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    重庆时时彩杀码手机软件: 高血糖风险判定用标记肽及其用途.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201380066714.6

    申请日:

    2013.12.10

    公开号:

    CN104884466A

    公开日:

    2015.09.02

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C07K 14/47申请日:20131210|||公开
    IPC分类号: C07K14/47; C07K16/18; C12M1/00; C12N15/09; C12N15/115; G01N33/53; G01N37/00 主分类号: C07K14/47
    申请人: 狮王株式会社
    发明人: 内山千代子; 栗田启
    地址: 日本国东京都墨田区本所1丁目3番7号
    优先权: 2012-278388 2012.12.20 JP
    专利代理机构: 上海市华诚律师事务所31210 代理人: 汤国华
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201380066714.6

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.07.13|||2015.09.30|||2015.09.02

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明的目的是提供能高精度判定生物体内的高血糖风险的标记物。本发明提供以下发明:高血糖风险判定用标记肽;结合于上述高血糖风险判定用标记肽的抗体或适体;将结合于上述高血糖风险判定用标记肽的抗体或适体固定于载体而成的微阵列;测定从受试者采集到的生物样品中上述高血糖风险判定用标记肽的量或其有无的高血糖风险的判定方法;以及包含上述抗体或适体,或者上述微阵列的高血糖风险判定用试剂盒。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种高血糖风险判定用标记肽,其选自下述(A)~(O)组成的群,
    (A)包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (B)包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (C)包含与序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上的同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (D)包含序列号1的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (E)包含与序列号1的氨基酸序列有90%以上的同源性的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (F)包含序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (G)包含序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中,缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H)包含与序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上的同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (I)包含序列号2的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (J)包含与序列号2的氨基酸序列有90%以上的同源性的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (K)包含序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (L)包含序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M)包含与序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上的同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (N)包含序列号3的氨基酸序列中,缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;以及
    (O)包含与序列号3的氨基酸序列有90%以上的同源性的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。

    2.  一种抗体或适体,其结合于权利要求1所述的高血糖风险判定用标记肽。

    3.  一种微阵列,其是将结合于权利要求1所述的高血糖风险判定用标记肽的抗体或适体固定于载体而成的。

    4.  一种高血糖风险的判定方法,其测定从受试者采集到的生物样品中的权利要求1所述的高血糖风险判定用标记肽的量或其有无。

    5.  如权利要求4所述的判定方法,当从受试者采集到的生物样品中的权利要求1所述的高血糖风险判定用标记肽的量,低于从健康者采集到的生物样品中的该量时,判定高血糖风险高。

    6.  如权利要求4所述的判定方法,当从受试者采集到的生物样品中的权利要求1所述的高血糖风险判定用标记肽的量,等同于或低于从高血糖患者采集到的生物样品中的该量时,判定高血糖风险高。

    7.  如权利要求4~6的任一项所述的判定方法,通过从质谱分析法、使用权利要求2所述的抗体或适体的免疫测定法和使用权利要求3所述的微阵列的免疫测定法中选出的方法进行权利要求1所述的高血糖风险判定用标记肽的量的测定。

