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    重庆时时彩后四直选: 一种牛奶样品中二4氧化缩水甘油苯基甲烷的提取净化方法.pdf

    关 键 词:
    一种 牛奶 样品 氧化 缩水 甘油 苯基 甲烷 提取 净化 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201710023667.7

    申请日:

    2017.01.13

    公开号:

    CN106770787A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20170113|||公开
    IPC分类号: G01N30/02; G01N30/06 主分类号: G01N30/02
    申请人: 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所
    发明人: 熊琳; 褚敏; 阎萍; 高雅琴; 梁春年; 郭宪; 丁学智; 李维红; 杨晓玲; 吴晓云
    地址: 730000 甘肃省兰州市七里河区小西湖硷沟沿335号
    优先权:
    专利代理机构: 北京中恒高博知识产权代理有限公司 11249 代理人: 钟国
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201710023667.7

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开一种牛奶样品中二[4??(氧化缩水甘油)苯基]甲烷的提取净化方法,步骤如下:(1)牛奶样品用甲酸乙腈溶液提??;(2)向步骤(1)的提取液中加入无水硫酸镁和氯化钠,振荡,离心,得到上清液;(3)向步骤(2)得到的上清液中加入N??丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶和无水硫酸镁,振荡,离心,得到提取净化的二[4??(氧化缩水甘油)苯基]甲烷样品。本发明的牛奶样品预处理过程简单快捷、效率高、溶剂消耗量小,符合绿色化学和环?;У囊?、花费较少、节省大量的人力物力,适合于牛奶样品中二[4??(氧化缩水甘油)苯基]甲烷的快速检测。

    权利要求书

    1.一种牛奶样品中二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷的提取净化方法,步骤如下:
    (1)牛奶样品用甲酸乙腈溶液提??;
    (2)向步骤(1)的提取液中加入无水硫酸镁和氯化钠,振荡,离心,得到上清液;
    (3)向步骤(2)得到的上清液中加入N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶和无水硫酸
    镁,振荡,离心,得到提取净化的二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷样品。
    2.根据权利要求1所述的提取净化方法,其特征在于:步骤(1)中,所述甲酸乙腈溶液的
    甲酸浓度为0.1vt%。
    3.根据权利要求1所述的提取净化方法,其特征在于:步骤(1)采用超声提取,提取时间
    为10min。
    4.根据权利要求1所述的提取净化方法,其特征在于:步骤(2)中,所述无水硫酸镁和氯
    化钠的质量比为1:2。
    5.根据权利要求1所述的提取净化方法,其特征在于:步骤(3)中,所述N-丙基乙二胺、
    十八烷基硅烷键合硅胶和无水硫酸镁的质量比为1:1:2.5。
    6.一种检测牛奶样品中二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷含量的方法,步骤如下:
    (1)牛奶样品用甲酸乙腈溶液提??;
    (2)向步骤(1)的提取液中加入无水硫酸镁和氯化钠,振荡,离心,得到上清液;
    (3)向步骤(2)得到的上清液中加入N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶和无水硫酸
    镁,振荡,离心,液体吹干,得到的二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷样品再用乙腈溶液溶解,
    滤膜过滤,得待测样品;
    (4)待测样品采用带有荧光检测器的高效液相色谱仪检测,色谱柱为C18柱,流动相采用
    水和浓度为0.1vt%的甲酸乙腈溶液,激发波长235nm,发射波长为305nm。

    说明书

    一种牛奶样品中二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷的提取净化方法

    技术领域

    本发明属于食品安全领域,涉及牛奶样品中二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷有害
    物质的检测,特别是检测中牛奶样品的前处理方法。

    背景技术

    二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷作为一类外源性激素,越来越受到人们的关注。
    该化合物都具有与雌激素相类似的作用,可导致内分泌紊乱,性早熟等危害。由于自然环境
    或外包装材料中都可能含有该物质,从而导致它们迁移到牛奶当中的几率是非常大,因此
    它们对人体的健康威胁是巨大的。该物质熔点15℃(lit.),密度1.19 g/mL at 25℃
    (lit.),折射率n20/D 1.579(lit.),分子结构式如下:


    牛奶样品组分比较复杂,有害有机物含量极低,一般在ppm和ppb,而且还存在目标待测
    物的同系物、异构体、降解产物、代谢产物和轭合物影响,要想除去与目标物同时存在的杂
    质,减少色谱干扰峰,避免检测器和色谱柱污染,样品预处理十分重要,大约占工作量的70%
    左右。

