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    重庆时时彩10分钟走势: 一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法.pdf

    关 键 词:
    一种 测定 鱼饲料 姜黄 含量 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201611043767.8

    申请日:

    2016.11.11

    公开号:

    CN106770710A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20161111|||公开
    IPC分类号: G01N30/02 主分类号: G01N30/02
    申请人: 中国水产科学研究院长江水产研究所
    发明人: 刘永涛; 艾晓辉; 杨红; 董靖; 胥宁; 杨移斌; 杨秋红
    地址: 430223 湖北省武汉市东湖新技术开发区武大园一路8号
    优先权: 2016.01.20 CN 2016100352546
    专利代理机构: 武汉宇晨专利事务所 42001 代理人: 王敏锋
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201611043767.8

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法,其步骤:A、取鱼饲料于离心管中,加入试剂A,振荡,超声,离心;B、转移提取液,再向原离心管中加入试剂A重复提取一次,合并提取液于125??mL旋转浓缩瓶中,浓缩至干;C、向旋转浓缩瓶中加入试剂B复溶旋转浓缩瓶中的残渣;D、转移复溶液至离心管中,氮气吹干;E、向离心管中加入溶液C和试剂D,振荡,离心,取下层液体过滤,UPLC??TUV测定,采用鱼饲料基质标准曲线计算鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量。该方法操作简单、快速、准确、灵敏度高、易于推广。适于测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量。

    权利要求书

    1.一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法,其步骤是:
    A、鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素采用试剂A 15-30 mL提取,
    经旋转蒸发仪将试剂挥干;
    B、再经试剂B 1~10 mL复溶旋转蒸发后的残渣,将复溶溶液转移到一支10 mL塑料离心
    管中置40℃氮吹仪上氮吹至干,向10 mL塑料离心管中加入1 mL定容溶液C溶解塑料管中的
    残渣;
    C、再加入1 mL试剂D,涡旋振荡30 s,7000 r/min离心5 min,将上层液体弃去;
    D、用1 mL注射器吸取下层液体过0.22 μm聚醚砜水系滤头,过滤液:溶解有双去甲氧基
    姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的溶液C,1 mL放置到2 mL进样瓶中,超高效液相色谱紫
    外法测定,获得双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的色谱图,通过色谱图积分得
    出双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的峰面积;
    E、超高效液相色谱紫外法条件:流动相的有机相为试剂A,水相为溶液E,试剂A与溶液E
    的两者的体积比为1:1~2:3,流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,检测波长为430 nm,色谱柱:
    超高效液相色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18 ,进样量为5.0 μL,获得双去甲氧基姜黄素、去
    甲氧基姜黄素和姜黄素的色谱图,通过色谱图积分得出双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄
    素和姜黄素的峰面积,再将峰面积代入鱼饲料基质标准曲线方程,计算出鱼饲料中双去甲
    氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量;
    F、鱼饲料基质标准曲线的绘制,分别在不含双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜
    黄素的鱼饲料中添加系列浓度的双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素后得到系列
    浓度的鱼饲料基质标准,以其浓度分别为横坐标X1,X2,X3,双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜
    黄素、姜黄素的峰面积分别为纵坐标Y1,Y2,Y3,绘制鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基
    姜黄素、姜黄素的基质标准曲线,获得鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄
    素的基质标准曲线方程;
    G、将测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积值代入基质
    标准曲线中,计算得到鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量;鱼饲
    料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量超出本基质标准曲线的浓度范围,
    将前处理后得到的液体用定容溶液C稀释后进行测定,将测定值代入基质标准曲线方程计
    算得出浓度值再乘以稀释倍数即得到双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量;
    所述的试剂A为乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中任一种液体试
    剂;
    所述的试剂B为乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一种试剂;
    所述的溶液C为试剂A和溶液E按一定体积比混合而成的溶液;
    所述的溶剂D为乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一种试剂;
    所述的试剂F为甲酸、乙酸、氢氟酸、盐酸中的任一种试剂;
    所述的溶液E是试剂F与蒸馏水按体积比1:2000~1:250混合而成的溶液。
    2.根据权利要求1所述的一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法,其特征在于:所述的溶
    液C的配制为试剂A和溶液E按体积比1:1的比例混合。
    3.根据权利要求1所述的一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法,其特征在于:所述的溶
    液E的配制取50~400 μL的试剂F加入到100 mL蒸馏水中配制成溶液E,其浓度为0.05~0.4%
    体积比。
    4.根据权利要求1所述的一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法,其特征在于:所述的计
    算鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素采用鱼饲料基质标准曲线的计算:
    鱼饲料中双去甲氧基姜黄素含量的计算公式为X1=(Y1+1800.7)/309.65,浓度范围为10 μg/
    kg~10000 μg/kg;鱼饲料中去甲氧基姜黄素含量的计算公式为X2=(Y2+3340.6)/260.88,浓
    度范围为10 μg/kg~10000 μg/kg;鱼饲料中姜黄素含量的计算公式为X3=(Y3+14903)/
    1256.06,浓度范围为10 μg/kg~10000 μg/kg;X1为双去甲氧基姜黄素的含量,X2为去甲氧基
    姜黄素的含量,X3为姜黄素的含量;Y1为双去甲氧基姜黄素的峰面积,Y2为去甲氧基姜黄素
    的峰面积,Y3为姜黄素的峰面积。