    8.  如权利要求4~7的任一项所述的判定方法,其中,生物样品为唾液。

    9.  一种高血糖风险判定用试剂盒,其包含权利要求2的抗体或适体,或者权利要求3的微阵列。

    10.  如权利要求9所述的试剂盒,其进一步包含口香糖。

    说明书

    说明书高血糖风险判定用标记肽及其用途
    技术领域
    本发明涉及高血糖风险判定用标记肽及其用途。
    背景技术
    2011年日本的糖尿病患病者超过1000万人,人数较多排世界第6名。糖尿病是在严重阶段引起视网膜病变、坏疽等并发症,由于该并发症存在丧命的危险性的严重的症状。日本人的体质是难以消耗所吃食物易于储藏的体质,因此被认为易患糖尿病,推荐通过对食物的摄取方法的研究和/或运动的坚持,从而预防糖尿病的患病、严重化。
    作为糖尿病的预备军,可列举高血糖状态。根据高血糖状态的阶段掌握定期的血糖状态、维持使血糖值不上升的生活习惯或改善使血糖值上升的生活习惯是必要的。若能通过非侵袭性且可随时采集的样品进行定期的血糖状态的掌握,则能在家中进行自我药疗。
    半胱氨酸蛋白酶抑制剂是具有抗氧化作用的一系列的肽群。专利文献1中记载了可以使用半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C作为糖尿病检测时的生物标记。专利文献2中记载了可以使用半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C作为糖尿病的检查参数。专利文献3中记载了含有抗半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN抗体的大肠癌和/或大肠息肉的诊断药。半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C多存在于精液、骨髓液中,仅少量存在于唾液中。另一方面,半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN主要存在于唾液、泪液中。
    碱性唾液脯氨酸丰富蛋白(Basic salivary prolin-rich protein)1和碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2是包含脯氨酸中富含的非周期性的氨基酸序列部分的富含脯氨酸蛋白质(富含脯氨酸肽)中的一种。非专利文献1中记载了,相比于对照组,糖尿病模型大鼠的唾液腺内富含脯氨酸肽的表达下降,以及通过胰岛素给药糖尿病模型大鼠的富含脯氨酸肽表达下降的情况得到改善。
    现有技术文献
    专利文献
    专利文献1:日本专利特表2011-515680号公报
    专利文献2:日本专利特表2012-507020号公报
    专利文献3:国际公开第06/064844号
    非专利文献
    非专利文献1:《国际实验病理学杂志》(Int J Exp Path),90,412-422
    发明内容
    发明要解决的课题
    然而,不论采集部位,从唾液中也能正确检出的高血糖风险标记肽,以及使用它的高血糖风险的检测方法,现在都是未知的。此外,半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN、碱性唾液脯氨酸丰富蛋白1以及碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2与高血糖有关,在此之前也未知。半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN相对于半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的同源性分数只有54.6099,因此,可以说半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN和半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C是结构上大不相同的蛋白质。
    本发明的目的是提供能高精度判定生物体内的高血糖风险的标记物。
    解决课题的手段
    本发明提供以下的〔1〕~〔10〕。
    〔1〕一种高血糖风险判定用标记肽,选自下述(A)~(O)形成的群。
    (A)包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (B)包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (C)包含与序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (D)包含序列号1的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (E)包含与序列号1的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (F)包含序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (G)包含序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H)包含与序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (I)包含序列号2的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (J)包含与序列号2的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (K)包含序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (L)包含序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M)包含与序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (N)包含序列号3的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;以及
    (O)包含与序列号3的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    〔2〕一种抗体或适体,其结合于上述〔1〕所述的高血糖风险判定用标记肽。
    〔3〕一种微阵列,其是将结合于上述〔1〕所述的高血糖风险判定用标记肽结合的抗体或适体固定于载体而成的。
    〔4〕一种高血糖风险的判定方法,其测定从受试者采集到的生物样品中的上述〔1〕所述的高血糖风险判定用标记肽的量或其有无。
    〔5〕上述〔4〕所述的判定方法,当从受试者采集到的生物样品中的上述〔1〕所述的高血糖风险判定用标记肽的量,低于从健康者采集到的生物样品中的该量时,判定高血糖风险高。
    〔6〕上述〔4〕所述的判定方法,当从受试者采集到的生物样品中的上述〔1〕所述的高血糖风险判定用标记肽的量,等同于或低于从高血糖人群采集到的生物样品中的该量时,判定高血糖风险高。
    〔7〕如上述〔4〕~〔6〕的任一项所述的判定方法,通过从质谱分析法、使用〔2〕所述的抗体或适体的免疫测定法和使用〔3〕所述的微阵列的免疫测定法中选出的方法进行上述〔1〕所述的高血糖风险判定用标记肽的量的测定。
    〔8〕如上述〔4〕~〔7〕的任一项所述的判定方法,其中,生物样品为唾液。
    〔9〕高血糖风险判定用试剂盒,其包含上述〔2〕的抗体或适体,或者上述〔3〕的微阵列。
    〔10〕上述〔9〕所述的试剂盒,其进一步包含口香糖。
    发明的效果
    根据本发明,能够高精度判定高血糖风险。若利用本发明在医生的诊断之前进行高血糖风险的判定,则可以及早寻求高血糖的预防策略,能对高血糖症、糖尿病等疾病防范于未然,对于维持健康是有用的。
    附图说明
    [图1]图1是表示各受试者组的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN肽片段的峰强度的图。
    [图2]图2是表示各受试者组的碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2肽片段的峰强度的图。
    [图3]图3是表示各受试者组的碱性唾液脯氨酸丰富蛋白1肽片段的峰强度的图。
    具体实施方式