    现有关于脂肪、蛋白质含量较高的食品中二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷的检测
    主要集中在肉类样品,暂未见有关牛奶样品的检测,该类样品的预处理主要采用固相萃取
    法(SPE),预处理过程一般是为:叔丁基甲醚提取--提取液吹干--正己烷/水萃取--固相萃
    取相,如“高效液相色谱-串联质谱法同时测定肉类罐头中双酚-二缩水甘油醚”,赵晓亚等,
    色谱,2012年第30卷第10期;“石墨烯固相萃取-液相色谱-质谱联用法测定食品接触材料中
    9 种双酚-二环氧甘油醚的迁移量”,龚强等,食品与生物技术学报,2014 年第33卷第12期;
    “多壁碳纳米管固相萃?。咝б合嗌祝势追ú舛ㄊ称方哟ゲ牧现兴樱费?br />甘油醚的迁移量”,吴新华等,色谱,2010年第28卷第11期。这种预处理方法由于使用时间比
    较长,工艺比较成熟,但是也存在步骤繁琐,固相萃取柱造价高,溶剂消耗量大的缺点,科研
    人员一直在寻找更加高效的替代方法。

    发明内容

    本发明要解决的技术问题是克服现有脂肪含量较高的食品中二[4-(氧化缩水甘
    油)苯基]甲烷检测过程样品预处理过程繁琐、成本高的缺陷,提供了一种牛奶样品中二[4-
    (氧化缩水甘油)苯基]甲烷的提取净化方法。

    为了解决上述技术问题,本发明提供了如下的技术方案:

    一种牛奶样品中二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷的提取净化方法,步骤如下:

    (1)牛奶样品用甲酸乙腈溶液提??;

    (2)向步骤(1)的提取液中加入无水硫酸镁和氯化钠,振荡,离心,得到上清液;

    (3)向步骤(2)得到的上清液中加入N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶和无水硫酸
    镁,振荡,离心,得到提取净化的二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷样品。

    优选地,步骤(1)中,所述甲酸乙腈溶液的甲酸浓度为0.1vt%。

    优选地,步骤(1)采用超声提取,提取时间为10min。

    优选地,步骤(2)中,所述无水硫酸镁和氯化钠的质量比为1:2。

    优选地,步骤(3)中,所述N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶和无水硫酸镁的
    质量比为1:1:2.5。

    一种检测牛奶样品中二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷含量的方法,步骤如下:

    (1)牛奶样品用甲酸乙腈溶液提??;

    (2)向步骤(1)的提取液中加入无水硫酸镁和氯化钠,振荡,离心,得到上清液;

    (3)向步骤(2)得到的上清液中加入N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶和无水硫酸
    镁,振荡,离心,液体吹干,得到的二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷样品再用乙腈溶液溶解,
    滤膜过滤,得待测样品;

    (4)待测样品采用带有荧光检测器的高效液相色谱仪检测,色谱柱为C18柱,流动相采
    用水和浓度为0.1vt%的甲酸乙腈溶液,激发波长235nm,发射波长为305nm。

    本发明的牛奶样品预处理过程简单快捷、效率高、溶剂消耗量小,符合绿色化学和
    环?;У囊?、花费较少、节省大量的人力物力,适合于牛奶样品中二[4-(氧化缩水甘
    油)苯基]甲烷的快速检测。

    附图说明

    附图用来提供对本发明的进一步理解,并且构成说明书的一部分,与本发明的实
    施例一起用于解释本发明,并不构成对本发明的限制。在附图中:

    图1是提取净化后二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷的色谱图。

    具体实施方式

    以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明,应当理解,此处所描述的优选实
    施例仅用于说明和解释本发明,并不用于限定本发明。

    1、仪器和试剂

    (1)仪器:高效液相色谱仪-荧光检测器、waters公司色C18谱柱、离心机、涡旋仪、振荡
    仪、氮吹仪、离心管、复合过滤头,注射器。

    (2)试剂:乙腈、甲酸、超纯水、N-丙基乙二胺(PSA)和十八烷基硅烷键合硅胶(C18)、
    氯化钠、无水硫酸镁。

    2、样品提取净化步骤

    用移液管准确量取牛奶样品(5±0.02 mL)装入15mL具塞离心管中,加入5 mL含有0.1%
    甲酸的乙腈,超声提取之后,加入1.0g无水硫酸镁和2.0g氯化钠,振荡5min。以10000 rpm的
    转速在10℃下离心5min。上清液转入另一含有PSA和 C18以及250 mg 无水硫酸镁的离心管
    中,涡旋30s,振荡2min之后,以10000 rpm的转速在10℃下离心5min。液体转移到另一干净
    离心管中,在50℃下氮吹到近干,再用1mL浓度55vt%的乙腈水溶液复溶,过0.22um复合滤膜
    到进样瓶中,上高效液相色谱仪测试。

