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    重庆时时彩巧妙取胆: 一种用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201610966066.5

    申请日:

    2016.11.02

    公开号:

    CN106526182A

    公开日:

    2017.03.22

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/573申请日:20161102|||公开
    IPC分类号: G01N33/573; G01N21/64 主分类号: G01N33/573
    申请人: 济南大学
    发明人: 兰飞飞; 梁琳琳; 葛慎光; 于京华; 颜梅
    地址: 250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
    优先权:
    专利代理机构: 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 代理人: 李茜
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201610966066.5

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.06.05|||2017.04.19|||2017.03.22

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建。在计算机上利用Adobe?illustrator?CS4软件设计微流控纸芯片的疏水蜡打印图案;在纸芯片工作区域生长金铂双金属降低背景荧光信号;修饰适配体1于金钯双金属上用于特异性识别目标物;通过适配体2对凝血酶的特异性结合,荧光标记物被引入到工作区域,进而通过荧光仪实现对凝血酶的检测。

    权利要求书

    1.一种用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建,其特征是包括以下步骤:
    1.1在计算机上设计如附图1所示的纸芯片疏水蜡打印图案;
    1.2将步骤1.1中设计的打印图案通过蜡打印机打印在已裁剪为A4大小的色谱纸上,然
    后将带有蜡图案的A4色谱纸通过加热到125oC的平板加热器加热2 min,使蜡融化并浸透整
    个纸的厚度,形成疏水墙;
    1.3将步骤1.2中得到的色谱纸的工作区域进行功能化,生长AuPt双金属后进行适配体
    1的修饰,滴加50μL待检测的凝血酶,反应45 min后用磷酸缓冲溶液清洗,然后用牛血清白
    蛋白封锁非活性位点;
    1.4在步骤1.2中得到的色谱纸的孵化区域滴40μL合成好的[email protected]荧光标记物和 60μ
    L的1 μM适配体2,进行荧光标记物和适配体2的反应;
    1.5将纸芯片沿着折叠线折叠,连有适配体2的荧光标记物[email protected]到达含有目标物的
    工作区域,反应30 min后用磷酸缓冲溶液洗涤;
    1.6将步骤1.5中纸芯片工作区放入荧光设备中,在340 nm的激发波长下进行荧光测
    定,绘制荧光强度与凝血酶的浓度关系,实现对凝血酶的精确检测。
    2.根据权利要求书1所述用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建,其特征在于,
    在步骤1.3中所述对色谱纸的工作区域进行功能化地具体步骤为:用移液枪量取100 μL 金
    纳米粒子滴于亲水的工作区域,然后在室温下自然干燥,重复5次,二次水洗涤,室温下干燥
    静置;将1.0 mL 1wt% 氯金酸水溶液和2.5 mL 1% 氯铂酸溶液快速混匀,移液枪量取60 μL
    混合液滴加到工作区域,然后用移液枪迅速量取40 μL新鲜配制的1wt%柠檬酸钠水溶液滴
    到工作区域,反应30 min后用二次水冲洗,然后用移液枪量取100μL 1 μM 适配体1滴于工
    作区域孵化1 h, 用pH为 7.4 磷酸缓冲溶液清洗三次后用1%的牛血清白蛋白溶液封锁非
    活性位点。
    3.根据权利要求书1所述用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建,其特征在于,
    在步骤1.4中所述的[email protected]的制备步骤为:称取0.3 g 炭黑溶于60 mL 6 M硝酸中,超声2
    h后在120 °C条件下回流24 h,将上述溶液降到室温后离心并干燥,然后将产物溶于二次水
    后透析三天,得到石墨烯量子点;称取3.5 g可溶性淀粉溶于80 mL 沸水中,在85 oC下搅拌
    5 min后加入6 mmol 六水合硝酸锌,通过逐滴加入氢氧化钠将溶液pH调至8-9后继续加热
    30 min,然后将获得的沉淀离心、洗涤并在500 oC下焙烧2 h获得多孔氧化锌,称取0.6 g获
    得的多孔氧化锌溶于0.1 mM 的对巯基苯胺溶液中搅拌4 h;移液枪量取500μL合成好的量
    子点与2 mL 功能化的氧化锌混合后在10 mg·mL-1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚
    胺盐酸盐和20 mg·mL-1的 N-羟基丁二酰亚胺作用下反应30 min,离心,洗涤后溶于3 mL磷
    酸缓冲溶液中。

    关 键 词:
    一种 用于 凝血酶 检测 纸基适体 荧光 传感器 构建
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