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    重庆时时彩大众版: 一种禽肉中四环素类检测方法及检测卡.pdf

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    一种 禽肉 四环素 检测 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201611078778.X

    申请日:

    2016.11.30

    公开号:

    CN106526175A

    公开日:

    2017.03.22

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/558申请日:20161130|||公开
    IPC分类号: G01N33/558; G01N33/543 主分类号: G01N33/558
    申请人: 百奥森(江苏)食品安全科技有限公司
    发明人: 周合; 张根义; 张进; 周朱晨; 杨敏; 胡彬; 吴念绮
    地址: 214070 江苏省无锡市滴翠路100号创意园三期A幢303
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201611078778.X

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.08.31|||2017.04.19|||2017.03.22

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种禽肉中四环素类检测方法及检测卡,包括微孔试剂和试纸,所述试纸包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、?;つず偷装?,所述样品吸收垫的下表面固定连接有反应膜,所述反应膜的下表面固定连接有吸水垫,所述吸水垫的下表面固定连接有?;つ?,所述?;つさ南卤砻婀潭佑械装?,所述反应膜上有检测区和质控区。本发明提供了一种禽肉中四环素类检测卡,本发明特异性强,敏感性高,符合我国四环素的限量检测要求,实现了四环素残留的快速检测,大大节省了检测时间,用于现场检测在5min内即可判定检测结果,简便快速,可快速检测禽肉中四环素的含量,保障食品安全,减少三甲氧苄氨嘧啶对人类身体的危害。

    权利要求书

    1.一种禽肉中四环素类检测卡,包括微孔试剂和试纸,其特征在于:所述试纸包括反应
    膜、样品吸收垫、吸水垫、?;つず偷装?,所述样品吸收垫的下表面固定连接有反应膜,所述
    反应膜的下表面固定连接有吸水垫,所述吸水垫的下表面固定连接有?;つ?,所述?;つ?br />的下表面固定连接有底板,所述反应膜上有检测区和质控区,且检测区位于质控区的一侧,
    检测区包被有四环素半抗原-载体蛋白偶联物,质控区包被有抗抗体,所述微孔试剂中冻干
    有四环素类药物特异性抗体-胶体金标记物。
    2.根据权利要求1所述的一种禽肉中四环素类检测卡,其特征在于:所述底板为PVC板,
    所述样品吸收垫为吸滤纸,所述吸水垫为吸水纸,所述反应膜为硝酸纤维素膜,所述?;つ?br />为PE材质?;つ?。
    3.根据权利要求1所述的一种禽肉中四环素类检测卡,其特征在于:所述?;つど嫌∮?br />MAX标记线。
    4.一种禽肉中四环素类检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
    S1、将禽类肉品洗净,剁碎后后,称取5-10g禽类肉品置于50mL的离心管中,加入2-4mL
    的0.01mol/L的三氯乙酸去除肉中的蛋白质,液体混匀器上涡旋混合1-2min后,过0.2μm滤
    膜;
    S2、将滤渣置于50mL离心管中,再向离心管中加入纯净水和乙酸乙酯各2mL,将瓶塞盖
    紧密封,用振荡器振荡8-10min;
    S3、向离心管中加入30mL的0.1mol/L的乙二胺四乙酸钠缓冲液,且乙二胺四乙酸钠缓
    冲液的PH值为4-6,将离心管置于液体混匀器上涡旋混合1-2min,再用振荡器振荡8-10min,
    离心10-12min,将上清液于100mL容量瓶中,残渣中加乙二胺四乙酸钠缓冲液20mL,重复提
    取一次,再将装入100mL容量瓶中;
    S4、用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中,将小玻璃杯放进30-45℃的恒温箱中,将上清
    液中的水分蒸干,然后用0.3mL体积稀释液复溶杯底固体,得到检测液;
    S5、将检测液在减压情况下以3-5mL/min的流速通过活化好的羧酸型阳离子交换柱,待
    洗脱液全部流出后,用5mL甲醇洗柱,弃去全部流出液,在65kPa的负压下,减压抽干5-8min,
    再用4mL流动相乙腈-甲醇0.01mol/ml草酸混合液洗脱,收集洗脱液于锥形瓶中;
    S6、用微量移液器移取200μl于微孔中,将标记好的试纸条插入微孔中,印有MAX线端朝
    下,使之充分浸入溶液中,室温20-25℃下孵育5min后,取出试纸条,判定结果。
    5.根据权利要求4所述的一种禽肉中四环素类检测方法,其特征在于,在S3中,在离心
    过程中,离心的功率为1000r/min。
    6.根据权利要求4所述的一种禽肉中四环素类检测方法,其特征在于,在S2和S3中,在
    震荡过程中,振荡器的功率为800-1000W。

