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    重庆时时彩五星和值: 一种人类IGG浓度的检测方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201610883454.7

    申请日:

    2016.10.10

    公开号:

    CN106526197A

    公开日:

    2017.03.22

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/68申请日:20161010|||公开
    IPC分类号: G01N33/68 主分类号: G01N33/68
    申请人: 中南大学
    发明人: 阳明辉; 曾科; 田诗雨
    地址: 410083 湖南省长沙市岳麓区麓山南路932号
    优先权:
    专利代理机构: 长沙市融智专利事务所 43114 代理人: 魏娟
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201610883454.7

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.04.19|||2017.03.22

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种人类IgG浓度的检测方法,该方法是以介孔NH2—二氧化硅纳米粒子为载体先构建一抗—IgG—(二抗—MSN—酶复合物)三层夹心式结构;再利用所述三层夹心式结构催化葡萄糖氧化分解产生过氧化氢,而过氧化氢氧化Fe2+生成Fe3+及邻二氮菲与亚铁离子形成橙红色络合物的原理,实现人类IgG浓度的检测,该方法具有选择性好、灵敏度高、检测限低,且检测范围宽等优点。

    权利要求书

    1.一种人类IgG浓度的检测方法,其特征在于:包括以下步骤:
    1)在介孔NH2—二氧化硅纳米粒子载体上同时修饰葡萄糖氧化酶和二抗Ab2,得到二
    抗—MSN—酶复合物;
    2)将一抗Ab1修饰在酶标板的各孔内,再以乙醇胺溶液对酶标板进行封闭,得到一抗Ab1
    修饰的酶标板;
    3)取一系列不同浓度的标准IgG溶液分别加入至所述一抗Ab1修饰的酶标板的各孔内进
    行IgG与一抗Ab1之间的特异性结合反应,得到结合了IgG的酶标板;
    4)将所述二抗—MSN—酶复合物加入至结合了IgG的酶标板的各孔内进行IgG与二抗Ab2
    之间的特异性结合反应,得到含一抗—IgG—(二抗—MSN—酶复合物)三层夹心式结构的酶
    标板;
    5)向含一抗—IgG—(二抗—MSN—酶复合物)三层夹心式结构的酶标板的各孔内加入
    葡萄糖/Fe2+混合溶液进行反应后,再加入邻二氮菲显色,并检测各孔内溶液的吸光度值;
    6)根据检测得到的各孔内溶液吸光度值与对应的标准IgG溶液浓度建立标准曲线;
    7)取待测IgG溶液替换标准IgG溶液按3)、4)和5)的步骤进行操作,检测得到吸光度值,
    依据标准曲线,即得待测IgG溶液的浓度。
    2.根据权利要求1所述的IgG浓度的检测方法,其特征在于:在介孔NH2—二氧化硅纳米
    粒子载体溶液中加入戊二醛溶液在室温下反应,再加入葡萄糖氧化酶和二抗Ab2,在3~5℃
    温度下进行反应,即得二抗—MSN—酶复合物。
    3.根据权利要求1所述的IgG浓度的检测方法,其特征在于:先将一抗Ab1溶液加入至酶
    标板的各孔内在3~5℃温度下进行修饰,再将乙醇胺溶液加入至酶标板的各孔内在室温下
    进行封闭,即得一抗Ab1修饰的酶标板。
    4.根据权利要求1~3任一项所述的IgG浓度的检测方法,其特征在于:所述的二抗Ab2为
    山羊抗人IgG抗体;所述的一抗Ab1为小鼠抗人IgG抗体。
    5.根据权利要求3所述的IgG浓度的检测方法,其特征在于:所述介孔NH2—二氧化硅纳
    米粒子通过如下方法制备得到:将十六烷基三甲基溴化铵溶于氢氧化钠溶液中后,加入正
    硅酸乙酯进行水解反应,得到二氧化硅纳米粒子;将所述二氧化硅纳米粒子悬浮于甲苯中
    后,与氨丙基三乙氧基硅烷在氮气?;は?,于75~80℃温度下反应11~12h,反应所得产物
    与NH4NO3的乙醇溶液在55~60℃温度下反应2~3h,即得。
    6.根据权利要求1所述的IgG浓度的检测方法,其特征在于:3)或4)中的特异性结合反
    应的条件为:温度为36~37℃,时间为3~5h。
    7.根据权利要求1所述的IgG浓度的检测方法,其特征在于:将浓度分别为1pg/mL、5pg/
    mL、10pg/mL、100pg/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL、1μg/mL和10μg/mL的一系列标准IgG溶
    液分别加入一抗Ab1修饰的酶标板的各孔内,进行特异性结合反应。
    8.根据权利要求1所述的IgG浓度的检测方法,其特征在于:所述的葡萄糖/Fe2+混合溶
    液中亚铁离子浓度为0.15~0.16mM、葡萄糖浓度为16~17mg/mL。
    9.根据权利要求1所述类IgG浓度的检测方法,其特征在于:吸光度值的检测波长为
    490nm。

    关 键 词:
    一种 人类 IGG 浓度 检测 方法
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