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    重庆时时彩平台开奖: 一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法.pdf

    关 键 词:
    一种 基于 适配体 牛奶 四环素 残留 表面 增强 光谱 检测 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201710006302.3

    申请日:

    2017.01.05

    公开号:

    CN106770172A

    公开日:

    2017.05.31

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 著录事项变更 IPC(主分类):G01N 21/65变更事项:发明人变更前:李欢欢 陈全胜 赵杰文 欧阳琴 郭志明 林颢 刘妍 孙浩 杨明秀变更后:陈全胜 李欢欢 赵杰文 欧阳琴 郭志明 林颢 刘妍 孙浩 杨明秀|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 21/65申请日:20170105|||公开
    IPC分类号: G01N21/65 主分类号: G01N21/65
    申请人: 江苏大学
    发明人: 李欢欢; 陈全胜; 赵杰文; 欧阳琴; 郭志明; 林颢; 刘妍; 孙浩; 杨明秀
    地址: 212013 江苏省镇江市京口区学府路301号
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201710006302.3

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2019.02.26|||2017.06.23|||2017.05.31

    法律状态类型:

    著录事项变更|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法。该方法为:以制备的修饰对巯基苯胺标记分子的金纳米颗粒/二氧化硅核壳复合纳米材料作为表面增强拉曼基底,以加标回收率测定的方式实现牛奶中四环素残留的检测研究。制备的牛奶中四环素表面增强拉曼光谱检测方法,当四环素存在时,影响适配体在检测体系中的结构,与适配体发生特异性识别结合,从而引起不同浓度增强基底在不同浓度四环素存在下的释放,随后对检测体系进行磁性分离,将含有磁性微球??适配体??四环素复合物吸附至底,对含有不同浓度增强基底的上清液进行拉曼信号测定,依据不同拉曼强度的标记分子特征峰图谱,实现对牛奶中四环素残留灵敏间接检测的目的。

