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    重庆时时彩作弊工具: 一种提高平菇产漆酶能力的方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201510163166.X

    申请日:

    2015.04.08

    公开号:

    CN104737817A

    公开日:

    2015.07.01

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):A01G 1/04申请日:20150408|||公开
    IPC分类号: A01G1/04; C05G3/00 主分类号: A01G1/04
    申请人: 北京林业大学
    发明人: 吴雪君; 何双辉; 戴玉成
    地址: 100083北京市海淀区清华东路35号
    优先权:
    专利代理机构: 北京元本知识产权代理事务所11308 代理人: 何志原
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201510163166.X

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2017.04.12|||2015.08.19|||2015.07.01

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种提高平菇产漆酶能力的方法,包括:制备用于平菇栽培的干料;在所述干料中加入铜盐溶液,进行均匀混合,得到平菇培养基质;将所述平菇培养基质进行灭菌处理后,接种平菇种子液,利用所述平菇培养基质中的铜盐溶液提高平菇产漆酶能力。本发明的平菇培养基质可以大大提高平菇产漆酶的能力,进而提高平菇产量,为平菇高产培养基质的研制提供了新思路。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种提高平菇产漆酶能力的方法,其特征在于,包括如下步骤:
    制备用于平菇栽培的干料;
    在所述干料中加入铜盐溶液,进行均匀混合,得到平菇培养基质;
    将所述平菇培养基质进行灭菌处理后,接种平菇种子液,利用所述平菇培养基质中的铜盐溶液提高平菇产漆酶能力。

    2.  根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述铜盐溶液中铜离子的浓度为2.5-5.5mg/L。

    3.  根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述铜盐溶液中铜离子的浓度为4.5-5.0mg/L。

    4.  根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述干料的重量和所述铜盐溶液的体积之比为1:(1.2-1.5)。

    5.  根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述铜盐为硝酸铜、氯化铜、醋酸铜中的一种或多种。

    6.  根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述制备用于平菇栽培的干料包括:
    将木屑粉碎至3-5cm;
    将3-5mm的木屑置于爆破器中,通入饱和水蒸气,进行汽蒸处理;
    将爆破器的放料阀打开,对木屑进行爆破处理;
    将爆破处理后的木屑进行干燥处理;
    将干燥处理后的木屑与玉米芯、棉籽壳、淀粉、麸皮、石膏、石灰、尿素混合,搅拌均匀,即得。

    7.  根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述汽蒸处理的相对压力为1.5-2MPa,汽蒸处理时间为5-10min。

    8.  根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述的干燥处理的温度为100-200℃,干燥处理的时间为45-90min。

    9.  根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述干燥处理后的木屑、玉米芯、棉籽壳、淀粉、麸皮、石膏、石灰、尿素的重量份配比为:干燥处理后的木屑0.10-1.15、玉米芯0.10-1.15、棉籽壳0.5-0.7、淀粉0.05-0.15、麸皮0.05-0.15、石膏0.015-0.025、石灰0.015-0.025、尿素0.005-0.015。

    10.  根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述灭菌处理的温度为115-125℃,灭菌处理的压力为0.10-0.13MPa,灭菌处理的时间为25-35min。