    本发明中高血糖风险的判定,是指对受试者是否为高血糖、是否已经恢复正常水平、或者今后有无变为高血糖的可能性进行判定(评价、判别、鉴别、推测),或者进行受试者是否具有变为高血糖风险的可能性的区别(分类)。高血糖风险的判定,是指受试者是否高血糖、是否已经恢复正常水平、以及是否有今后变为高血糖的可能性的判定。高血糖风险的判定精度,是受试者中,通常,是统计学上显著的比例的受试者中,能够正确判定高血糖风险的程度,例如,能够正确判定50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、85%以上、90%以上的受试者中高血糖风险的程度。本发明的判定方法,作为医生的诊断前的预备判定方法是有用的。
    本发明中,高血糖是指空腹时血糖在110mg/dL以上和/或血红蛋白A1c在5.8%以上的状态。
    本发明中的受试者,通常为动物,优选人、试验用动物(小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔子等),更优选人。
    (1)本发明的标记肽
    本发明的高血糖风险判定用标记肽,是选自上述(A)~(O)组成的群中的1种以上。本发明的肽,作为高血糖风险判定用标记是有用的。
    使用本发明的高血糖风险判定用标记肽判定高血糖风险时,可以使用选自(A)~(O)的1种,但2种以上组合时能更高精度地判定。2种以上的组合,优选从选自(A)~(E)的1种以上、选自(F)~(J)的1种以上、和选自(K)~(O)的1种以上中选出的2种以上的组合。
    (1-1)关于(A)~(C)
    (A)~(C)中,序列号1的氨基酸序列,是编码人半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN肽的氨基酸序列(全长141氨基酸),在数据库中登记为入藏登记号(アクセッション番号)P01037.3。半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN的相对于半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族中所含的其它的类型的同源性分数如下所示都较低:半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C(54.6099%)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-M(27.6596%)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-E(27.6596%)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-F(26.2411%)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-A(17.3469%)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-B(14.2857%)(括号内是同源性分数)。另外,上述同源性分数是在CLUSTALW软件的多序列比对分析(Multiple Sequence Alignment by CLUSTALW)(http://www.genome.jp/tools/clustalw/)中输入氨基酸序列算出的值。
    (A)~(C)中,序列号1的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,优选序列号1的氨基酸序列中的连续7个以上的氨基酸残基,更优选连续10个以上的氨基酸残基,进一步优选连续12个以上的氨基酸残基,更进一步优选连续14个以上的氨基酸残基,特别优选连续15个以上的氨基酸残基。没有特别的上限规定,也可以是序列号1的氨基酸序列的全长(141个残基)或超过该全长,例如200个以下、100个以下、90个以下、80个以下、70个以下、60个以下、50个以下、40个以下、30个以下、20个以下。
    (A)~(C)中,序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中,优选上述5个以上的氨基酸残基中含有氨基酸残基号25位~39位的至少一部分,更优选上述5个以上的氨基酸残基为序列号1的氨基酸残基号25位~39位中连续5个以上的氨基酸残基。优选上述5个以上的氨基酸残基为序列号1的氨基酸残基号25位~39位的氨基酸序列,或序列号1的氨基酸序列。
    (A)只要是包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽即可,优选序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽。
    (B)只要是包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高 血糖风险判定用标记的多肽即可。(B)优选由序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入1个或多个氨基酸而得的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (C)只要是包含与序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽即可。(C)优选由与序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (B)中,1个或者多个的氨基酸残基的突变,可以存在于氨基酸序列中的1个区域中,也可以存在于多个不同的区域中。术语“1个或多个”表示不较大地损害标记肽的功能或特性的范围?!?个或多个”是指例如“1个~14个”、“1个~10个”、“1个~7个”、“1个~5个”、“1个~3个”、“1个或2个”或“1个”。
    氨基酸序列中允许突变(例如,缺失、附加、置换或插入)的氨基酸残基的位置对于本领域技术人员是显而易见的。具体地,本领域技术人员,1)与具有同种活性的多个蛋白质的氨基酸序列(例如序列号1所示的氨基酸序列以及其他的高血糖风险判定用标记肽的氨基酸序列)比较,2)明确相对保守区域(保存されている領域)和相对非保守区域(保存されていない領域),接着3)由相对保守区域和相对非保守区域可以分别预测对功能能够发挥重要作用的区域和对功能不能发挥重要作用的区域,因此可以确认结构和功能的相关性。因此,本领域技术人员可以推断高血糖风险判定用标记的氨基酸序列中能允许突变的氨基酸残基的位置。
    氨基酸残基的置换可以是保守性置换。在本说明书中使用的情况下,术语“保守性置换”是指用具有类似侧链的氨基酸残基置换规定的氨基酸残基。具有类似的侧链的氨基酸残基的家族是本领域众所周知的,例如可列举具有碱性侧链的氨基酸(例如,赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如,天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如,天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如,甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨 酸、蛋氨酸、色氨酸)、具有β位支链的氨基酸(例如,苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、具有芳香族侧链的氨基酸(例如,酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)、具有含羟基(例如,醇性、酚性)侧链的氨基酸(例如,丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)、以及具有含硫侧链的氨基酸(例如半胱氨酸、蛋氨酸)。优选氨基酸的保守性置换可以是天冬氨酸和谷氨酸间的置换、精氨酸和赖氨酸和组氨酸间的置换、色氨酸和苯丙氨酸间的置换、苯丙氨酸和缬氨酸间的置换、亮氨酸和异亮氨酸和丙氨酸间的置换、以及甘氨酸和丙氨酸间的置换。
    在本发明中使用的情况下,术语“同源性”可举例相同性、类似性。术语“90%以上”是指例如“91%以上”、“92%以上”、“93%以上”、“94%以上”,优选“95%以上”,特别优选“98%以上”,更优选“99%以上”。