    权利要求书

    1.一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法,其特征在于,其
    特征在于,该方法包括如下具体步骤:
    1)磁性微球制备:利用溶剂热法合成磁性微球,首先,称取1.350g FeCl3.6H2O,3.854g
    醋酸钠,0.400g柠檬酸钠溶解在装有70mL乙二醇的250mL三口圆底烧瓶中,随后,上述溶液
    在氩气?;は录尤鹊?00℃,并持续反应1h,形成均匀的黑红色溶液;待溶液冷却至室温,将
    其转移到至100mL聚四氟乙烯内衬不锈钢反应釜中,在200℃下密封、加热反应17小时;最
    后,通过磁分离收集的方法,以乙醇和超纯水清洗多次,最后分散至10mL乙醇中,得到黑色
    磁性微球待用;随后在磁性微球表面修饰PMAA壳,修饰之前,首先在其表面修饰改性聚苯乙
    烯MPS,具体操作步骤为,将40mL乙醇、10mL超纯水、1.5mL氨水及0.3g MPS添加至上述10mL
    磁性微球乙醇溶液中,并在60℃水浴环境下磁力震荡反应24h;最后,利用蒸馏沉淀聚合法
    以甲基丙烯酸AA、甲叉双丙烯酰胺MBA作为交联剂,偶氮二异丁腈AIBN为引发剂,在乙腈溶
    剂中制备表面修饰PMAA壳的磁性微球;
    2)磁性微球-适配体制备:具有羧基表面的磁性微球和具有氨基表面的核酸适配体利
    用缩合反应制备得到磁性微球-适配体螯合物;具体操作步骤为:取1mL羧基化的磁性微球
    分散至2mL EDC水溶液中,随后,将含有1mL 1μM核酸适配体的PBS溶液加入至上述溶液中混
    合反应12h,最终得到磁性微球-适配体捕捉探针;
    3)增强基底制备:将制备的金纳米颗粒AuNPs与PATP乙醇溶液室温下反应约4h,得到
    Au/PATP;随后,将APTMS逐滴加入混合溶液中,反应15min后,将5mL硅酸钠加入溶液中,在90
    ℃水浴环境下反应30min,得到增强基底待用;
    4)核酸适配体互补链-增强基底制备:搅拌15分钟后,将增强基底进行离心分离,弃上
    层液体,获得的沉淀用乙醇和乙腈分别清洗三次,在60℃下干燥1h,随后与溶解在乙腈溶剂
    中的三聚氯氰连续搅拌反应4h;此后,将产物进行离心,弃上层液体,获得的沉淀用乙腈、超
    纯水、硼酸盐缓冲液BBS分别清洗3次;最终产物再分散在BBS溶液中,将0.4mL核酸适配体互
    补链BBS溶液加入其中,室温下轻微震动连续反应过夜;
    5)拉曼光谱检测:首先,将制备的磁性微球-适配体与信号分子混合,37℃下连续震荡
    反应2h;随后,分别取200μL磁性微球-适配体/核酸适配体互补链-增强基底生物螯合物分
    装置一系列平行离心管中,随后,将100μL不同浓度的待检物四环素原液依次加入到上述离
    心管中,混合溶液37℃条件下连续震荡反应70min;以加有100μL超纯水的离心管作为对照
    组;反应结束后,利用磁铁进行磁性富集,同时利用拉曼光谱在150cm-1-2000cm-1波长范围
    内对含有不同浓度增强基底的上清液拉曼强度进行测定;
    6)牛奶中四环素加标回收率测定:利用加标回收结合本发明设计的检测方法实现液态
    牛奶样本中的四环素检测;检测前需要对样本进行预处理;首先取5ml牛奶于10℃,7000g转
    速下离心10min,弃去上层乳脂,将沉淀用超纯水稀释20倍,静置后将上清液用过滤器过滤,
    收集滤液;随后,分别在装有10mL滤液的离心管中加入不同浓度的四环素,然后取分别从每
    个离心管中取100μL混合液于分装有200uL检测体系的1.5mL离心管中,混合反应70min后,
    进行磁性分离,测定上清液拉曼光谱强度。
    2.根据权利要求1所述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测
    方法,其特征在于,所述增强基底为修饰对巯基苯胺PATP的金包二氧化硅核壳状纳米复合
    材料,与常用的增强基底金纳米颗粒、银纳米颗粒、金纳米棒、银纳米棒等相比,具有极强的
    拉曼信号增强效果,同时,标记分子PATP固定在金核及二氧化硅壳之间成功避免外界环境
    的干扰,提高了获取拉曼信号的稳定性及重复性。
    3.根据权利要求1所述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测
    方法,其特征在于,所述核酸适配体序列为:5’-NH2-CGT ACG GAA TTC GCT AGC CCC CCG
    GCA GGC CAC GGC TTG GGT TGG TCC CAC TGC GCG TGG ATC CGA GCT CCA CGT G-NH2-3’。
    4.根据权利要求1所述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测
    方法,其特征在于,所述的核酸适配体及四环素的特异性结合能力利用圆二色谱CD进行表
    征。
    5.根据权利要求1所述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测
    方法,其特征在于,所述的磁性微球,由蒸馏沉淀聚合反应制备而成,具有高饱和磁化强度
    71.5emu/g及优良的生物相容性,有利于快速、较易的生物反应及磁性分离,此外,该磁性微
    球具有自由的羧基表面,使其尽可能多的与核酸适配体发生缩合反应。
    6.根据权利要求1所述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测
    方法,其特征在于,所述的检测方法,标记分子PATP最佳浓度为1mM,增强基底最佳尺寸为
    43nm,磁性微球及核酸适配体的最佳反应时间为50min,四环素在检测体系中的最佳培养时
    间为70min。