    说明书

    说明书一种提高平菇产漆酶能力的方法
    技术领域
    本发明属于食用菌栽培技术领域,尤其涉及一种提高平菇产漆酶能力的方法。
    背景技术
    平菇学名粗皮侧耳Pleurotus ostreatus(Jacq.)P.Kumm.,在分类学上属担子菌门Basidiomycota,伞菌纲Agaricomycetes,伞菌目Agaricales,侧耳科Pleurotaceae,侧耳属Pleurotus,是最重要的食用菌之一,同时也是一种药用真菌,具有治疗腰腿疼痛,手足麻木,筋络不疏,抑肿瘤的作用。
    平菇主要依赖其产生的漆酶对木质纤维素进行降解,从而获得养分生长子实体(蘑菇)。漆酶(Lac)是一种含有4个铜原子的胞外糖蛋白,根据光谱和电子顺磁共振(EPR)特征可分为3类:I型Cu和II型Cu各1个,是单电受体,呈顺磁性;III型Cu有2个,是双电子受体,呈反磁性。在氧的参与下,Lac主要攻击木质素中的苯酚结构单元:苯酚的核失去1个电子而被氧化成含苯氧基的自由活性基团,结合酶活性中心---I型铜原子位点,通过Cys-His途径将电子传递给三核铜簇位点,该位点又把电子传递给氧,氧作为电子受体,发生4电子还原,生成2分子的H2O,同时伴随着Cα氧化、Cα-Cβ裂解和烷基-芳香基裂解等一系列反应。由于Lac的氧化还原电位较低,不能直接氧化降解木质素结构中占大多数的非酚型结构单元,因此需添加一些低氧化还原位的化合物作为氧化还原调节剂。这些调节剂在酶的作用下形成高活性的稳定中间体,再从氧分子中获得电子传递给木质素分子从而降解木质素。由于漆酶产量的高低直接影响着对木质纤维素降解应用,因此,漆酶的产量对平菇的产量有巨大影响。
    我国虽然为平菇生产大国,但不是生产强国,目前平菇栽培仍然存在单产低、产量不稳、品质差、效益低等问题。目前对平菇培养基质的研究主要是直接从提高平菇产量的角度对平菇培养基质的配方进行改进,而从提高平菇产漆酶能力的角度去改进平菇培养基质,进而提高平菇产量的方法还未见报道。
    发明内容
    本发明的目的是针对现有技术中的难题,提供一种提高平菇产漆酶能力的方法,通过采用汽蒸爆破处理后的木屑与玉米芯、棉籽壳作为主料,并辅以铜盐来配制平菇培养基质,使得平菇产漆酶的能力大大提高,进而提高平菇产量,为平菇高产培养基质的研究提供了新思路。
    为实现这一目的,本发明提供一种提高平菇产漆酶能力的方法,包括:
    制备用于平菇栽培的干料;
    在所述干料中加入铜盐溶液,进行均匀混合,得到平菇培养基质;
    将所述平菇培养基质进行灭菌处理后,接种平菇种子液,利用所述平菇培养基质中的铜盐溶液提高平菇产漆酶能力。
    其中,所述铜盐溶液中铜离子的浓度为2.5-5.5mg/L。
    特别是,所述铜盐溶液中铜离子的浓度为4.5-5.0mg/L。
    其中,所述干料的重量和所述铜盐溶液的体积之比为:1:(1.2-1.5),上述的重量体积比符合本领域最常规的习惯用法,以g/mL或kg/L为对应单位用量,例如向1g的干料中加入1.2-1.5mL铜盐溶液或向1kg的干料中加入1.2-1.5L的铜盐溶液。
    其中,所述铜盐为可溶性铜盐。
    特别是,所述铜盐为硝酸铜、氯化铜、醋酸铜中的一种或多种,优选为硝酸铜。
    其中,所述制备用于平菇栽培的干料包括:
    将木屑粉碎至3-5cm;
    将3-5mm的木屑置于爆破器中,通入饱和水蒸气,进行汽蒸处理;
    将爆破器的放料阀打开,对木屑进行爆破处理;
    将爆破处理后的木屑进行干燥处理;
    将干燥处理后的木屑与玉米芯、棉籽壳、淀粉、麸皮、石膏、石灰、尿素混合,搅拌均匀,即得。
    其中,所述木屑为杨木屑、梨木屑、苹果木屑、桃木屑、杏木屑、山楂木屑中的一种或多种,优选为杨木屑。
    其中,所述汽蒸处理的相对压力为1.5-2Mpa,汽蒸处理时间为5-10min。
    其中,所述的干燥处理的温度为100-200℃,干燥处理的时间为45-90min。
    其中,所述干燥处理后的木屑、玉米芯、棉籽壳、淀粉、麸皮、石膏、石灰、尿素 的重量份配比为:干燥处理后的木屑0.10-1.15、玉米芯0.10-1.15、棉籽壳0.5-0.7、淀粉0.05-0.15、麸皮0.05-0.15、石膏0.015-0.025、石灰0.015-0.025、尿素0.005-0.015。
    特别是,所述干燥处理后的木屑、玉米芯、棉籽壳、淀粉、麸皮、石膏、石灰、尿素的重量份配比为:干燥处理后的木屑0.39、玉米芯0.76、棉籽壳0.6、淀粉0.1、麸皮0.1、石膏0.02、石灰0.02、尿素0.01。
    其中,所述灭菌处理的温度为115-125℃,优选为121℃,灭菌处理的压力为0.10-0.13MPa,优选为0.12Mpa,灭菌处理的时间为25-35min,优选为30min。
    其中,所述平菇种子液按照如下方法制备而成:
    将平菇供试菌株接种在固体培养基上,进行活化培养,生长出菌丝;
    将菌丝接种至液体种子培养基中进行培养,得到一级种子液;
    将一级种子液接种至液体种子培养基中进行培养,得到二级种子液即为所述的平菇种子液。
    其中,所述固体培养基包括:去离子水、葡萄糖、麦芽浸粉、琼脂粉、KH2PO4,其中,每1000mL固体培养基中含有葡萄糖10.0g、麦芽浸粉20.0g、琼脂粉18.0g、KH2PO43.0g,其余为去离子水。
    其中,所述活化培养的条件为:密闭黑暗条件下,温度为26±2℃,时间为5-7天。
    其中,所述液体种子培养基包括:去离子水、葡萄糖、酵母浸粉、MgSO4、VB1、KH2PO4,其中,每1000mL液体培养基中含有葡萄糖20.00g、酵母浸粉5.00g、MgSO40.50g、VB10.01g、KH2PO41g,其余为去离子水。
    其中,所述一级种子液的培养条件为:温度为26±2℃,转速150r/min,培养7天。
    其中,所述一级种子液与所述液体种子培养基的体积之比为1:10。
    其中,所述二级种子液的培养条件为:温度为26±2℃,转速150r/min,培养5天。
    本发明方法具有如下优点:
    1、本发明的平菇培养基质采用蒸汽爆破处理过的木屑和玉米芯、棉籽壳为主料配制而成,并辅以铜盐,可以使平菇的产漆酶的能力大大提高,进而大大提高平菇的产量。
    2、本发明从提高平菇产漆酶能力的角度来改良平菇培养基质,为平菇高产培养基质的研制提供了新思路。
    3、本发明的平菇培养基质制备方法简单,成本低。
    4、采用本发明的平菇培养基质培育出的平菇品质好、产量高、铜含量在食用菌国标安全范围内。
    具体实施方式
    下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的?;し段?。
    本发明的供试菌株为平菇菌株Pleurotus ostreatus CCEF89,由中国农科院农业资源与农业区划研究所提供,该菌株目前是中国广泛栽培的品种。
    本发明的固体培养基成分为:葡萄糖10.0g/L,麦芽浸粉20.0g/L,琼脂粉18.0g/L,KH2PO43.0g/L,pH自然。
    本发明的液体种子培养基成分为:葡萄糖20.00g/L,酵母浸粉5.00g/L,MgSO40.50g/L,VB10.01g/L,KH2PO41g/L,pH自然。
    实施例1
    1、制备平菇培养基质
    1)木屑预处理
    将木屑粉碎至3-5cm;然后将木屑置于爆破器中,通入饱和水蒸气,在相对压力为1.5Mpa条件下,进行汽蒸处理10min;汽蒸处理结束后,迅速打开爆破器的放料阀,对木屑进行爆破处理;将爆破处理后的木屑置于温度为100℃的烘箱中进行干燥处理,干燥处理的时间为90min。
    2)按照如下重量配比备料

