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    重庆时时彩开不出号码: 一种基于TIOSUB2/SUB介晶纳米材料的双响应夹心型免疫传感器的制备方法及应用.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201610985908.1

    申请日:

    2016.11.09

    公开号:

    CN106526159A

    公开日:

    2017.03.22

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||著录事项变更IPC(主分类):G01N 33/53变更事项:发明人变更前:林燕语 戴宏 高利红变更后:林燕语 衣欢 戴宏 高利红 林丹玫|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/53申请日:20161109|||公开
    IPC分类号: G01N33/53; G01N33/535 主分类号: G01N33/53
    申请人: 福建师范大学
    发明人: 林燕语; 戴宏; 高利红
    地址: 350108 福建省福州市闽侯上街镇大学城福建师范大学科技处
    优先权:
    专利代理机构: 福州智理专利代理有限公司 35208 代理人: 王义星
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201610985908.1

    授权公告号:

    |||||||||

    法律状态公告日:

    2018.04.03|||2018.02.06|||2017.04.19|||2017.03.22

    法律状态类型:

    授权|||著录事项变更|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开一种基于TiO2介晶纳米材料的双响应夹心型免疫传感器的制备方法及应用,特点是基于两种TiO2介晶纳米材料,结合电化学及电化学发光方法,制备一种新的双响应夹心型免疫传感器,并用于白介素6的检测。锐钛矿型TiO2介笼材料和离子液体,分别用于固定Ru(bpy)32+和IL?6抗体,作为信号探针和分子识别探针;八面体锐钛矿型TiO2介晶材料用于固定辣根过氧化物酶标记的IL?6二抗和酸性磷酸酶,其将通过典型的夹心型免疫反应自组装到电极表面,制得IL?6夹心型免疫传感器。所制备的传感器可产生电化学信号及电化学发光信号,信号值与IL?6浓度分别在10?6?90?pg/mL范围内及10?8?90?pg/mL范围内成线性。