    说明书

    一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法

    技术领域

    本发明涉及一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法,具
    体以制备修饰对巯基苯胺标记分子的金纳米颗粒/二氧化硅核壳复合纳米材料作为表面增
    强拉曼基底,结合能够与待检测目标物四环素发生特异性结合的核酸适配体,最终以加标
    回收率测定的方式实现牛奶中四环素残留的快速、灵敏、高效检测研究。

    背景技术

    四环素族四环素广泛作为畜牧业中饲料的药物添加剂,用于防治动物肠道感染和
    促生长。在奶牛养殖业中由于四环素的滥用和不遵从停药期规定,其可在肝肾组织富积并
    随乳汁分泌而排泄,并随食物链流入人体,其最明显的残留毒性是诱导耐药菌株的产生。为
    了保障消费者食品安全,欧盟等许多国家对于奶制品中四环素残留实施监控。常用的四环
    素残留分析方法目前主要有传统的微生物检验技术、分子生物学技术、仪器分析技术和免
    疫学技术。现有的这些分析方法虽各有优势,但都存在一定的局限性,或者前处理步骤复
    杂、时间长,或者仪器设备庞大昂贵等。因此,鉴于申请人在食品安全因子检测及拉曼光谱
    技术使用方面积累的良好的工作基础,本发明拟制备一种快速、灵敏、有效的检测方法,结
    合拉曼光谱技术实现牛奶中四环素残留的高效检测,为开创食品安全因子检测新途径提供
    理论基础。

    目前,以优化修饰对巯基苯胺标记分子的金纳米颗粒/二氧化硅核壳复合纳米材
    料作为表面增强拉曼基底,结合能够与待检测目标物四环素发生特异性结合的核酸适配体
    对牛奶中四环素进行灵敏、有效检测仍未见报道。本发明作为一种新兴的四环素残留检测
    方法,从一定程度上实现了食品安全因子检测的新途径开发。

    发明内容

    本发明的目的是提供了一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱
    检测方法,其灵敏度高、可靠性强、检测速度快,实现对牛奶中四环素残留检测的目的,适用
    于食品安全、环境监测等技术领域。

    为了实现上述目的,本发明采用的技术方案:制备检测方法,当四环素存在时,影
    响适配体在检测体系中的结构,与适配体发生特异性识别结合,从而引起不同浓度增强基
    底在不同浓度四环素存在下的释放,随后对检测体系进行磁性分离,将含有磁性微球-适配
    体-四环素复合物吸附至底,对含有不同浓度增强基底的上清液进行拉曼信号测定,依据不
    同拉曼强度的标记分子特征峰图谱,实现对牛奶中四环素残留灵敏间接检测的目的;该方
    法适用于食品安全、环境监测等技术领域。

    上述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法,所述的
    增强基底为修饰对巯基苯胺(PATP)的金包二氧化硅核壳状纳米复合材料,与常用的增强基
    底金纳米颗粒、银纳米颗粒、金纳米棒、银纳米棒等相比,具有极强的拉曼信号增强效果,同
    时,标记分子PATP固定在金核及二氧化硅壳之间成功避免外界环境的干扰,提高了获取拉
    曼信号的稳定性及重复性。

    上述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法,所述的
    核酸适配体序列为:5’-NH2-CGT ACG GAA TTC GCT AGC CCC CCG GCA GGC CAC GGC TTG
    GGT TGG TCC CAC TGC GCG TGG ATC CGA GCT CCA CGT G-NH2-3’。

    上述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法,所述的
    核酸适配体及四环素的特异性结合能力利用圆二色谱(CD)进行表征。

    上述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法,所述的
    磁性微球,由蒸馏沉淀聚合反应制备而成,具有高饱和磁化强度71.5emu/g及优良的生物相
    容性,有利于快速、较易的生物反应及磁性分离。此外,该磁性微球具有自由的羧基表面,使
    其尽可能多的与核酸适配体发生缩合反应。

    上述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法,所述的
    检测方法,标记分子PATP最佳浓度为1mM,增强基底最佳尺寸为43nm,磁性微球及核酸适配
    体的最佳反应时间为50min,四环素在检测体系中的最佳培养时间为70min。