    将上述原料混合均匀,得到用于平菇栽培的干料,备用;
    3)将氯化铜和水混合,制得铜离子浓度为5mg/L的氯化铜溶液;
    4)在搅拌条件下,向干料中加入氯化铜溶液,搅拌均匀,得到平菇培养基质;
    其中,所述干料的重量与氯化铜溶液的体积之比为1:1.2,即向1g的干料中加入1.2mL氯化铜溶液或向1kg的干料中加入1.2L的氯化铜溶液。
    5)将平菇培养基质分装在锥形瓶中,每个锥形瓶装入2g平菇培养基质,然后置于高压蒸汽灭菌锅中,在温度为121℃,压力为0.12MPa条件下灭菌30min,取出,在消毒的洁净环境下自然冷却至25℃以下,即得。
    2、制备平菇种子液
    将平菇供试菌株在固体培养基上活化,待菌丝长满平板,用打孔器取长势一致、直径6mm的菌饼5块接种至装有液体种子培养基的三角瓶中进行摇瓶培养,液体种子培养基的装液量是三角瓶体积的2/5,即在250mL三角瓶中装入100mL液体种子培养基,在温度为26±2℃,转速150r/min条件下培养7天,得到一级种子液;
    将一级种子液进行匀浆处理后,按照10%(V/V)接种量接至装有液体种子培养基的三角瓶中进行摇瓶培养,液体种子培养基的装液量是三角瓶体积的2/5,即在250mL三角瓶中装入100mL液体种子培养基,在温度为26±2℃,转速150r/min条件下培养5天得到二级种子液;
    将二级种子液于4℃下保存,备用。
    3、接种与培养
    在无菌操作条件下,将2mL二级种子液接种至装有步骤1制备的平菇培养基质的锥形瓶中,在温度为26℃的黑暗密闭条件下进行发菌培养5天。
    4、提取漆酶粗酶液
    向接种培养后的锥形瓶中加入60mL 0.1mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.6),将锥形瓶置于摇床中,在温度为26℃,转速为150r/min条件下,提取4h,取出后在转速为12000r/min条件下离心10min,取上清液,即为粗酶液。
    5.漆酶酶活测定
    反应体系:0.2mol/L pH 4.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液2mL,0.5mmol/L ABTS1mL,粗酶液0.5mL,对照为已沸水浴灭活的粗酶液,用紫外-可见双光束分光光度计测量420nm处的光密度值(OD),并每1min记录OD420。实验均设三组重复,取平均值。
    酶活计算公式如下:
    U/L=A×V×106/(e×L×t×v),
    其中,A—吸光值;V—反应体系总体积,mL;e—摩尔吸光系数,漆酶为3.6×104(mol/L)-1cm-1;L—比色皿直径,cm;t—反应时间,min;v—样品体积,mL。
    酶活测量结果见表1。
    实施例2
    1、制备平菇培养基质
    1)木屑预处理
    将木屑粉碎至3-5cm;然后将木屑置于爆破器中,通入饱和水蒸气,在相对压力为2.0Mpa条件下,进行汽蒸处理5min;汽蒸处理结束后,迅速打开爆破器的放料阀,对木屑进行爆破处理;将爆破处理后的木屑置于温度为150℃的烘箱中进行干燥处理,干燥处理的时间为60min。
    2)按照如下重量配比备料

