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    重庆时时彩手机版下载: 猪肉中瘦肉精的快速检测.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201510584664.1

    申请日:

    2015.09.15

    公开号:

    CN106526166A

    公开日:

    2017.03.22

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/543申请日:20150915|||公开
    IPC分类号: G01N33/543 主分类号: G01N33/543
    申请人: 陈军; 那晶晶
    发明人: 陈军
    地址: 215000 江苏省苏州市苏州工业园区苏惠路98号
    优先权:
    专利代理机构: 苏州翔远专利代理事务所(普通合伙) 32251 代理人: 王华
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201510584664.1

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.04.19|||2017.03.22

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种快速定量检测猪肉中瘦肉精(盐酸克伦特罗和莱克多巴胺)的金磁免疫层析试纸条,包括底板以及附着在底板上依次相连的样品垫、结合物释放垫、多孔滤膜和吸收垫,多孔滤膜上依次涂有盐酸克伦特罗?BSA偶联抗原的检测T1线、莱克多巴胺?BSA偶联抗原的检测T2线以及涂布羊抗小鼠二抗的质控C线,样品垫上包埋有金磁纳米颗粒标记的盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的单克隆抗体。该试纸条结合了胶体金试纸条显色、生物亲和性特点以及纳米磁珠的易于分离、可定量化检测的特点,制备的试纸条可以通过目测来进行定性检测,也可通过磁性的测量来进一步定量检测。

    权利要求书

    1.一种用于检测猪肉中瘦肉精的金磁侧向流层析测定装置,包括沿待检测液体流动方向设置的结合物释放垫、多孔滤膜,其中:结合物释放垫沉积有金磁纳米颗粒标记的盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的单克隆抗体作为待释放的结合物探针;多孔滤膜叠置在固相的支持垫上,与结合物释放垫流体连通,且设置有检测区域;所述检测区域分别固定有盐酸克伦特罗-BSA偶联抗原和莱克多巴胺-BSA偶联抗原。2.根据权利要求 1 所述的金磁侧向流层析测定装置,沿所述液体流动方向还设置有而与所述检测区域物理性分离的指示区域,所述指示区域固定有羊抗小鼠二抗。3.根据权利要求 2 所述的金磁侧向流层析测定装置,还包括沿所述液体流动方向设置的吸收垫,用于收集流经所述检测区域和指示区域的液体。4.根据权利要求 1 所述的金磁侧向流层析测定装置,其中金磁纳米颗粒为核壳结构,其粒径在20~80nm范围内;优选的,金磁纳米颗粒的粒径为40nm。5.根据权利要求 4 所述的金磁侧向流层析测定装置,其中金磁纳米颗粒是内层为γ-Fe2O3,外层为Au包覆的核壳纳米复合材料。6.根据权利要求 1 所述的金磁侧向流层析测定装置,其中检测区域包括2个检测区域,第一检测区域固定有盐酸克伦特罗-BSA偶联抗原,第二检测区域固定有莱克多巴胺-BSA偶联抗原。7.一种用于检测猪肉中瘦肉精的金磁侧向流层析试纸条,包括:(1) 叠置在固相支持垫上的多孔滤膜,其中所述多孔滤膜设置有沿液体流动方向而被物理性分离的检测区域和指示区域;所述检测区域分别固定有盐酸克伦特罗-BSA偶联抗原和莱克多巴胺-BSA偶联抗原;所述指示区域固定有羊抗小鼠二抗;(2)结合物释放垫,与所述多孔滤膜流体连通,且沉积有与液体样品接触后可释放的结合物探针,其中所述结合物探针为金磁纳米颗粒标记的盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的单克隆抗体;(3) 吸收垫,用于收集流经所述检测和指示区域的所述液体。8. 一种用于检测猪肉中瘦肉精是否存在及其含量的方法,包括下列步骤:i) 提供一种金磁侧向流层析测定装置,包括结合物释放垫、与结合物释放垫流体连通的多孔滤膜,该结合物释放垫中沉积有与待测分析物特异性结合的结合物探针,所述结合物探针为金磁纳米颗粒标记的盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的单克隆抗体;所述多孔滤膜上设置检测区域、检测区域下游的指示区域,所述检测区域分别固定有与待测分析物特异性结合的盐酸克伦特罗-BSA偶联抗原和莱克多巴胺-BSA偶联抗原,所述指示区域固定有与所述结合物探针特异性结合的羊抗小鼠二抗;ii) 使所述测试样品与所述结合物探针接触,并使测试样品带动所述结合物探针流动到所述检测区域和所述指示区域;iii) 使所述检测区域和指示区域分别经过磁性阅读仪,分别通过磁性阅读仪获取所述磁性信号的强度;其中指示区域的磁性信号作为指示信号;iv) 根据所述检测信号的强度获取所述测试样品内的所述分析物的数量,其中在所述测试样品内的所述分析物的数量与所述检测信号的强度成正比。9.根据权利要求 8 所述的方法,其中金磁纳米颗粒标记的盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的单克隆抗体按照如下步骤进行制备:(1)γ-Fe2O3纳米颗粒制备:以FeCl3、FeCl2为原料通过化学共沉淀法获取Fe3O4纳米颗粒;清洗后将获得Fe3O4纳米颗粒分散在HNO3溶液加热至90℃反应1小时,反应完全后得到γ-Fe2O3纳米颗粒;(2)核壳结构的金磁纳米颗粒制备:将制得的γ-Fe2O3纳米颗粒分散在纯水中稀释至1.1mol/L;在柠檬酸钠作为表面活性剂的条件下依次加入NH2OH·HCl、氯金酸进行反应;重复依次加入NH2OH·HCl、氯金酸进行反应获得金磁纳米颗粒即Au/Fe2O3胶体颗粒;(3)金磁纳米颗粒标记的盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的单克隆抗体制备:将制备的金磁纳米颗粒,用pH=7.4的PBS缓冲溶液润洗后,磁铁分离出金磁纳米颗粒,然后在pH=7.4的PBS缓冲溶液中分散,缓慢加入等摩尔比的盐酸克伦特罗抗体和莱克多巴胺抗体,并震荡摇匀,缓慢加入PEG20000,继续震荡20min,加入10%的牛血清蛋白溶液至终浓度为1%,磁性分离,弃上清,沉淀用pH=7.4的PBS缓冲溶液清洗,磁性分离,制得的金磁-盐酸克伦特罗抗体和金磁-莱克多巴胺抗体分散于pH=7.4的PBS缓冲溶液中,4℃保存。10.根据权利要求 8 所述的方法,其中所述测试样品进行检测前需要进行预处理,将猪肉样品用均质机5000r/min搅拌1分钟,称取绞碎后的样品0.5±0.05g于10mL塑料离心管中,向管中加入2mL提取液(pH=7.4的PBS缓冲溶液),涡旋1min,超声20min,置于离心机中8000r/min离心10min。

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    猪肉 瘦肉精 快速 检测
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