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    一种 免疫球蛋白 检测 试剂盒 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201611234777.X

    申请日:

    2016.12.28

    公开号:

    CN106771148A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/543申请日:20161228|||公开
    IPC分类号: G01N33/543 主分类号: G01N33/543
    申请人: 广州华弘生物科技有限公司
    发明人: 陈立国; 邹伟权; 张亚丽; 李庆祥; 母润红; 王涛; 苏焱
    地址: 510530 广东省广州市高新技术产业开发区科学城伴河路84号自编二栋101
    优先权:
    专利代理机构: 北京精金石专利代理事务所(普通合伙) 11470 代理人: 刘晔
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201611234777.X

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.03.06|||2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明属于生物技术领域,具体涉及一种免疫球蛋白M检测试剂盒及检测方法,包括试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白M标准品,所述试剂R1包括第一缓冲液20~300mmol/L、促进剂5~50mmol/L、聚乙二醇??400??0.5~10g/L和氯化钠5~50g/L;所述试剂R2包括第二缓冲液20~300mmol/L、抗人免疫球蛋白M抗体包被的磁微粒10~50%w/v、氯化钠5~50g/L和稳定剂0.5~10g/L。与现有的试剂盒相比,本发明试剂盒具有更高的特异性、准确度、精密度和稳定性,适于大范围推广应用。

    权利要求书

    1.一种免疫球蛋白M检测试剂盒,其特征在于,包括试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白M标准
    品,所述试剂R1包括第一缓冲液20~300mmol/L、促进剂5~50mmol/L、聚乙二醇-400 0.5~
    10g/L和氯化钠5~50g/L;所述试剂R2包括第二缓冲液20~300mmol/L、抗人免疫球蛋白M抗
    体包被的磁微粒10~50%w/v、氯化钠5~50g/L和稳定剂0.5~10g/L。
    2.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述第一缓冲液、所述第二缓冲液选自PBS
    缓冲液、Tris缓冲液和醋酸盐缓冲液中的一种。
    3.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述促进剂由非极性氨基酸和CHAPS按1:
    (0.5~2)的重量比在组成。
    4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述非极性氨基酸选自苯丙氨酸、亮氨酸
    和缬氨酸中的一种或几种。
    5.如权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述非极性氨基酸由苯丙氨酸和亮氨酸按
    1:(0.02~0.1)的重量比在组成。
    6.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述稳定剂包括以下重量份数的组份:聚
    乙烯吡咯烷酮0.05~2份、二硫苏糖醇0.01~0.1份、无机盐0.1~2份、牛血清白蛋白0.05~
    2份和甘油1~2份。
    7.如权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述无机盐选自氯化钙、氯化钠、氯化钾、
    溴化钙、溴化钠、溴化钾、硫酸钠和硫酸钾中的一种或几种。
    8.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂R1和所述试剂R2的pH均为6~10。
    9.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述抗人免疫球蛋白M抗体包被的磁微粒
    由以下步骤制得:
    将磁微粒用MES缓冲液分散,使磁微粒的浓度为60~90mg/m,加入1-(3-二甲氨基丙
    基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺,搅拌后加入抗人免疫球蛋白M抗体,搅拌好混合
    均匀,室温下孵育10~24h,分离磁微粒,即得。
    10.一种利用如权利要求1~9任一所述的试剂盒检测免疫球蛋白M含量的方法,其特征
    在于,包括以下步骤:
    A)取2μl待测样品,加入250μl所述试剂R1,孵育3~6min后得到吸光度A1,加入50μl所
    述试剂R2反应3~6min后得吸光度A2,计算ΔA;
    B)使用所述免疫球蛋白M标准品绘制标准曲线,并根据ΔA和标准曲线得到待测样品中
    免疫球蛋白M的含量。