    上述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法,该方法
    包括如下具体步骤:

    1)磁性微球制备:利用溶剂热法合成磁性微球,首先,称取1.350g FeCl3.6H2O,
    3.854g醋酸钠,0.400g柠檬酸钠溶解在装有70mL乙二醇的250mL三口圆底烧瓶中,随后,上
    述溶液在氩气?;は录尤鹊?00℃,并持续反应1h,形成均匀的黑红色溶液。待溶液冷却至
    室温,将其转移到至100mL聚四氟乙烯内衬不锈钢反应釜中,在200℃下密封、加热反应17小
    时。最后,通过磁分离收集的方法,以乙醇和超纯水清洗多次,最后分散至10mL乙醇中,得到
    黑色磁性微球待用。随后在磁性微球表面修饰PMAA壳,修饰之前,首先在其表面修饰改性聚
    苯乙烯(MPS),具体操作步骤为,将40mL乙醇、10mL超纯水、1.5mL氨水及0.3g MPS添加至上
    述10mL磁性微球乙醇溶液中,并在60℃水浴环境下磁力震荡反应24h。最后,利用蒸馏沉淀
    聚合法以甲基丙烯酸(AA)、甲叉双丙烯酰胺(MBA)作为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发
    剂,在乙腈溶剂中制备表面修饰PMAA壳的磁性微球。

    2)磁性微球-适配体制备:具有羧基表面的磁性微球和具有氨基表面的核酸适配
    体利用缩合反应制备得到磁性微球-适配体螯合物。具体操作步骤为:取1mL羧基化的磁性
    微球分散至2mL EDC水溶液中,随后,将含有1mL 1μM核酸适配体的PBS溶液加入至上述溶液
    中混合反应12h,最终得到磁性微球-适配体捕捉探针。

    3)增强基底制备:将制备的金纳米颗粒(AuNPs)与PATP(300μL,1mM)乙醇溶液室温
    下反应约4h,得到Au/PATP。随后,将APTMS(600μL 1mM)逐滴加入混合溶液中,反应15min后,
    将5mL硅酸钠((0.54%(w/w))加入溶液中,在90℃水浴环境下反应30min,得到增强基底待
    用。

    4)核酸适配体互补链-增强基底制备:搅拌15分钟后,将增强基底进行离心分离,
    弃上层液体,获得的沉淀用乙醇和乙腈分别清洗三次,在60℃下干燥1h,随后与溶解在乙腈
    溶剂中的三聚氯氰(3mL,0.2M)连续搅拌反应4h。此后,将产物进行离心,弃上层液体,获得
    的沉淀用乙腈、超纯水、硼酸盐缓冲液(BBS)分别清洗3次。最终产物再分散在BBS溶液中
    (2ml,pH=8.4),将0.4mL核酸适配体互补链(5.6nmol/L)BBS溶液加入其中,室温下轻微震
    动连续反应过夜。

    5)拉曼光谱检测:首先,将制备的磁性微球-适配体与信号分子混合,37℃下连续
    震荡反应2h。随后,分别取200μL磁性微球-适配体/核酸适配体互补链-增强基底生物螯合
    物分装置一系列平行离心管中,随后,将100μL不同浓度的待检物四环素原液依次加入到上
    述离心管中,混合溶液37℃条件下连续震荡反应70min。以加有100μL超纯水的离心管作为
    对照组。反应结束后,利用磁铁进行磁性富集,同时利用拉曼光谱(785nm)在150cm-1-
    2000cm-1波长范围内对含有不同浓度增强基底的上清液拉曼强度进行测定。