    权利要求书

    1.一种基于TiO2介晶纳米材料的双响应夹心型免疫传感器的制备方法,其特征在于,包
    括以下步骤:
    玻碳电极(GCE):首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光,用二次水洗去表面残
    留粉末,再移入超声水浴中清洗,直至清洗干净,最后依序用乙醇,稀酸和水彻底洗涤;
    滴加4μL锐钛矿型TiO2 介笼(AMCs)/Ru(bpy)32+溶液于干净的玻碳电极表面,60°C下干
    燥20min,制得AMCs/Ru(bpy)32+/GCE修饰电极;
    滴加4μL 羧基化离子液体(CTIL)溶液于AMCs/Ru(bpy)32+/GCE修饰电极表面,60°C下干
    燥20min,制得CTIL/AMCs/Ru(bpy)32+/GCE修饰电极;
    将CTIL/AMCs/Ru(bpy)32+/GCE修饰电极浸入浓度比为1:2的(1-(3-二甲氨基丙基)-3-
    乙基碳二亚胺盐酸盐)(EDC)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)混合液中50min,再浸入5 μL浓度为
    2 mg/mL白介素6抗体(Ab1)溶液中并在4°C冰箱中孵育45min,用去离子水洗去物理吸附的
    Ab1,制得Ab1/CTIL/AMCs/Ru(bpy)32+/GCE修饰电极;
    将Ab1/CTIL/AMCs/Ru(bpy)32+/GCE修饰电极浸入0.5 wt.%的BSA溶液中并在4°C冰箱中
    孵育1 h,以封闭电极表面上非特异性活性位点,用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附,
    并保存在4°C冰箱中;
    将步骤(5)获得的电极浸入不同浓度的白介素6(IL-6)标准溶液中并在4°C冰箱中孵育
    30 min,用pH7.5的 PBS缓冲溶液冲洗电极表面,制得IL-6/Ab1/CTIL/AMCs/Ru(bpy)32+/
    GCE修饰电极;
    将IL-6/Ab1/CTIL/AMCs/Ru(bpy)32+/ GCE修饰电极浸入辣根过氧化物酶(HRP)标记的
    IL-6二抗(Ab2)和酸性磷酸酶(ACP)及八面体锐钛矿型TiO2介晶(OAMs)(Ab2-HRP/ACP/OAMs)
    复合物溶液并在4°C冰箱中孵育40 min,用pH7.5的 PBS缓冲溶液冲洗电极表面,制得Ab2-
    HRP/ACP/OAMs/IL-6/Ab1/CTIL/AMCs/Ru(bpy)32+/GCE,并保存在4°C冰箱中。
    2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的锐钛矿型TiO2 介笼(AMCs)/Ru
    (bpy)32+溶液由下述方法制备:500 μL 浓度为10mg/mL 的AMCs溶液 与 500 μL 浓度为
    0.01mol/L的 Ru(bpy)32+ 溶液混合2 h,在10000 rpm转速下离心 10 min,收集AMCs/Ru
    (bpy)32+沉淀物,在去离子水中重新分散以备使用。
    3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的锐钛矿型TiO2 介笼(AMCs)材料由下
    述方法制备的:4.5g的十二烷基硫酸钠(SDS)溶解在150ml浓度为2 mol/L的盐酸溶液中,搅
    拌5分钟;加入4.5ml异丙醇(TIP)钛(IV),在80°C下搅拌48 h,离心收集沉淀物并用蒸馏水
    彻底清洗;在60°C下烘干12 h,然后在空气中400°C下煅烧30min,以除去残余的有机物,制
    得AMCs。
    4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的辣根过氧化物酶(HRP)标记的IL-6
    二抗(Ab2)和酸性磷酸酶(ACP)及八面体锐钛矿型TiO2介晶(OAMs)(Ab2-HRP/ACP/OAMs)复合
    物溶液由下述方法制备:1 mL OAMs 悬浮液 与40μL(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APTES)在
    室温下搅拌12 h,离心收集氨基化的OAMs沉淀物并用蒸馏水彻底清洗去掉多余的APTES;将
    20ul浓度为10mg/ml HRP标记的Ab2溶液及浓度为1mg/ml的 ACP与10 μL 浓度为10 mM的
    (1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)(EDC)及10 μL浓度为20 mM的 N-羟基琥珀
    酰亚胺(NHS)混合50 min,加入氨基功能化的 OAMs 溶液4℃放置12 h,在 10000 rpm 转速
    下离心 10 min 获得Ab2-HRP/ACP/OAMs复合物并分散在pH 7.4 PBS溶液中保存。
    5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的八面体锐钛矿型TiO2介晶(OAMs)材
    料由下述方法制备的:1.2克的锐钛矿型TiO2粉末溶解于60mL浓度为18mol/ml的 KOH溶液
    中,搅拌20分钟后,将悬浮液移入一个100ml聚四氟乙烯内衬不锈钢高压釜内;密封反应器,
    170oC 下反应72小时,冷却到室温;然后,用稀醋酸溶液洗涤沉淀至沉淀pH值为3.5,沉淀离
    心后在65oC下干燥12 小时得到产物钛酸纳米线.;取400mg前驱体钛酸纳米线分散在70ml
    稀醋酸中,于100聚四氟乙烯高压反应釜中200oC条件下反应 48h,所得到的产物用蒸馏水
    和无水乙醇离心洗涤,60oC条件下烘干12 h并400oC下煅烧 30分钟,以除去残余的有机物,
    制得OAMs。
    6.权利要求1-5任一所述的方法制备的一种基于TiO2介晶纳米材料的双响应夹心型免
    疫传感器。
    7.权利要求6所述的一种基于TiO2介晶纳米材料的双响应夹心型免疫传感器,其特征在
    于,用于白介素6(IL-6)的检测,检测步骤如下:
    (1)使用电化学工作站采用三电极体系进行测定,以权利要求6所述的一种基于TiO2介
    晶纳米材料的双响应夹心型免疫传感器为工作电极,Ag/AgCl为参比电极,铂丝电极为对电
    极,在含有浓度为5×10-3 mol/ml 1-萘磷酸(NPP) 和浓度为15×10-3 mol/ml H2O2的PH7.5
    的 PBS缓冲溶液中进行测试,采用差示脉冲伏安法(DPV),扫描电压范围为0.2V–0.6 V,扫
    描速率为100 mV/s,通过所得的氧化峰电流信号与IL-6标准溶液浓度之间的关系,绘制电
    化学工作曲线;
    (2)使用电化学工作站采用三电极体系进行测定,以权利要求6所述的一种基于TiO2介
    晶纳米材料的双响应夹心型免疫传感器为工作电极,Ag/AgCl为参比电极,铂丝电极为对电
    极,在含有浓度为5×10-3 mol/ml 1-萘磷酸(NPP) 和浓度为15×10-3mol/ml H2O2的PH7.5
    的 PBS缓冲溶液中进行测试,采用循环伏安电压,扫描电压范围为0V–1.3 V,扫描速率为
    100 mV/s,通过电致化学发光设备采集电致化学发光信号,光电倍增管电压为900V,通过所
    得的电致化学发光强度与IL-6标准溶液浓度之间的关系,绘制电化学发光工作曲线;
    (3)待测样品溶液代替IL-6标准溶液进行检测,检测的结果通过工作曲线查得。

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    一种 基于 TIOSUB2 SUB 纳米 材料 双响 夹心 免疫 传感器 制备 方法 应用
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