    将上述原料混合均匀,得到用于栽培平菇的干料,备用;
    3)将硝酸铜和水混合,制得铜离子浓度为2.5mg/L的硝酸铜溶液;
    4)在搅拌条件下,向干料中加入硝酸铜溶液,搅拌均匀,得到平菇培养基质;
    其中,所述干料的重量与硝酸铜溶液的体积之比为1:1.3,即向1g的干料中加入1.3mL硝酸铜溶液或向1kg的干料中加入1.3L的硝酸铜溶液。
    5)将平菇培养基质分装在锥形瓶中,每个锥形瓶中装入2g平菇培养基质,然后置于高压蒸汽灭菌锅中,在温度为115℃,压力为0.1Mpa条件下灭菌35min后,取出,在消毒的洁净环境下自然冷却至25℃以下,即得。
    2、制备平菇种子液
    将平菇供试菌株在固体培养基上活化,待菌丝长满平板,用打孔器取长势一致、直径6mm的菌饼5块接种至装有液体种子培养基的三角瓶中进行摇瓶培养,液体种子培养基的装液量是三角瓶体积的2/5,即在250mL三角瓶中装入100mL液体种子培养基,在温度为26±2℃,转速150r/min条件下培养7d,得到一级种子液;
    将一级种子液进行匀浆处理后,按照10%(V/V)接种量接至装有液体种子培养基的三角瓶中进行摇瓶培养,液体种子培养基的装液量是三角瓶体积的2/5,即在250mL三角瓶中装入100mL液体种子培养基,在在温度为26±2℃,转速150r/min条件下培养5d得到二级种子液;
    将二级种子液于4℃下保存,备用。
    3、接种与培养
    在无菌操作条件下,将2mL二级种子液接种至装有步骤1制备的平菇培养基质的锥形瓶中,在温度26℃的黑暗密闭条件下进行发菌培养4天。
    4、提取漆酶粗酶液
    向接种培养后的锥形瓶中加入60mL 0.1mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.6),将锥形瓶置于摇床中,在温度为26℃,转速为150r/min条件下,提取4h,取出后在转速为12000r/min条件下离心10min,取上清液,即为粗酶液。
    5.漆酶酶活测定
    反应体系:0.2mol/L pH 4.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液2mL,0.5mmol/L ABTS1mL,粗酶液0.5mL,对照为已沸水浴灭活的粗酶液,用紫外-可见双光束分光光度计测量420nm处的光密度值(OD),并每1min记录OD420。实验均设三组重复,取平均值。
    酶活计算公式如下:
    U/L=A×V×106/(e×L×t×v),
    其中,A—吸光值;V—反应体系总体积,mL;e—摩尔吸光系数,漆酶为3.6×104(mol/L)-1cm-1;L—比色皿直径,cm;t—反应时间,min;v—样品体积,mL。
    酶活测量结果见表1。
    实施例3
    1、制备平菇培养基质
    1)木屑预处理
    将木屑粉碎至3-5cm;然后将木屑置于爆破器中,通入饱和水蒸气,在相对压力为 1.8Mpa条件下,进行汽蒸处理8min;汽蒸处理结束后,迅速打开爆破器的放料阀,对木屑进行爆破处理;将爆破处理后的木屑置于温度为200℃的烘箱中进行干燥处理,干燥处理的时间为45min。
    2)按照如下重量配比备料