    6)牛奶中四环素加标回收率测定:利用加标回收结合本发明设计的检测方法实现
    液态牛奶样本中的四环素检测。检测前需要对样本进行预处理。首先取5ml牛奶于10℃,
    7000g转速下离心10min,弃去上层乳脂,将沉淀用超纯水稀释20倍,静置后将上清液用过滤
    器过滤,收集滤液。随后,分别在装有10mL滤液的离心管中加入不同浓度的四环素,然后取
    分别从每个离心管中取100μL混合液于分装有200uL检测体系的1.5mL离心管中,混合反应
    70min后,进行磁性分离,测定上清液拉曼光谱强度。

    与现有的技术相比,本发明的优点在于:

    本发明所制备的增强基底为修饰对巯基苯胺(PATP)的金包二氧化硅核壳状纳米
    复合材料,与常用的增强基底金纳米颗粒、银纳米颗粒、金纳米棒、银纳米棒等相比,具有极
    强的拉曼信号增强效果,同时,标记分子PATP固定在金核及二氧化硅壳之间成功避免外界
    环境的干扰,提高了获取拉曼信号的稳定性及重复性。

    本发明所制备的磁性微球,由蒸馏沉淀聚合反应制备而成,具有高饱和磁化强度
    71.5emu/g及优良的生物相容性,有利于快速、较易的生物反应及磁性分离。此外,该纳米微
    球具有自由的羧基表面,使其尽可能多的与核酸适配体发生缩合反应。

    本发明制备的的检测方法用于牛奶中四环素残留检测灵敏度高,检测速度快,检
    测范围广,在食品安全、环境监测等技术领域广泛应用。

    本发明所述的检测方法,过程参数全为优化所得,标记分子PATP最佳浓度为1mM,
    增强基底最佳尺寸为43nm,磁性微球及核酸适配体的最佳反应时间为50min,四环素在检测
    体系中的最佳培养时间为70min。

    本发明利用圆二色谱(CD)对核酸适配体及四环素的特异性结合能力进行表征。

    附图说明

    图1为检测结果:(A)为不同浓度四环素拉曼光谱;(B)为标准曲线;

    具体实施方式

    实施实例1

    为了进一步验证本发明所制备检测方法对牛奶中四环素残留检测的作用,本发明
    实例,以四环素(tetracycline)为例,具体操作步骤如下:

    (1)磁性微球制备:利用溶剂热法合成磁性微球,首先,称取1.350g FeCl3.6H2O,
    3.854g醋酸钠,0.400g柠檬酸钠溶解在装有70mL乙二醇的250mL三口圆底烧瓶中,随后,上
    述溶液在氩气?;は录尤鹊?00℃,并持续反应1h,形成均匀的黑红色溶液。待溶液冷却至
    室温,将其转移到至100mL聚四氟乙烯内衬不锈钢反应釜中,在200℃下密封、加热反应17小
    时。最后,通过磁分离收集的方法,以乙醇和超纯水清洗多次,最后分散至10mL乙醇中,得到
    黑色磁性微球待用。随后在磁性微球表面修饰PMAA壳,修饰之前,首先在其表面修饰改性聚
    苯乙烯(MPS),具体操作步骤为,将40mL乙醇、10mL超纯水、1.5mL氨水及0.3g MPS添加至上
    述10mL磁性微球乙醇溶液中,并在60℃水浴环境下磁力震荡反应24h。最后,利用蒸馏沉淀
    聚合法以甲基丙烯酸(AA)、甲叉双丙烯酰胺(MBA)作为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发
    剂,在乙腈溶剂中制备表面修饰PMAA壳的磁性微球。

    (2)磁性微球-适配体制备:具有羧基表面的磁性微球和具有氨基表面的核酸适配
    体利用缩合反应制备得到磁性微球-适配体螯合物。具体操作步骤为:取1mL羧基化的磁性
    微球分散至2mL EDC水溶液中,随后,将含有1mL 1μM核酸适配体的PBS溶液加入至上述溶液
    中混合反应12h,最终得到磁性微球-适配体捕捉探针。