    说明书

    一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法

    技术领域

    本发明属于分析测试领域,更具体涉及一种测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去
    甲氧基姜黄素和姜黄素含量的UPLC-TUV方法,它适用于测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、
    去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量。

    背景技术

    姜黄素,别名姜黄色素,包括双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素,具有
    ?;こφ衬?、抗氧化、抗炎、抑菌、降血脂、保肝、利胆等药理活性,3种成分的生理活性也有
    所不同,姜黄素的抗氧化活性大于去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素,去甲氧基姜黄素
    降血脂的活性明显高于姜黄素,双去甲氧基姜黄素在利胆及对内皮细胞生长的抑制作用方
    面,较去甲氧基姜黄素和姜黄素活性强。有研究表明,姜黄素在促进鱼类生长、提高鱼类消
    化酶活性和抗氧化力、增强免疫功能及改善肌肉品质和鱼体色泽方面具有一定作用:在鱼
    饲料中添加姜黄素可显著提高罗非鱼、虹鳟和草鱼的抗氧化能力;姜黄素可以促进大黄鱼
    的生长、增强大黄鱼皮肤与肌肉的着色;饲料中添加姜黄素可以显著提高草鱼肠道中蛋白
    酶和淀粉酶的活性,促进鱼体对营养物质的吸收;饲料中添加4%~6%的姜黄素还能够预
    防鱼肠炎病、小瓜虫病、赤皮病等疾病。由此可见姜黄素作为添加剂在鱼饲料中使用具有较
    好的应用前景和实用性,为有效测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄
    素3种成分各自的含量,建立一种有效的方法测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜
    黄素和姜黄素的含量是非常必要的。

    目前,国内外未见有关鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素含
    量测定方法的报道或申请专利。

    发明内容

    本发明目的是在于提供了一种测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素
    和姜黄素含量的方法。该测定方法所用试剂价格便宜,操作方便快捷,测定方法的准确性和
    灵敏度高,分析时间短。适于快速准确测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、甲氧基姜黄素和姜
    黄素的含量。

    为了实现上述的目的,本发明采用以下技术措施:

    一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法,其步骤是:

    A、鱼饲料(通威黄颡鱼配合饲料1号)中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素
    采用试剂A(15-30mL)提取,经旋转蒸发仪(予华YRE2000E)将试剂挥干;

    B、再经试剂B(1~10mL)复溶旋转蒸发后的残渣,将复溶溶液转移到一支10mL塑料离心
    管中置40℃氮吹仪(大森DS-K200型)上氮吹至干,向10mL塑料离心管中加入1mL定容溶液C
    溶解塑料管中的残渣;

    C、再加入1mL试剂D,涡旋振荡30s,7000r/min离心5min,将上层液体弃去;

    D、用1mL注射器吸取下层液体过0.22μm聚醚砜水系滤头,过滤液(溶解有双去甲氧基姜
    黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的溶液C,1mL)放置到2mL进样瓶(Waters,12×32mm,带盖)
    中,超高效液相色谱紫外法(UPLC-TUV)测定?;竦盟ゼ籽趸扑?、去甲氧基姜黄素和姜
    黄素的色谱图,通过色谱图积分得出双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的峰面
    积。

    E、超高效液相色谱紫外法(UPLC-TUV)条件:流动相的有机相为试剂A,水相为溶液
    E,试剂A与溶液E的两者的体积比为1:1~2:3,流速为0.3mL/min,柱温为30℃,检测波长为
    430nm,色谱柱:超高效液相色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm),进样量
    为5.0μL。采用鱼饲料基质标准曲线方程计算鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素
    和姜黄素的含量?;竦盟ゼ籽趸扑?、去甲氧基姜黄素和姜黄素的色谱图,通过色谱图
    积分得出双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的峰面积,再将峰面积代入鱼饲料
    基质标准曲线方程,计算出鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量。