    说明书

    一种禽肉中四环素类检测方法及检测卡

    技术领域

    本发明涉及禽肉检测技术领域,尤其涉及一种禽肉中四环素类检测方法及检测
    卡。

    背景技术

    四环素类药物具有广谱高效的杀菌抗生功效,可以与大多数药物或饲料添加剂混
    用,已被广泛应用于畜禽生产中。但过量使用不可避免的造成了严重的药物残留,成为严重
    危害人类健康的食品安全隐患之一。为此世界各国对四环素类药物残留的检测十分关注。
    欧盟第675/92号令中初步规定在肌肉及牛奶中的四环素类化合物的总量不得超过100μg/
    kg,在肾脏、肝脏及鸡蛋中分别不得超过600μg/kg、300μg/kg及200μg/kg。日本肯定列表制
    度规定奶和鸡蛋中四环素类化合物的总量分别不得超过100ng/mL和400ng/mg。

    四环素类药物残留的检测方法中理化检测主要有薄层色谱法毛细管电泳法、高效
    液相色谱法、化学发光法和液相色谱-质谱联用技术等。生物学检测方法主要分为微生物法
    和免疫分析法等。但这些方法有的需要昂贵的仪器设备,需要熟练的专业人员操作,操作过
    程复杂,需要时间较长,限制了其应用范围,难以在生产实际中推广应用。免疫试纸法具有
    半定量和一定的定量能力,可以提供待测物的初步信息,该法灵敏度高,分析过程简单,是
    需要优先发展的检测技术,以便于检测禽肉中四环素的含量。

    发明内容

    基于背景技术存在的技术问题,本发明提出了一种禽肉中四环素类检测方法及检
    测卡,具有分析过程简单、灵敏度高且操作简便的特点,解决检测禽肉中四环素的含量要熟
    练的专业人员操作,操作过程复杂,需要时间较长的问题。

    本发明提供如下技术方案:一种禽肉中四环素类检测卡,包括微孔试剂和试纸,所
    述试纸包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、?;つず偷装?,所述样品吸收垫的下表面固定连
    接有反应膜,所述反应膜的下表面固定连接有吸水垫,所述吸水垫的下表面固定连接有保
    护膜,所述?;つさ南卤砻婀潭佑械装?,所述反应膜上有检测区和质控区,且检测区位
    于质控区的一侧,检测区包被有四环素半抗原-载体蛋白偶联物,质控区包被有抗抗体,所
    述微孔试剂中冻干有四环素类药物特异性抗体-胶体金标记物。

    优选地,所述底板为PVC板,所述样品吸收垫为吸滤纸,所述吸水垫为吸水纸,所述
    反应膜为硝酸纤维素膜,所述?;つの狿E材质?;つ?。

    优选地,所述?;つど嫌∮蠱AX标记线。

    一种禽肉中四环素类检测方法,包括如下步骤:

    S1、将禽类肉品洗净,剁碎后后,称取5-10g禽类肉品置于50mL的离心管中,加入2-4mL
    的0.01mol/L的三氯乙酸去除肉中的蛋白质,液体混匀器上涡旋混合1-2min后,过0.2μm滤
    膜。

    S2、将滤渣置于50mL离心管中,再向离心管中加入纯净水和乙酸乙酯各2mL,将瓶
    塞盖紧密封,用振荡器振荡8-10min。

    S3、向离心管中加入30mL的0.1mol/L的乙二胺四乙酸钠缓冲液,且乙二胺四乙酸
    钠缓冲液的PH值为4-6,将离心管置于液体混匀器上涡旋混合1-2min,再用振荡器振荡8-
    10min,离心10-12min,将上清液于100mL容量瓶中,残渣中加乙二胺四乙酸钠缓冲液20mL,
    重复提取一次,再将装入100mL容量瓶中。

    S4、用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中,将小玻璃杯放进30-45℃的恒温箱中,将
    上清液中的水分蒸干,然后用0.3mL体积稀释液复溶杯底固体,得到检测液。

    S5、将检测液在减压情况下以3-5mL/min的流速通过活化好的羧酸型阳离子交换
    柱,待洗脱液全部流出后,用5mL甲醇洗柱,弃去全部流出液,在65kPa的负压下,减压抽干5-
    8min,再用4mL流动相乙腈-甲醇0.01mol/ml草酸混合液洗脱,收集洗脱液于锥形瓶中。

    S6、用微量移液器移取200μl于微孔中,将标记好的试纸条插入微孔中,印有MAX线
    端朝下,使之充分浸入溶液中,室温20-25℃下孵育5min后,取出试纸条,判定结果。

    优选地,在S3中,在离心过程中,离心的功率为1000r/min。

    优选地,在S2和S3中,在震荡过程中,振荡器的功率为800-1000W。

    本发明提供了一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法及试剂盒,具备以下有益效
    果:

    本发明提供了一种禽肉中四环素类检测卡,本发明特异性强,敏感性高,符合我国四环
    素的限量检测要求,实现了四环素残留的快速检测,大大节省了检测时间,用于现场检测在
    5min内即可判定检测结果,简便快速,可快速检测禽肉中四环素的含量,保障食品安全,减
    少三甲氧苄氨嘧啶对人类身体的危害。

    具体实施方式

    基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获
    得的所有其他实施例,都属于本发明?;さ姆段?。

    本发明提供一种技术方案:一种禽肉中四环素类检测卡,包括微孔试剂和试纸,试
    纸包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、?;つず偷装?,底板为PVC板,样品吸收垫为吸滤纸,吸
    水垫为吸水纸,反应膜为硝酸纤维素膜,?;つの狿E材质?;つ?,?;つど嫌∮蠱AX标记线,
    样品吸收垫的下表面固定连接有反应膜,反应膜的下表面固定连接有吸水垫,吸水垫的下
    表面固定连接有?;つ?,?;つさ南卤砻婀潭佑械装?,反应膜上有检测区和质控区,且
    检测区位于质控区的一侧,检测区包被有四环素半抗原-载体蛋白偶联物,质控区包被有抗
    抗体,微孔试剂中冻干有四环素类药物特异性抗体-胶体金标记物。

    下面,通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

    实施例1

    一种禽肉中四环素类检测方法,包括如下步骤:

    S1、将禽类肉品洗净,剁碎后后,称取5g禽类肉品置于50mL的离心管中,加入2mL的
    0.01mol/L的三氯乙酸去除肉中的蛋白质,液体混匀器上涡旋混合1min后,过0.2μm滤膜。

    S2、将滤渣置于50mL离心管中,再向离心管中加入纯净水和乙酸乙酯各2mL,将瓶
    塞盖紧密封,用振荡器振荡8min,在震荡过程中,振荡器的功率为800-1000W。

    S3、向离心管中加入30mL的0.1mol/L的乙二胺四乙酸钠缓冲液,且乙二胺四乙酸
    钠缓冲液的PH值为4,将离心管置于液体混匀器上涡旋混合1min,再用振荡器振荡8-10min,
    在震荡过程中,振荡器的功率为800-1000W,离心10min,在离心过程中,离心的功率为
    1000r/min,将上清液于100mL容量瓶中,残渣中加乙二胺四乙酸钠缓冲液20mL,重复提取一
    次,再将装入100mL容量瓶中。

    S4、用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中,将小玻璃杯放进30℃的恒温箱中,将上
    清液中的水分蒸干,然后用0.3mL体积稀释液复溶杯底固体,得到检测液。

    S5、将检测液在减压情况下以3mL/min的流速通过活化好的羧酸型阳离子交换柱,
    待洗脱液全部流出后,用5mL甲醇洗柱,弃去全部流出液,在65kPa的负压下,减压抽干5min,
    再用4mL流动相乙腈-甲醇0.01mol/ml草酸混合液洗脱,收集洗脱液于锥形瓶中。

    S6、用微量移液器移取200μl于微孔中,将标记好的试纸条插入微孔中,印有MAX线
    端朝下,使之充分浸入溶液中,室温20℃下孵育5min后,取出试纸条,判定结果,当质控区显
    示出条带,检测区不显示,判为阳性,四环素含量未超标,当质控区和检测区均显示出条带,
    判为阴性,四环素含量超标,当质控区不显示条带,试纸失效。

    实施例2

    一种禽肉中四环素类检测方法,包括如下步骤:

    S1、将禽类肉品洗净,剁碎后后,称取10g禽类肉品置于50mL的离心管中,加入4mL的
    0.01mol/L的三氯乙酸去除肉中的蛋白质,液体混匀器上涡旋混合2min后,过0.2μm滤膜。

    S2、将滤渣置于50mL离心管中,再向离心管中加入纯净水和乙酸乙酯各2mL,将瓶
    塞盖紧密封,用振荡器振荡10min,在震荡过程中,振荡器的功率为800-1000W。

    S3、向离心管中加入30mL的0.1mol/L的乙二胺四乙酸钠缓冲液,且乙二胺四乙酸
    钠缓冲液的PH值为6,将离心管置于液体混匀器上涡旋混合2min,再用振荡器振荡8-10min,
    在震荡过程中,振荡器的功率为800-1000W,离心12min,在离心过程中,离心的功率为
    1000r/min,将上清液于100mL容量瓶中,残渣中加乙二胺四乙酸钠缓冲液20mL,重复提取一
    次,再将装入100mL容量瓶中。

    S4、用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中,将小玻璃杯放进45℃的恒温箱中,将上
    清液中的水分蒸干,然后用0.3mL体积稀释液复溶杯底固体,得到检测液。