    3、仪器方法的条件

    使用带有荧光检测器的高效液相色谱仪仪,色谱柱为Waters Xcharge C18 column
    (250mm×4.6mm, 5 μm,100A),流动相由水和含有0.1vt%甲酸的乙腈组成,流速为1.0 mL/
    min。荧光检测器激发检测波长为215-240 nm,发射波长为295-315。 进样体积为 20 μL,柱
    温为35±5℃。

    4、样品提取净化和检测器条件优化

    C18 净化牛奶中的脂肪,色素和维生素,PSA 能够净化牛奶中的碳水化合物和有机酸,
    乙腈可以使得牛奶中蛋白质析出,另外无机盐氯化钠和硫酸镁都具有盐析作用,可以进一
    步除去残存的蛋白质。

    (1)净化剂PSA和 C18用量

    以处理牛奶样品都为5.0±0.02 mL为例,实验中PSA和 C18按照1:1的质量比投料,其
    他条件相同,设置为5个PSA投料水平:0.025,0.05,0.1,0.2 和0.4 g。通过实验我们发现当
    PSA用量为0.1g时,目标化合物有最大的回收率。当用量较少的时候,净化效果不好,当用量
    过多的时候,对目标化合物的吸附作用较大,造成了不必要的损耗。最后选择净化5.0±
    0.02 mL牛奶样品时,使用PSA和C18的量分别为0.1g作为最优条件。

    (2)超声萃取时间

    超声萃取具有耗时短、效率高、简单、快捷的优点,我们对超声萃取时间进行了优化。采
    用单因素试验,其他条件不变,设置超声萃取时间为5个水平:5,10,15,20和25min。通过实
    验我们发现当萃取时间为10min,效率最高。时间缩短或者延长都会对实验效果产生不利影
    响。

    (3)荧光检测器波长

    荧光检测激发波长被设定为215, 220, 225, 230, 235, 240 和245 nm共7个水平,发
    射波长被设定为295, 300, 305, 310 和 315nm共5个水平,分别采用单因素实验,在保持
    其他条件不变的情况下,采用加标回收实验,改变激发波长和发射波长,测定目标化合物二
    [4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷的色谱峰高,当峰高最高的时候,该方法有最佳的灵敏度。通
    过实验发现。当激发波长为235nm时,目标化合物有最大峰高;当发射波长为305nm,目标化
    合物有最大峰高。因此,最后选定激发波长235nm,发射波长为305nm,为我们的最佳条件。

    (4)最佳样品提取净化条件和检测器条件

    用移液管准确量取牛奶样品(5±0.02 mL)装入15mL具塞离心管中,加入5 mL含有0.1%
    甲酸的乙腈,超声提取10min之后,加入1.0g无水硫酸镁和2.0g氯化钠,振荡5min。以10000
    rpm的转速在10℃下离心5min。上清液转入另一含有PSA和 C18各0.1g以及250 mg无水硫酸
    镁的离心管中,涡旋30s,振荡2min之后,以10000 rpm的转速在10℃下离心5min。液体转移
    到另一干净离心管中,50℃下氮吹到近干,再用1mL 浓度为55%的乙腈水溶液复溶,过0.22μ
    m复合滤膜到进样瓶中,上机测试。

    流动相由水和含有0.1vt%甲酸的乙腈组成,流速为1.0 mL/min, 进样体积为 20
    μL,柱温为35±5℃,荧光检测器激发波长235nm,发射波长为305nm。

    目标化合物二[4-(氧化缩水甘油)苯基]甲烷的色谱图如图1所示。

    5、方法的验证

    (1)准确度

    方法的准确度由加标回收试验确定。我们采用空白加标试验,选择空白的牛奶样品,按
    照高中低3个浓度(10, 50 and 100 μg/L)加入目标物标准溶液,利用建立起来的方法对加
    标样品进行前处理,并上高效液相色谱仪测定,按照测得浓度,计算加标回收率。通过日内
    和日间加标实验,我们得到目标化合物的回收率为75.82-93.86%,满足残留分析一般75-
    120%的要求。

    (2)精确度

    精确度由相对标准偏差(RSD,relative standard deviation)来确定。在日间实验(,
    每天平行测定6个水平加标样品,连续测定3天)和日内实验数(单日连续测定18个样品)据
    来确定,结果为3.6-10.9%,满足残留分析一般小于15%。

    (3)灵敏度

    灵敏度由最低检出限(LOD,limit of detection)和最低定量限(LOQ,limit of
    Quantitation)来确定,LOD定性分析时用3倍性噪比表示,LOQ定量分析使用10倍信噪比表
    示。通过加标实验,得到最低检出限(LOD)为2.5μg/L,最低定量限(LOQ)为8.4μg/L,符合残
    留检测的要求。

    最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,
    尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可
    以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。
    凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的
    ?;し段е?。

    关于本文
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