    F、鱼饲料基质标准曲线的绘制,分别在不含双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素
    和姜黄素的鱼饲料中添加系列浓度的双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素后得到
    系列浓度的鱼饲料基质标准,以其浓度分别为横坐标X1,X2,X3,双去甲氧基姜黄素、去甲氧
    基姜黄素、姜黄素的峰面积分别为纵坐标Y1,Y2,Y3,绘制鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲
    氧基姜黄素、姜黄素的基质标准曲线,获得鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、
    姜黄素的基质标准曲线方程。

    G、将实际测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积值
    代入基质标准曲线中,计算得到鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含
    量;如果鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量超出本基质标准曲线
    的浓度范围,可将前处理后得到的液体用定容溶液C稀释后进行测定,并将测定值代入基质
    标准曲线方程计算得出浓度值再乘以稀释倍数即得到双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄
    素、姜黄素的含量。

    优选的,所述的试剂A中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中
    任一种液体试剂;

    优选的,所述的试剂B是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一
    种试剂;

    优选的,所述的溶液C是试剂A和溶液E按体积比1:1混合而成的溶液;

    优选的,所述的溶剂D是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一
    种试剂;

    优选的,所述的试剂F是甲酸、乙酸、氢氟酸、盐酸中的任一种试剂;

    优选的,所述的溶液E是试剂F与蒸馏水按体积比1:2000~1:250混合而成的溶液;

    所述的溶液C的配制方法:试剂A和溶液E按体积比1:1的比例混合而成。

    所述的溶液E的配制方法:取50~400μL的试剂F加入到100mL蒸馏水混匀,配制成
    溶液E,其浓度为0.05~0.4%(体积比)。

    本发明与现有技术相比,具有以下优点和效果:

    (1)该测定方法过程简单、操作方便、所用时间短(该测定方法测定一个鱼饲料中双去
    甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量只需2h)。

    (2)测定过程中使用的优选的试剂不仅提取、复溶效果好,而且价格低廉(测定1个
    鱼饲料所用试剂费用不足2元)。

    (3)流动相配制简单,检测方法消耗试剂少,分析时间短,且测定方法的准确度(见
    表1)和灵敏度高,分析一个样品需要消耗试剂1.5mL,仅为普通分析方法分析一个样品消耗
    试剂的1/12;该分析方法分析时间仅为5min,仅为普通分析方法分析时间的1/4;本分析方
    法的检测限为10μg/kg,定量限为25μg/kg。

    表1.鱼饲料空白中添加双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素测定含量及
    精密度结果



    附图说明

    图1为一种测定双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素标准溶液(浓度为
    100μg/L、100μg/L、100μg/L)的UPLC-TUV色谱图。

    其中,1-双去甲氧基姜黄素,2-去甲氧基姜黄素,3-姜黄素。

    图2为一种鱼饲料空白样品的UPLC-TUV色谱图。

    图3为一种鱼饲料空白样品中添加双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素
    的加标样品(加标浓度为100μg/kg)UPLC-TUV色谱图。

    其中,1-双去甲氧基姜黄素,2-去甲氧基姜黄素,3-姜黄素。

    图4为一种测定的鱼饲料空白中添加不同浓度双去甲氧基姜黄素的加标样品绘制
    的基质标准曲线图。

    图5为一种测定的鱼饲料空白中添加不同浓度去甲氧基姜黄素的加标样品绘制的
    基质标准曲线图。

    图6为一种测定的鱼饲料空白中添加不同浓度姜黄素的加标样品绘制的基质标准
    曲线图。

    经本测定方法测定的鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素
    UPLC-TUV色谱图基线平稳,分离效果好,灵敏度高,重现性好。

    具体实施方式

    实施例1:

    下面结合附图对本发明做进一步说明。

    一种测定鱼饲料中姜黄素的方法,其步骤是

    A、取鱼饲料5.0g于50mL塑料离心管中,加入试剂A 15-30mL,振荡30s,超声5min,将
    50mL塑料离心管置离心机上7000r/min,离心5min;

    B、将上层提取液转移到125mL旋转浓缩瓶中,再向50mL试管残渣中加入试剂A 15-30mL
    重复提取一次,将旋转浓缩瓶置40℃旋转蒸发仪上浓缩至干,向旋转浓缩瓶中加入试剂B 1
    ~10mL涡旋振荡30s复溶提取液残渣;

    C、将步骤B获得的复溶溶液转移到一支10mL塑料离心管中置40℃氮吹仪上氮吹至干,
    再向10mL塑料离心管中加入1mL定容溶液C溶解塑料管中的残渣;

