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    重庆时时彩怎么抓豹子: 一种用于检测MIRNA20A的硼掺杂石墨烯量子点电化学发光传感器的制备及其应用.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201510170878.4

    申请日:

    2015.04.10

    公开号:

    CN104764782A

    公开日:

    2015.07.08

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 27/30申请日:20150410|||公开
    IPC分类号: G01N27/30; G01N21/76 主分类号: G01N27/30
    申请人: 大连理工大学
    发明人: 赵慧敏; 张婷婷; 李亚璇; 李莉; 范高峰; 全燮
    地址: 116024辽宁省大连市甘井子区凌工路2号
    优先权:
    专利代理机构: 大连理工大学专利中心21200 代理人: 赵连明; 梅洪玉
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201510170878.4

    授权公告号:

    104764782B||||||

    法律状态公告日:

    2017.06.13|||2015.08.05|||2015.07.08

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明属于生物领域,涉及一种用于检测miRNA-20a的硼掺杂石墨烯量子点电化学发光传感器的制备及其应用。向铂电极滴加纳米金和BGQDs-DNA,使其在电极表面的体积为2-8μL/mm2和2-6μL/mm2。室温干燥,将电极浸入含有不同浓度待测miRNA-20a的缓冲液中,在37℃下反应0.5-3h,用PBS缓冲溶液清洗电极。用多通道化学发光检测系统检测电极电化学发光信号,电解液为0.1M PBS含0.1M KCl及0.05M K2S2O8,电压0.7~1.15V,扫描速率0.1V/s,光电倍增管高压600V。本发明的电化学发光检测方法比传统分析方法成本低、操作简单、实用性强。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种用于检测miRNA-20a的硼掺杂石墨烯量子点电化学发光传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
    (1)在冰浴状态下将浓硫酸加入到石墨粉中并搅拌,然后将高锰酸钾加入到上述的混合物中,持续搅拌20-48小时;加入H2O并静止10-60分钟,随后加入H2O和H2O2终止反应;将混合物离心分离,并用浓度为5%的盐酸和水分别清洗,得到石墨氧化物;其中所用的各物质的摩尔比为浓硫酸:石墨粉:高锰酸钾:H2O:H2O2=1:0.3:0.02:10:0.2;
    (2)向步骤(1)获得的石墨氧化物中加入H3BO3,混合物至60-100℃保温6-12小时;将产物用水清洗,真空冷冻干燥,得到硼掺杂的石墨烯棒;其中石墨氧化物与H3BO3的质量比为250-5000;
    (3)以步骤(2)获得的硼掺杂的石墨烯棒为工作电极,以石墨棒为对电极通过电化学方法制备硼掺杂石墨烯量子点,电解液为含有25-50mM NaOH的无水乙醇和水的混合液,无水乙醇和水的体积比=99:1-99.5:0.5,电流密度180-300mA/cm2,反应1-3小时,离心分离去除石墨杂质;将得到的离心液透析24-48小时,透析孔径小于5000Da,得到硼掺杂的石墨烯量子点水溶液;
    (4)向步骤(3)获得的硼掺杂的石墨烯量子点水溶液中加入NaOH和ClCH2COOH,超声;再加入150mg/ml的N-羟基丁二酰亚胺和10mg/ml的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺,反应10-60分钟;然后再加入100μM巯基标记的发夹状DNA,缓慢搅拌;最后将混合物离心,沉淀即为电化学发光探针BGQDs-DNA;将电化学发光探针BGQDs-DNA分散在0.1M Tris-EDTApH=8.0缓冲溶液中,储存于4℃备用;其中NaOH与ClCH2COOH的质量比为0.25-0.5,NHS与EDC的体积比1-3,硼掺杂的石墨烯量子点水溶液与巯基标记的发夹状DNA的体积比120-1200;
    (5)将AuNPs水溶液滴在铂电极表面,记为Pt/Au,AuNPs水溶液在铂电极表面的体积2-8μL/mm2,室温干燥,再将步骤(4)制得的BGQDs-DNA滴加到Pt/Au表面,BGQDs-DNA在Pt/Au表面的体积2-6μL/mm2,1-3小时后用0.1M磷酸盐pH=7.4缓冲溶液冲洗电极表面,即得硼掺杂石墨烯量子点电化学发光传感器。

    2.  根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)中巯基标记的发夹状DNA总碱基数为31-39,其主体部位,对应识别miRNA-20a碱基序列为5’-CTACCTGCACTATAAGCACTTTA-3’。

    3.  根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤(5)中的铂电极在使用前清洁方法如下:将铂电极在0.05-1μm粒径的氧化铝抛光粉的悬浮液中研磨,研磨后依次用无水乙醇和高纯水超声清洗,在N2?;は赂稍?。

    4.  权利要求1或2所述的制备方法得到的硼掺杂石墨烯量子点电化学发光传感器的应用,其特征在于,硼掺杂石墨烯量子点电化学发光传感器浸入到含有的miRNA-20a的TE缓冲液中,miRNA-20a的浓度为1-50000pM,37℃水浴条件下杂交0.5-3小时,然后用0.1M磷酸盐pH=7.4缓冲溶液冲洗电极表面,得到的电极为工作电极,铂丝电极为对电极,银/氯化银电极为参比电极,利用多通道化学发光测试系统检测电化学发光信号,检测是在含有0.1M KCl和0.05M K2S2O8的0.1M PBS pH=7.4缓冲溶液中,电压范围为0.7~1.15V,扫描速率0.1V/s,光电倍增管高压为600V。

    5.  权利要求3所述的制备方法得到的硼掺杂石墨烯量子点电化学发光传感器的应用,其特征在于,硼掺杂石墨烯量子点电化学发光传感器浸入到含有的miRNA-20a的TE缓冲液中,miRNA-20a的浓度为1-50000pM,37℃水浴条件下杂交0.5-3小时,然后用0.1M磷酸盐pH=7.4缓冲溶液冲洗电极表面,得到 的电极为工作电极,铂丝电极为对电极,银/氯化银电极为参比电极,利用多通道化学发光测试系统检测电化学发光信号,检测是在含有0.1M KCl和0.05M K2S2O8的0.1M PBS pH=7.4缓冲溶液中,电压范围为0.7~1.15V,扫描速率0.1V/s,光电倍增管高压为600V。

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    一种 用于 检测 MIRNA20A 掺杂 石墨 量子 电化学 发光 传感器 制备 及其 应用
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