    将上述原料混合均匀,得到用于栽培平菇的干料,备用;
    3)将醋酸铜和水混合,制得铜离子浓度为3mg/L的醋酸铜溶液;
    4)在搅拌条件下,向干料中加入醋酸铜溶液,搅拌均匀,得到平菇培养基质;
    其中,所述干料的重量与醋酸铜溶液的体积之比为1:1.4,即向1g的干料中加入1.4mL醋酸铜溶液或向1kg的干料中加入1.4L的醋酸铜溶液。
    5)将平菇培养基质分装在锥形瓶中,每个锥形瓶中装入2g平菇培养基质,然后置于高压蒸汽灭菌锅中,在温度为125℃,压力为0.13MPa,高温灭菌25min后,取出,在消毒的洁净环境下自然冷却至25℃以下,即得。
    2、制备平菇种子液
    将平菇供试菌株在固体培养基上活化,待菌丝长满平板,用打孔器取长势一致、直径6mm的菌饼5块接种至装有液体种子培养基的三角瓶中进行摇瓶培养,液体种子培养基的装液量是三角瓶体积的2/5,即在250mL三角瓶中装入100mL液体种子培养基,在温度为26±2℃,转速150r/min条件下培养7d,得到一级种子液;
    将一级种子液进行匀浆处理后,按照10%(V/V)接种量接至装有液体种子培养基的三角瓶中进行摇瓶培养,液体种子培养基的装液量是三角瓶体积的2/5,即在250mL三角瓶中装入100mL液体种子培养基,在在温度为26±2℃,转速150r/min条件下培养5d得到二级种子液;
    将二级种子液于4℃下保存,备用。
    3、接种与培养
    在无菌操作条件下,将2mL二级种子液接种至装有步骤1制备的平菇培养基质的锥形瓶中,在黑暗密闭、温度为26℃条件下进行发菌培养7天。
    4、提取漆酶粗酶液
    向接种培养后的锥形瓶中加入60mL 0.1mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.6),将锥形瓶置于摇床中,在温度为26℃,转速为150r/min条件下,提取4h,取出后在转速为12000r/min条件下离心10min,取上清液,即为粗酶液。
    5.漆酶酶活测定
    反应体系:0.2mol/L pH 4.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液2mL,0.5mmol/L ABTS1mL,粗酶液0.5mL,对照为已沸水浴灭活的粗酶液,用紫外-可见双光束分光光度计测量420nm处的光密度值(OD),并每1min记录OD420。实验均设三组重复,取平均值。
    酶活计算公式如下:
    U/L=A×V×106/(e×L×t×v),
    其中,A—吸光值;V—反应体系总体积,mL;e—摩尔吸光系数,漆酶为3.6×104(mol/L)-1cm-1;L—比色皿直径,cm;t—反应时间,min;v—样品体积,mL。
    酶活测量结果见表1。
    实施例4
    1、制备平菇培养基质
    1)木屑预处理
    将木屑粉碎至3-5cm;然后将木屑置于爆破器中,通入饱和水蒸气,在相对压力为1.6Mpa条件下,进行汽蒸处理6min;汽蒸处理结束后,迅速打开爆破器的放料阀,对木屑进行爆破处理;将爆破处理后的木屑置于温度为170℃的烘箱中进行干燥处理,干燥处理的时间为80min。
    2)按照如下重量配比备料