    D、再在步骤C获得的定容溶液C溶解塑料管中残渣的溶液中加入1mL试剂D,涡旋振荡
    30s,7000r/min离心5min,将上层液体弃去,用1mL注射器吸取下层液体过0.22μm聚醚砜水
    系滤头,滤液放置到2mL进样瓶中,获得待测定的液体。

    E、在不含双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的鱼饲料中添加系列浓度
    的双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素制作浓度为10、50、100、200、500、1000、
    2000、5000、10000μg/kg鱼饲料基质标准,按照步骤A~D进行处理。

    F、UPLC-TUV测定条件:有机相为试剂A,水相为溶液E两者的体积比为1:1~2:3;色
    谱柱为超高效液相色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm),柱温:30
    ℃,流速0.3mL/min,进样量5.0μL;等度洗脱,分析时间:5.0min;获得双去甲氧基姜黄素、去
    甲氧基姜黄素和姜黄素的色谱图,通过色谱图积分得出双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄
    素和姜黄素的峰面积。

    G、鱼饲料基质标准曲线的绘制,分别以在不含双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄
    素和姜黄素的鱼饲料中添加系列浓度的双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素后得
    到的鱼饲料基质标准浓度分别为10、50、100、200、500、1000、2000、5000、10000μg/kg为横坐
    标X1,X2,X3,峰面积分别为纵坐标Y1,Y2,Y3,绘制基质标准曲线见图4~图6,获得基质标准曲
    线方程、相关指数和线性范围见表2。鱼饲料中双去甲氧基姜黄素含量的计算公式为X1=(Y1
    +1800.7)/309.65,浓度范围为10μg/kg~10000μg/kg;鱼饲料中去甲氧基姜黄素含量的计
    算公式为X2=(Y2+3340.6)/260.88,浓度范围为10μg/kg~10000μg/kg;鱼饲料中姜黄素含
    量的计算公式为X3=(Y3+14903)/256.06,浓度范围为10μg/kg~10000μg/kg;将测得的双去
    甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积(Y1,Y2,Y3)分别代入相应方程中得出鱼饲
    料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量分别为X1,X2,X3。例如测定的鱼饲
    料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积Y1,Y2,Y3分别为306980,258384,
    254938,分别代入双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素含量计算公式分别得出双去
    甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量X1,X2,X3,分别为997.19μg/kg,1003.24μg/
    kg,1053μg/kg。其中:X1为双去甲氧基姜黄素的含量,X2为去甲氧基姜黄素的含量,X3为姜黄
    素的含量;Y1为双去甲氧基姜黄素的峰面积,Y2为去甲氧基姜黄素的峰面积,Y3为姜黄素的
    峰面积。

    通过变换双去甲氧基姜黄素鱼饲料基质标准曲线方程Y1=309.65X1-1800.7得到
    鱼饲料中双去甲氧基姜黄素含量的计算公式:X1=(Y1+1800.7)/309.65;变换去甲氧基姜黄
    素鱼饲料基质标准曲线方程Y2=260.88X2-3340.6得到鱼饲料中去甲氧基姜黄素含量的计
    算公式:X2=(Y2+3340.6)/260.88;变换姜黄素鱼饲料基质标准曲线方程Y3=256.06X3-
    14903得到鱼饲料中姜黄素含量的计算公式:X3=(Y3+14903)/256.06。

    H、将实际测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积值
    代入基质标准曲线中,计算得到鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含
    量;如果鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量超出本基质标准曲线
    的浓度范围(10~10000μg/kg)可将前处理后得到的液体用定容溶液C稀释后进行测定,并
    将测定值代入基质标准曲线方程计算得出浓度值再乘以稀释倍数即得到双去甲氧基姜黄
    素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量。

    优选的,所述的试剂A中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中
    任一种液体试剂;

    优选的,所述的试剂B是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一
    种试剂;

    优选的,所述的溶液C是试剂A和溶液E按一定体积比混合而成的溶液;

    优选的,所述的溶剂D是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一
    种试剂;

    优选的,所述的试剂F是甲酸、乙酸、氢氟酸、盐酸中的任一种试剂;

    优选的,所述的溶液E是试剂F与蒸馏水按体积比1:2000~1:250混合而成的溶液;

    优选的,所述的试剂F是甲酸、乙酸、氢氟酸、盐酸中的任一种试剂;