    说明书

    一种免疫球蛋白M检测试剂盒及检测方法

    技术领域

    本发明属于生物技术领域,具体涉及一种免疫球蛋白M检测试剂盒及检测方法。

    背景技术

    免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质,主要存在于血浆中,也见于其他体液、
    组织和一些分泌液中。免疫球蛋白分为五类,即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免
    疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)。其中,IgM是五类免疫球蛋白中
    分子量最大的一种。其分子量为9×105道尔顿,故又称为巨球蛋白。在正常人血清中的平均
    浓度为60~180mg%,约占血清总免疫球蛋白的6%。IgM的升高常见于巨球蛋白血症、细菌
    和寄生虫传染病、肝脏疾病、类风湿性关节炎及胆囊纤维症等。IgM的减少常见于原发性无
    丙种球蛋白血症,非IgA和IgG型多发性骨髓瘤,霍奇金病,慢性淋巴细胞白血病,蛋白丧失
    性胃肠病等。

    目前临床上使用较为广泛的免疫球蛋白A的检测方法为酶联免疫吸附法和高效液
    相色谱法,酶联免疫吸附法操作过程复杂,耗时长,且对操作人员有较高的专业技术要求
    高,而且检测不准确。而随着生化检测技术的不断改进和完善,由于比浊法用于免疫球蛋白
    测定,具有快速、准确、就爱你百纳、易于自动化等优点,正日益受到人们的关注。

    如中国专利申请CN104407159A公开了一种免疫球蛋白IgM免疫比浊法检测试剂
    盒,它包含试剂R1、试剂R2和校准品,其中试剂R1组成为:pH7.6Tris缓冲液、氯化钠、聚乙二
    醇400、二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒;试剂R2组成为:pH 7.6Tris缓冲液、羊抗人IgM抗体、
    牛血清白蛋白、Kathon-CG。该试剂盒通过在试剂R1中加入一定量的二氧化硅包覆的磁性纳
    米颗粒和在试剂R2中加入一定量的牛血清白蛋白和Kathon-CG,有效的提高了试剂盒的稳
    定性和分析灵敏度,其线性范围也较好,试剂的准确度高,有利于在市场中进一步的推广使
    用。但是该试剂盒忽略了磁颗粒的聚集现象,在实际应用中,磁颗粒倾向于黏附于反应器内
    壁,降低了免疫反应,从而导致试剂盒的灵敏度下降,另外,该试剂盒抗原和抗体的结合不
    够稳定,易解离,特异性不强。

    中国专利申请CN105572384A公开了一种高性价比的人血液免疫球蛋白G检测试剂
    盒,包括试剂2,所述试剂2为标记有兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体的胶乳颗粒溶液;其中,
    所述胶乳颗粒粒径范围为40nm~120nm,每升试剂2中抗体的用量为20ml~30ml。但是该试
    剂盒未能解决抗体在稀溶液中稳定性的问题。

    因此,有必要提供一种灵敏度高、特异性强、准确度高、稳定性高的试剂盒。

    发明内容

    为了解决现有技术中存在的技术问题,本发明的目的在于提供一种免疫球蛋白M
    检测试剂盒,其解决了因磁微粒倾向聚集的现象和抗体不稳定导致现有的试剂盒的特异性
    和稳定性不高的问题。

    本发明提供了一种免疫球蛋白M检测试剂盒,包括试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白M
    标准品,所述试剂R1包括第一缓冲液20~300mmol/L、促进剂5~50mmol/L、聚乙二醇-400
    0.5~10g/L和氯化钠5~50g/L;所述试剂R2包括第二缓冲液20~300mmol/L、抗人免疫球蛋
    白M抗体包被的磁微粒10~50%w/v、氯化钠5~50g/L和稳定剂0.5~10g/L。

    进一步地,所述第一缓冲液、所述第二缓冲液选自PBS缓冲液、Tris缓冲液和醋酸
    盐缓冲液中的一种。

    进一步地,所述促进剂由非极性氨基酸和CHAPS按1:(0.5~2)的重量比在组成。

    进一步地,所述促进剂由非极性氨基酸和CHAPS按1:0.8的重量比在组成。

    进一步地,所述非极性氨基酸选自苯丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸中的一种或几种。

    进一步地,所述非极性氨基酸由苯丙氨酸和亮氨酸按1:(0.02~0.1)的重量比在
    组成。

    进一步地,所述非极性氨基酸由苯丙氨酸和亮氨酸按1:0.06的重量比在组成。

    进一步地,所述稳定剂包括以下重量份数的组份:聚乙烯吡咯烷酮0.05~2份、二
    硫苏糖醇0.01~0.1份、无机盐0.1~2份、牛血清白蛋白0.05~2份和甘油1~2份。