    (3)增强基底制备:将制备的金纳米颗粒(AuNPs)与PATP(300μL,1mM)乙醇溶液室
    温下反应约4h,得到Au/PATP。随后,将APTMS(600μL 1mM)逐滴加入混合溶液中,反应15min
    后,将5mL硅酸钠((0.54%(w/w))加入溶液中,在90℃水浴环境下反应30min,得到增强基底
    待用。

    (4)核酸适配体互补链-增强基底制备:搅拌15分钟后,将增强基底进行离心分离,
    弃上层液体,获得的沉淀用乙醇和乙腈分别清洗三次,在60℃下干燥1h,随后与溶解在乙腈
    溶剂中的三聚氯氰(3mL,0.2M)连续搅拌反应4h。此后,将产物进行离心,弃上层液体,获得
    的沉淀用乙腈、超纯水、硼酸盐缓冲液(BBS)分别清洗3次。最终产物再分散在BBS溶液中
    (2ml,pH=8.4),将0.4mL核酸适配体互补链(5.6nmol/L)BBS溶液加入其中,室温下轻微震
    动连续反应过夜。

    (5)拉曼光谱检测:首先,将制备的磁性微球-适配体与信号分子混合,37℃下连续
    震荡反应2h。随后,分别取200μL磁性微球-适配体/核酸适配体互补链-增强基底生物螯合
    物分装置一系列平行离心管中,随后,将100μL不同浓度的待检物四环素原液依次加入到上
    述离心管中,混合溶液37℃条件下连续震荡反应70min。以加有100μL超纯水的离心管作为
    对照组。反应结束后,利用磁铁进行磁性富集,同时利用拉曼光谱(785nm)在150cm-1-
    2000cm-1波长范围内对含有不同浓度增强基底的上清液拉曼强度进行测定。图1为检测结
    果:(A)为不同浓度四环素拉曼光谱;(B)为标准曲线

    (6)牛奶中四环素加标回收率测定:利用加标回收结合本发明设计的检测方法实
    现液态牛奶样本中的四环素检测。检测前需要对样本进行预处理。首先取5ml牛奶于10℃,
    7000g转速下离心10min,弃去上层乳脂,将沉淀用超纯水稀释20倍,静置后将上清液用过滤
    器过滤,收集滤液。随后,分别在装有10mL滤液的离心管中加入不同浓度的四环素,然后取
    分别从每个离心管中取100μL混合液于分装有200uL检测体系的1.5mL离心管中,混合反应
    70min后,进行磁性分离,测定上清液拉曼光谱强度。最后采用本试验设计方法检测牛奶中
    四环素浓度,并与所添加的浓度作对比,结果如表1所示:

    表1本发明设计方法用于牛奶样本中四环素的检测



    综上,制备的牛奶中四环素表面增强拉曼光谱检测方法,当四环素存在时,影响适
    配体在检测体系中的结构,与适配体发生特异性识别结合,从而引起不同浓度增强基底在
    不同浓度四环素存在下的释放,随后对检测体系进行磁性分离,将含有磁性微球-适配体-
    四环素复合物吸附至底,对含有不同浓度增强基底的上清液进行拉曼信号测定,依据不同
    拉曼强度的标记分子特征峰图谱,实现对牛奶中四环素残留灵敏间接检测的目的;该方法
    适用于食品安全、环境监测等技术领域。

    在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、
    “示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结
    构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的
    示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特
    点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

    尽管已经示出和描述了本发明的实施例,本领域的普通技术人员可以理解:在不
    脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本
    发明的范围由权利要求及其等同物限定。

    SEQUENCE LISTING

    <110> 江苏大学

    <120> 一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法

    <130> 一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法

    <160> 1

    <170> PatentIn version 3.3

    <210> 1

    <211> 76

    <212> DNA

    <213> 人工序列

    <400> 1

    cgtacggaat tcgctagccc cccggcaggc cacggcttgg gttggtccca ctgcgcgtgg 60

    atccgagctc cacgtg 76

    关于本文
    本文标题:一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法.pdf
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