    所述的溶液C的配制方法:试剂A和溶液E按体积比1:1的比例混合而成。

    所述的溶液E的配制方法:取50~400μL的试剂F加入到100mL蒸馏水混匀,配制成
    溶液E其浓度为0.05~0.4%(体积比)。

    表2双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素鱼饲料基质曲线


    注:X1,X2,X3分别为双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量;Y1,Y2,Y3分别
    为双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积。

    实施例2:

    一种测定鱼饲料中姜黄素含量的方法,其步骤是:

    A、取鱼饲料5.0g于50mL塑料离心管中,加入试剂A 15-30mL,振荡30s,超声5min;

    所述的试剂A可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中任一种液体
    试剂。

    B、将离心管置离心机上7000r/min,离心5min,将上层提取液转移到125mL旋转浓
    缩瓶中,再向50mL试管残渣中加入试剂A 15-30mL重复提取一次;所述的试剂A可以是乙酸
    乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中任一种液体试剂。

    C、将旋转浓缩瓶置40℃旋转蒸发仪上浓缩至干,向旋转浓缩瓶中加入试剂B 1~
    10mL涡旋振荡30s复溶旋转浓缩瓶中的残渣;所述的试剂B是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙
    醇、二氯甲烷、正己烷中的任一种试剂。

    D、将复溶溶液转移到一支10mL塑料离心管中置40℃氮吹仪上氮吹至干,再向10mL
    塑料离心管中加入1mL定容溶液C溶解塑料管中的残渣,再加入1mL试剂D,涡旋振荡30s,
    7000r/min离心5min,将上层液体弃去;所述的溶液C是试剂A和溶液E按1:1的体积比混合而
    成的溶液;所述的试剂D是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷中的任一种
    试剂;所述的试剂F是甲酸、乙酸、氢氟酸、盐酸中的任一种试剂;所述的溶液E是试剂F与蒸
    馏水按体积比1:2000~1:250混合而成的溶液;

    E、用1mL注射器吸取下层液体过0.22μm聚醚砜水系滤头,滤液放置到2mL进样瓶中,
    UPLC-TUV测定。

    F、UPLC-TUV测定条件:流动相组成是有机相为试剂A,水相为溶液E两者的体积比
    为1:1~2:3。优选的,所述的试剂A中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷
    中任一种液体试剂;优选的,所述的溶液E是试剂F与蒸馏水按体积比1:2000~1:250混合而
    成的溶液。所述的试剂F是甲酸、乙酸、氢氟酸、盐酸中的任一种试剂;色谱柱为超高效液相
    色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm),柱温:30℃,流速0.3mL/min,
    进样量:5.0μL;等度洗脱;分析时间:5.0min。结果表明经本测定方法测定鱼饲料中双去甲
    氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素,色谱基线平稳,姜黄素3种成分分离充分。

    G、鱼饲料基质标准曲线的绘制,分别在不含双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素
    和姜黄素的鱼饲料中添加系列浓度的双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素后得到
    系列浓度的鱼饲料基质标准,以其浓度分别为横坐标X1,X2,X3,双去甲氧基姜黄素、去甲氧
    基姜黄素、姜黄素的峰面积分别为纵坐标Y1,Y2,Y3,绘制基质标准曲线见图4~图6,获得鱼
    饲料基质标准曲线方程见表2。鱼饲料中双去甲氧基姜黄素含量的计算公式为X1=(Y1+
    1800.7)/309.65,浓度范围为10μg/kg~10000μg/kg;鱼饲料中去甲氧基姜黄素含量的计算
    公式为X2=(Y2+3340.6)/260.88,浓度范围为10μg/kg~10000μg/kg;鱼饲料中姜黄素含量
    的计算公式为X3=(Y3+14903)/256.06,浓度范围为10μg/kg~10000μg/kg;将测得的双去甲
    氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积(Y1,Y2,Y3)分别代入相应方程中得出鱼饲料
    中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量分别为X1,X2,X3。例如测定的鱼饲料
    中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积Y1,Y2,Y3分别为306980,258384,
    254938,分别代入双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素含量计算公式分别得出双去
    甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量X1,X2,X3分别为997.19μg/kg,1003.24μg/
    kg,1053μg/kg。

    H、将实际测定鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积值
    代入鱼饲料基质标准曲线(见表1)中,计算得到鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄
    素、姜黄素的含量;如果鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量超出
    本基质标准曲线的浓度范围(10μg/kg~10000μg/kg),可将前处理后得到的液体用定容溶
    液C稀释后进行测定,并将测定值代入鱼饲料基质标准曲线方程计算得出含量值再乘以稀
    释倍数即得到鱼饲料中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量。

    本实施例所有的试剂与实施例1相同。

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