    将上述原料混合均匀,得到用于栽培平菇的干料,备用;
    3)将氯化铜和水混合,制得铜离子浓度为5.5mg/L的氯化铜溶液;
    4)在搅拌条件下,向干料中加入氯化铜溶液,搅拌均匀,得到平菇培养基质;
    其中,所述干料的重量与氯化铜溶液的体积之比为1:1.5,即向1g的干料中加入1.5mL氯化铜溶液或向1kg的干料中加入1.5L的氯化铜溶液。
    5)将平菇培养基质分装在锥形瓶中,每个锥形瓶中装入2g平菇培养基质,置于高压蒸汽灭菌锅中,在温度为121℃,压力为0.12MPa,高温灭菌30min后,取出,在消毒的洁净环境下自然冷却至25℃以下,即得。
    2、制备平菇种子液
    将平菇供试菌株在固体培养基上活化,待菌丝长满平板,用打孔器取长势一致、直径6mm的菌饼5块接种至装有液体种子培养基的三角瓶中进行摇瓶培养,液体种子培养基的装液量是三角瓶体积的2/5,即在250mL三角瓶中装入100mL液体种子培养基,在温度为26±2℃,转速150r/min条件下培养7d,得到一级种子液;
    将一级种子液进行匀浆处理后,按照10%(V/V)接种量接至装有液体种子培养基的三角瓶中进行摇瓶培养,液体种子培养基的装液量是三角瓶体积的2/5,即在250mL三角瓶中装入100mL液体种子培养基,在在温度为26±2℃,转速150r/min条件下培养5d得到二级种子液;
    将二级种子液于4℃下保存,备用。
    3、接种与培养
    在无菌操作条件下,将2mL二级种子液接种至装有步骤1制备的平菇培养基质的锥形瓶中,在黑暗密闭、温度为26℃条件下进行发菌培养6天。
    4、提取漆酶粗酶液
    向接种培养后的锥形瓶中加入60mL 0.1mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.6),将锥形瓶置于摇床中,在温度为26℃,转速为150r/min条件下,提取4h,取出后在转速为12000r/min条件下离心10min,取上清液,即为粗酶液。
    5.漆酶酶活测定
    反应体系:0.2mol/L pH 4.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液2mL,0.5mmol/L ABTS1mL,粗酶液0.5mL,对照为已沸水浴灭活的粗酶液,用紫外-可见双光束分光光度计测量420nm处的光密度值(OD),并每1min记录OD420。实验均设三组重复,取平均值。
    酶活计算公式如下:
    U/L=A×V×106/(e×L×t×v),
    其中,A—吸光值;V—反应体系总体积,mL;e—摩尔吸光系数,漆酶为3.6×104(mol/L)-1cm-1;L—比色皿直径,cm;t—反应时间,min;v—样品体积,mL。
    酶活测量结果见表1。
    对照例1
    除了制备平菇培养基质的步骤中以等体积的水代替铜盐溶液之外,其余与实施例1相同。酶活测量结果见表1。
    对照例2
    除了步骤1制备平菇培养基质的步骤中按照如下重量配比备料:

    之外,其余与实施例1相同,
    酶活测量结果见表1。
    对照例3
    除了步骤1制备平菇培养基质中按照如下重量配比备料:

    之外,其余与实施例1相同,
    酶活测量结果见表1。
    对照例4
    除了步骤1制备平菇培养基质中按照如下重量配比备料:

    之外,其余与实施例1相同,
    酶活测量结果见表1。
    对照例5
    除了平菇培养基质按照传统平菇培养基质A的配方进行制备之外,其余与实施例1相同,其中,常规平菇培养基质A的配方如下:
    木屑1.78份、麸皮0.2份、石灰0.02份,料水比1:1.3。
    其中,木屑为没有经过蒸汽爆破处理的普通木屑。
    酶活测量结果见表1。
    对照例6
    除了平菇培养基质按照传统平菇培养基质B的配方进行制备之外,其余与实施例1相同,其中,常规平菇培养基质B的配方如下:
    玉米芯1份、豆秸0.94份、麸皮0.04份、石灰0.02份,料水比1:1.3。
    酶活测量结果见表1。
    表1.实施例1-4及对照例1-6的平菇漆酶活力测定结果
     漆酶酶活U/L实施例1651.94实施例2638.23实施例3645.36实施例4640.17
    对照例1209.15对照例2284.91对照例3110.21对照例4109.08对照例571.65对照例662.43
    从表1可以看出,本发明的平菇培养基质可以显著提高平菇产漆酶的能力,漆酶活力≥638.23U/L,远远高于采用单主料作为平菇培养基质或者不添加铜盐的平菇培养基质及传统平菇培养基质。
    试验例1
    采用本发明实施例1和对照例1-6制备的平菇培养基质在相同的平菇菌种、培养条件下进行栽培,共采收6茬平菇,统计采用七种不同平菇培养基质的平菇生物转化率,结果见表2。
    生物转化率,指每袋产鲜菇总重量与袋装平菇培养基质重量的比值再乘以100%,它是本领域衡量菌类产率的一个常用参数。
    表2.每茬菇体产量及生物转化率统计结果

    由表2结果可知,采用本发明的平菇培养基质培育的平菇,其生物转化率明显高于采用对照例1-6的平菇培养基质栽培的平菇。
    对采用实施例1的平菇培养基质培育的平菇取样,测定其铜的含量,新鲜平菇中铜含量≤10.000mg/kg,干平菇中铜含量≤10.000mg/kg,均在《GB7096-2003食用菌卫生 标准》规定的安全范围。

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