    进一步地,所述稳定剂包括以下重量份数的组份:聚乙烯吡咯烷酮1.2份、二硫苏
    糖醇0.06份、无机盐1.5份、牛血清白蛋白1份和甘油1.5份。

    进一步地,所述无机盐选自氯化钙、氯化钠、氯化钾、溴化钙、溴化钠、溴化钾、硫酸
    钠和硫酸钾中的一种或几种。

    进一步地,所述无机盐选自氯化钙。

    进一步地,所述试剂R1和所述试剂R2的pH均为6~10。

    进一步地,所述抗人免疫球蛋白M抗体包被的磁微粒由以下步骤制得:

    将磁微粒用MES缓冲液分散,使磁微粒的浓度为60~90mg/m,加入1-(3-二甲氨基
    丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺,搅拌后加入抗人免疫球蛋白M抗体,搅拌好混
    合均匀,室温下孵育10~24h,分离磁微粒,即得。

    除外,本发明还提供了一种利用上述免疫球蛋白M检测试剂盒检测免疫球蛋白M含
    量的方法,包括以下步骤:

    A)取2μl待测样品,加入250μl所述试剂R1,孵育3~6min后得到吸光度A1,加入50μ
    l所述试剂R2反应3~6min后得吸光度A2,计算ΔA;

    B)使用所述免疫球蛋白M标准品绘制标准曲线,并根据ΔA和标准曲线得到待测样
    品中免疫球蛋白M的含量。

    免疫比浊法的测试原理为:样本中免疫球蛋白M抗原与抗人免疫球蛋白M抗体包被
    的磁微粒产生抗原抗体反应的凝集反应,形成抗原抗体复合物,其浊度的变化通过测定特
    定波长的吸光度值,即可得出免疫球蛋白M的含量。

    发明人在实践过程中发现,当样本发生溶血时,血细胞内部的一些物质流入反应
    系统内,其可以引起磁微粒的非特异性聚集,具体地说是容易使磁微粒在反应容器内壁上
    黏附,严重影响了测试的进行和降低了免疫反应。经过不懈地努力,发明人发现了一种促进
    剂,其一方面可以有效避免磁微粒的聚集现象,另一方面,惊奇地,其可以有效促进抗原和
    抗体的结合,并且两者的结合稳定,提高了试剂盒的特异性。优选地,促进剂由非极性氨基
    酸和CHAPS按1:(0.5~2)的重量比在组成,更优选地,由非极性氨基酸和CHAPS按1:0.8的重
    量比在组成。其中,非极性氨基酸由苯丙氨酸和亮氨酸按1:(0.02~0.1)的重量比在组成。
    虽然促进剂能有效促进抗原和抗体的结合的机理不明,但发明人认为可能是因为在反应过
    程中,非极性氨基酸围绕在抗原抗体周围,使得抗原抗体分子上的疏水决定簇在水中不易
    形成氢键,而倾向于彼此间的相互吸引,促进了抗原与抗体之间的疏水性作用,而抗原抗体
    的疏水作用结合比氢键结合更具有高度特异性,因此能够使试剂盒的特异性提高。

    另外,本发明还提供了一种稳定剂,其解决了抗体在稀溶液中稳定性不高这一难
    题,其能够使抗体保持稳定,且不会影响抗体的性质,从而提高了试剂盒的稳定性。

    与现有技术相比,本发明试剂盒具有以下优势:

    1)本发明提供了一种免疫球蛋白M检测试剂盒,其具有准确度高、特异性好、精密
    度高、稳定性优异的优点。

    2)本发明通过加入了促进剂,其一方面可以有效避免磁微粒的聚集现象,另一方
    面,可以有效促进抗原和抗体的结合,并且两者的结合稳定,提高了试剂盒的特异性;另外
    通过加入稳定剂,使本发明试剂盒在4℃的条件下保存6个月后,准确度、精密度、特异性仍
    然保持不变,具有优异的稳定性。

    具体实施方式:

    以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明,但这并非是对本发明的限
    制,本领域技术人员根据本发明的基本思想,可以做出各种修改或改进,但是只要不脱离本
    发明的基本思想,均在本发明的范围之内。

    本发明磁微粒内核为四氧化三铁纳米粒子,购于西安金磁纳米生物技术有限公
    司,免疫球蛋白M购自北京索宝科技有限公司;CHAPS购自上海研晶生物科技有限公司,CAS
    号为75621-03-3;抗人免疫球蛋白M抗体购自上海金标生物有限公司。

    实施例1、一种免疫球蛋白M检测试剂盒

    本发明实施例1所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白M标准品,所述试剂
    R1包括:Tris缓冲液50mmol/L、促进剂15mmol/L、聚乙二醇-400 5g/L和氯化钠20g/L;所述
    试剂R2包括:Tris缓冲液50mmol/L、抗人免疫球蛋白M抗体20%w/v、氯化钠2g/L和稳定剂
    5g/L。所述促进剂由非极性氨基酸和CHAPS按1:0.8的重量比在组成,所述非极性氨基酸由
    苯丙氨酸和亮氨酸按1:0.06的重量比在组成,所述稳定剂由以下重量份数的组份组成:聚
    乙烯吡咯烷酮1.2份、二硫苏糖醇0.06份、无机盐1.5份、牛血清白蛋白1份和甘油1.5份。

    制备方法:

    A)抗人免疫球蛋白M抗体包被的磁微粒的制备:将磁微粒用3ml的MES缓冲液分散,
    使磁微粒的浓度为80mg/m,加入0.1mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和0.3mg N-
    羟基琥珀酰亚胺,搅拌后加入1mg抗人免疫球蛋白M抗体,搅拌好混合均匀,室温下孵育12h,
    分离磁微粒,得磁微粒;。

    B)免疫球蛋白M标准品的制备:用生理盐水将浓度为400U/L的免疫球蛋白M稀释成
    6个不同浓度的免疫球蛋白M标准品,其浓度分别为:0U/L、50U/L、100U/L、200U/L、300U/L和
    400U/L,然后将免疫球蛋白D校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌,在2~8℃下保存;

    C)按上述组分和含量配制好试剂,分装,即得。

    实施例2、一种免疫球蛋白M检测试剂盒

    本发明实施例2所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白M标准品,所述试剂
    R1包括:Tris缓冲液20mmol/L、促进剂5mmol/L、聚乙二醇-400 0.5g/L和氯化钠5g/L;所述
    试剂R2包括:Tris缓冲液20mmol/L、抗人免疫球蛋白M抗体10%w/v、氯化钠5g/L和稳定剂
    0.5g/L。所述促进剂由非极性氨基酸和CHAPS按1:0.5的重量比在组成,所述非极性氨基酸
    由苯丙氨酸和亮氨酸按1:0.02的重量比在组成,所述稳定剂由以下重量份数的组份组成:
    聚乙烯吡咯烷酮0.05份、二硫苏糖醇0.01份、无机盐0.1份、牛血清白蛋白0.05份和甘油1
    份。

    制备方法如实施例1。

    实施例3、一种免疫球蛋白M检测试剂盒

    本发明实施例3所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白M标准品,所述试剂
    R1包括:Tris缓冲液300mmol/L、促进剂50mmol/L、聚乙二醇-400 10g/L和氯化钠50g/L;所
    述试剂R2包括:Tris缓冲液300mmol/L、抗人免疫球蛋白M抗体50%w/v、氯化钠50g/L和稳定
    剂10g/L。所述促进剂由非极性氨基酸和CHAPS按1:2的重量比在组成,所述非极性氨基酸由
    苯丙氨酸和亮氨酸按1:0.1的重量比在组成,所述稳定剂由以下重量份数的组份组成:聚乙
    烯吡咯烷酮2份、二硫苏糖醇0.06份、无机盐1.5份、牛血清白蛋白1份和甘油1.5份。