    S5、将检测液在减压情况下以5mL/min的流速通过活化好的羧酸型阳离子交换柱,
    待洗脱液全部流出后,用5mL甲醇洗柱,弃去全部流出液,在65kPa的负压下,减压抽干8min,
    再用4mL流动相乙腈-甲醇0.01mol/ml草酸混合液洗脱,收集洗脱液于锥形瓶中。

    S6、用微量移液器移取200μl于微孔中,将标记好的试纸条插入微孔中,印有MAX线
    端朝下,使之充分浸入溶液中,室温25℃下孵育5min后,取出试纸条,判定结果,当质控区显
    示出条带,检测区不显示,判为阳性,四环素含量未超标,当质控区和检测区均显示出条带,
    判为阴性,四环素含量超标,当质控区不显示条带,试纸失效。

    实施例3

    一种禽肉中四环素类检测方法,包括如下步骤:

    S1、将禽类肉品洗净,剁碎后后,称取8g禽类肉品置于50mL的离心管中,加入3mL的
    0.01mol/L的三氯乙酸去除肉中的蛋白质,液体混匀器上涡旋混合1min后,过0.2μm滤膜。

    S2、将滤渣置于50mL离心管中,再向离心管中加入纯净水和乙酸乙酯各2mL,将瓶
    塞盖紧密封,用振荡器振荡9min,在震荡过程中,振荡器的功率为800-1000W。

    S3、向离心管中加入30mL的0.1mol/L的乙二胺四乙酸钠缓冲液,且乙二胺四乙酸
    钠缓冲液的PH值为5,将离心管置于液体混匀器上涡旋混合2min,再用振荡器振荡8-10min,
    在震荡过程中,振荡器的功率为800-1000W,离心11min,在离心过程中,离心的功率为
    1000r/min,将上清液于100mL容量瓶中,残渣中加乙二胺四乙酸钠缓冲液20mL,重复提取一
    次,再将装入100mL容量瓶中。

    S4、用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中,将小玻璃杯放进40℃的恒温箱中,将上
    清液中的水分蒸干,然后用0.3mL体积稀释液复溶杯底固体,得到检测液。

    S5、将检测液在减压情况下以4mL/min的流速通过活化好的羧酸型阳离子交换柱,
    待洗脱液全部流出后,用5mL甲醇洗柱,弃去全部流出液,在65kPa的负压下,减压抽干6min,
    再用4mL流动相乙腈-甲醇0.01mol/ml草酸混合液洗脱,收集洗脱液于锥形瓶中。

    S6、用微量移液器移取200μl于微孔中,将标记好的试纸条插入微孔中,印有MAX线
    端朝下,使之充分浸入溶液中,室温22℃下孵育5min后,取出试纸条,判定结果,当质控区显
    示出条带,检测区不显示,判为阳性,四环素含量未超标,当质控区和检测区均显示出条带,
    判为阴性,四环素含量超标,当质控区不显示条带,试纸失效。

    实施例4

    S1、将禽类肉品洗净,剁碎后后,称取5g禽类肉品置于50mL的离心管中,加入4mL的
    0.01mol/L的三氯乙酸去除肉中的蛋白质,液体混匀器上涡旋混合1min后,过0.2μm滤膜。

    S2、将滤渣置于50mL离心管中,再向离心管中加入纯净水和乙酸乙酯各2mL,将瓶
    塞盖紧密封,用振荡器振荡10min,在震荡过程中,振荡器的功率为800-1000W。

    S3、向离心管中加入30mL的0.1mol/L的乙二胺四乙酸钠缓冲液,且乙二胺四乙酸
    钠缓冲液的PH值为6,将离心管置于液体混匀器上涡旋混合2min,再用振荡器振荡8-10min,
    在震荡过程中,振荡器的功率为800-1000W,离心10min,在离心过程中,离心的功率为
    1000r/min,将上清液于100mL容量瓶中,残渣中加乙二胺四乙酸钠缓冲液20mL,重复提取一
    次,再将装入100mL容量瓶中。

    S4、用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中,将小玻璃杯放进40℃的恒温箱中,将上
    清液中的水分蒸干,然后用0.3mL体积稀释液复溶杯底固体,得到检测液。

    S5、将检测液在减压情况下以3mL/min的流速通过活化好的羧酸型阳离子交换柱,
    待洗脱液全部流出后,用5mL甲醇洗柱,弃去全部流出液,在65kPa的负压下,减压抽干5min,
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    端朝下,使之充分浸入溶液中,室温20℃下孵育5min后,取出试纸条,判定结果,当质控区显
    示出条带,检测区不显示,判为阳性,四环素含量未超标,当质控区和检测区均显示出条带,
    判为阴性,四环素含量超标,当质控区不显示条带,试纸失效。

    以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的?;し段Р⒉痪窒抻诖?,
    任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其
    发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的?;し段е?。

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