面积失真,进而对依靠气相色谱对
    残留农药的定量分析产生负面影响。图13、图14和图15出峰顺序为:(1)α-66611.184min
    (2)γ-66612.549min(3)艾氏剂13.379min(4)七氯14.643min(5)β-666 15.797min(6)
    δ-666 16.757min(7)氧化氯丹17.040min(8)环氧七氯17.402min(9)α-硫丹18.144min
    (10)反式氯丹18.237min(11)顺式氯丹18.416min(12)p,p’-DDE 18.536min(13)狄
    试剂19.015min(14)o,p’-DDT 19.649min(14)p,p’-DDD 20.453min(16)β-硫丹20.753min
    (17)p,p’-DDT 20.915min(18)硫丹硫酸盐22.959min。

    对比例3

    为了说明根据本发明实施例的程序升温设定对于检测结果的影响,下面引入对比例3
    进行具体说明。对比例3的具体检测步骤与实施例1相同,在第六步,设置气相色谱参数
    时,对程序升温做如下设置(GB/T5009.162-2008第二法):初始温度为60摄氏度,保持1
    分钟,以40摄氏度/分钟升温至170摄氏度,保持5分钟,以2摄氏度/分钟升温至235摄
    氏度,保持5分钟,以40摄氏度/分钟升温至280摄氏度,保持5分钟,总时间为52.38分
    钟,柱流速为1.0ml/分钟,尾吹气为50ml/分钟。参考图16、图17、图18,与实施例1
    相比,采用对比例3中方法进行气相色谱检测,由于在程序升温过程中的参数设置不合理,
    因此无法将上述18种残留农药成份分开。图16、图17和图18出峰顺序为:(1)α-666
    20.259min(2)γ-66623.359min(3)艾氏剂24.792和24.820min(4)七氯26.883min(5)
    β-666 29.634min(6)δ-666 31.458min(7)氧化氯丹32.095min(8)环氧七氯32.767min
    (9)α-硫丹34.901min(10)反式氯丹35.454min(11)顺式氯丹36.115min(12)p,p’-DDE
    36.893min(13)狄试剂38.046min(14)o,p’-DDT 40.738min(14)p,p’-DDD 43.859min
    (16)β-硫丹44.212min(17)p,p’-DDT 45.504min(18)硫丹硫酸盐48.925min。需要说
    明的是,在本发明的各个方面中所描述的特征和效果可以互相适用,在此不再赘述。

    在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“另一个实施例”等的描述意指结合该实
    施例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例中。在本说明
    书中,对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体
    特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,
    在不相互矛盾的情况下,本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以
    及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

    尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,
    不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例
    进行变化、修改、替换和变型。

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    本文标题:检测液态乳制品中残留农药含量的方法.pdf
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