    制备方法如实施例1。

    实施例4、本发明试剂盒检测方法

    a)采用上述试剂盒,使用免疫球蛋白M校准品在全自动生化分析仪上通过内置
    logit-log(4p)曲线拟合模式拟合标准曲线;

    b)取2μl待测样品于反应杯中,加入250μl试剂R1,混合均匀,将混合后的溶剂在37
    ℃的条件下孵育5min,读取吸光度A1;

    c)加入50μl试剂R2反应5min后得吸光度A2,计算吸光度变化值ΔA=A2-A1;

    d)根据样本中免疫球蛋白M的活性

    式中:ΔAT是以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值;ΔAs是以空白管吸光度作
    对照的标准品吸光度值;Cs为标准品中免疫球蛋白M的浓度。

    对比例1、一种免疫球蛋白M检测试剂盒

    对比例1与实施例1的区别在于:不含有促进剂,其余参数与操作如实施例1所示。

    对比例2、一种免疫球蛋白M检测试剂盒

    对比例2与实施例1的区别在于:本发明促进剂为CHAPS,其余参数与操作如实施例
    1所示。

    对比例3、一种免疫球蛋白M检测试剂盒

    对比例3与实施例1的区别在于:本发明促进剂由苯丙氨酸和亮氨酸按1:0.06的重
    量比在组成,其余参数与操作如实施例1所示。

    对比例4、一种免疫球蛋白M检测试剂盒

    对比例4与实施例1的区别在于:所述稳定剂不包括甘油,其余参数与操作如实施
    例1所示。

    对比例5、一种免疫球蛋白M检测试剂盒

    对比例5与实施例1的区别在于:所述稳定剂不包括二硫苏糖醇,其余参数与操作
    如实施例1所示。

    试验例一、性能测试

    1.1准确度测试取实施例1~3所述试剂盒按照实施例4所述检测方法分别对质控
    品1和质控品2进行测定,其中质控品1中免疫球蛋白M的浓度为1.57g/L,质控品2中免疫球
    蛋白M的浓度为1.85g/L,每个试剂盒重复测定三次,测定结果如表1和表2所示。

    表1本发明试剂盒对质控品1的测定结果

    组别
    第1次(g/L)
    第2次(g/L)
    第3次(g/L)
    平均值(g/L)
    偏差(%)
    实施例1
    1.56
    1.55
    1.57
    1.56
    0.64%
    实施例2
    1.55
    1.57
    1.56
    1.56
    0.64%
    实施例3
    1.53
    1.55
    1.57
    1.55
    1.2%

    表2本发明试剂盒对质控品2的测定结果

    组别
    第1次(g/L)
    第2次(g/L)
    第3次(g/L)
    平均值(g/L)
    偏差(%)
    实施例1
    1.84
    1.84
    1.85
    1.843
    0.37%
    实施例2
    1.83
    1.85
    1.84
    1.84
    0.54%
    实施例3
    1.84
    1.86
    1.83
    1.84
    0.54%

    由表1和表2可知,本发明免疫球蛋白M检测试剂盒准确度高,对质控品1和质控品2
    的检测偏差较小,综合来说,实施例1所述试剂盒准确度更高,为最佳的实施例。

    1.2精密度测试取本发明实施例1~3所述试剂盒按照实施例4所述检测方法对同
    一待测样本中免疫球蛋白M的含量进行多次反复测定,对所得的结果进行标准偏差SD和变
    异系数CV计算,结果如表3所示。

    表3本发明试剂盒对同一待测样本进行多次反复测定的测定结果

    组别










    均值
    SD
    CV%
    实施例1
    1.84
    1.83
    1.81
    1.80
    1.83
    1.82
    1.82
    1.83
    1.84
    1.83
    1.825
    0.012
    0.6
    实施例2
    1.83
    1.82
    1.80
    1.80
    1.82
    1.81
    1.82
    1.83
    1.84
    1.83
    1.82
    0.013
    0.7
    实施例3
    1.82
    1.80
    1.82
    1.84
    1.80
    1.85
    1.82
    1.86
    1.84
    1.83
    1.828
    0.019
    1.08

    由表3可知,本发明实施例1~3所述试剂盒的精密度好,变异系数小。

    1.3特异性测试

    1.3.1特异性:用本发明实施例1~3以及对比例1~3所述试剂盒分别检测健康献
    血员血清186份,检测结果如表4所示。

    表4检测结果



    由表4可知,用本发明实施例1~3所述试剂盒检测健康血清186例,检出阳性1~2
    例,阳性率为0.54~1.08%,结果差异无显著性,试剂盒的特异性为98.92~99.46%,其中,
    以实施例1所述试剂盒特异性最高,为99.46%。

    值得说明的是,对比例1不含有促进剂,其制备得到的试剂盒检测健康血清186例,
    检出阳性15例,与实施例1相比,特异性下降了7.52%。对比例2和对比例3改变了促进剂的
    组成,其特异性与实施例1相比均有明显下降。

    1.4稳定性测试

    取本发明实施例1以及对比例4~5所述试剂盒4℃下保存6个月,按照上述1.1~
    1.3所述方法测定试剂盒的准确度、精密度和特异性,检测结果表5所示。

    表5 4℃下保存6个月后稳定性检测结果



    准确度检测结果:本发明实施例1所述试剂盒在4℃的条件下保存6个月后,测定免
    疫球蛋白M浓度为1.54g/L的质控品1三次,测得平均值为1.54g/L,偏差为1.9%;测定免疫
    球蛋白M浓度为1.85g/L的质控品2三次,测得平均值为1.826g/L,偏差为1.29%。故认为本
    发明试剂盒在4℃的条件下保存6个月后,其准确度保持不变。对比例4所述试剂盒与实施例
    1所述试剂盒相比,不含有甘油,其在同样的条件下保存6个月后,其测定质控品1的偏差为
    12.1%,测定质控品2的偏差为10.6%,可认定为准确度有明显下降;对比例5所述试剂盒去
    掉了二硫苏糖醇,其所得试剂盒的准确度在同样的条件下保存同样时间后有明显下降,

    精密度检测结果:本发明实施例1所述试剂盒在4℃的条件下保存6个月后,其精密
    度良好,变异系数为0.8%,故可认为,本发明试剂盒在4℃的条件下保存6个月后,其精确度
    保持不变。同样地,对比例4和对比例5改变了稳定剂的组成,其精密度有所下降。

    特异性检测结果:本发明实施例1所述试剂盒在4℃的条件下保存6个月后,检测
    186份健康血清,检出阳性2例,阳性率为1.07%,与未保存前相比,阳性率增加了0.53%,基
    本保持一致。对比例4和对比例5所述试剂盒在同样的条件下保存相同的时间后,检测186份
    健康血清,分别检出阳性12例和10例,阳性率与实施例1相比分别提高了5.38%和4.3%。

    综上所述,本发明试剂盒由于稳定剂的存在,在4℃的条件下保存6个月后,其精密
    度、准确度和特异性基本保持不变,具有优异的稳定性。而改变了稳定剂的组成,对试剂盒
    的准确度影响最大,精密度和特异性也有所下降。

    试验例二、不同促进剂组成对磁微粒聚集现象的影响

    取实施例1以及对比例1~3所述试剂盒,利用各试剂盒按照实施例4所述检测方法
    对样本进行检测,目测反应过程中磁微粒反应杯上的黏附和聚集现象,记录结果如表6。

    表6结果

    组别
    磁微粒粒与反应容器的黏附
    磁微粒的聚集
    实施例1
    没有
    没有
    对比例1
    存在
    存在
    对比例2
    存在
    存在
    对比例3
    存在
    没有

    由上表可知,当存在促进剂时,磁微粒没有出现在反应容器内壁上黏附和相互聚
    集现象,且后续结果表明,磁微粒的存在对检测结果的准确性无不良影响。当不加入促进剂
    时,磁微粒在反应容器的内壁上有非常严重的黏附现象,且磁微粒之间相互聚集,所以后续
    洗涤过程中无法顺利的进行,故而可认为对检测结果的准确性产生了影响。值得说明的是,
    即使是改变促进剂的组成或者改变各组分的用量也会引起磁微粒的聚集,如当去掉非极性
    氨基酸时,磁微粒有明显的黏附和聚集现象,当去掉CHAPS时,容易使得磁微粒在反应容器
    内壁上黏附。

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    本文标题:一种免疫球蛋白M检测试剂盒及检测方法.pdf
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