    氨基酸序列的同源性(例如,相同性、类似性)可以通过在软件CLUSTALW的多序列比对分析(Multiple Sequence Alignment by CLUSTALW)(http://www.genome.jp/tools/clustalw/)中输入氨基酸序列算出。此外,可以使用根据Karlin以及Altschul的BLAST(《美国科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA),90,5873(1993)),根据Pearson的FASTA(《酶学方法》(Methods Enzymol.),183,63(1990))等的算法决定?;贐LAST,开发出了BLASTP、BLASTN等的程序(参见http://www.ncbi.nlm.nih.gov),因此可以在默认设定下使用这些程序,计算氨基酸序列的同源性。
    作为(A),例如可列举(A-1)~(A-9):
    (A-1)序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽;
    (A-2)包含序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且上述5个以上的氨基酸残基包含序列号1的氨基酸残基号25位~39位的至少一部分的多肽;
    (A-3)由序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成,且上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号1的氨基酸残基号25位~39位的至少一部分的多肽;
    (A-4)包含选自序列号1的氨基酸序列中的氨基酸残基号25位~39位的连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (A-5)由选自序列号1的氨基酸序列中的氨基酸残基号25位~39位的连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽;
    (A-6)包含序列号1的氨基酸序列中的氨基酸残基号25位~39位的多肽;
    (A-7)由序列号1的氨基酸序列中的氨基酸残基号25位~39位构成的多肽;
    (A-8)包含序列号1的氨基酸序列的多肽;以及
    (A-9)由序列号1的氨基酸序列构成的多肽。
    作为(B),例如可列举(B-1)~(B-9):
    (B-1)由序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (B-2)是序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且包含上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号1的氨基酸残基25位~39位的至少一部分的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (B-3)是序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且由上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号1的氨基酸残基25位~39位的至少一部分的氨基酸序列中包含缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (B-4)包含选自序列号1的氨基酸序列中氨基酸残基号25位~39位的连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、取代或插入了1个或多个的氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (B-5)由选自序列号1的氨基酸序列中的氨基酸残基号25位~39位的连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个的氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用的多肽;
    (B-6)包含序列号1的氨基酸序列的氨基酸残基号25位~39位的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (B-7)由序列号1的氨基酸序列的氨基酸残基号25位~39位的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (B-8)包含序列号1的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;以及
    (B-9)由序列号1的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    作为(C),例如可列举(C-1)~(C-9):
    (C-1)由与序列号1的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (C-2)是序列号1的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,且包含与上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号1的氨基酸残基号25位~39位的至少一部分的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (C-3)是序列号1的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,且由与上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号1的氨基酸残基号25位~39位的至少一部分的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (C-4)包含与选自序列号1的氨基酸序列中的氨基酸残基号25位~39位的连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (C-5)由与选自序列号1的氨基酸序列中的氨基酸残基号25位~39位的连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (C-6)包含与序列号1的氨基酸序列的氨基酸残基号25位~39位的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (C-7)由与序列号1的氨基酸序列的氨基酸残基号25位~39位的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (C-8)包含与序列号1的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;以及
    (C-9)由与序列号1的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (1-2)关于(D)~(E)
    (D)~(E)中,关于序列号1的氨基酸序列,如上述项目(1-1)的说明所述。
    (D)~(E)中,序列号1的氨基酸序列中具有各自突变的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,优选连续7个以上的氨基酸残基,更优选连续10个以上的氨基酸残基,进一步优选连续12个以上的氨基酸残基,更进一步优选连续14个以上的氨基酸残基,特别优选连续15个以上的氨基酸残基。没有特别的上限规定,可以是序列号1的氨基酸序列中具有各自突变的氨基酸序列的全长(141个残基)或超过该全长,例如为200个以下、100个以下、90个以下、80个以下、70个以下、60个以下、50个以下、40个以下、30个以下、20个以下。
    (D)中,只要是包含序列号1的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽即可。(D)中,优选由序列号1的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (E)只要包含与序列号1的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽 即可。(E)优选由与序列号1的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (D)中的1个或多个的氨基酸残基的突变,与上述项目(1-1)中的(B)涉及的说明相同。
    (E)中的同源性,与上述项目(1-1)中(C)涉及的说明相同。
    作为(A)~(E)形成的群中所含的肽,优选由(A-2)~(A-7)、(B-2)~(B-7)和(C-2)~(C-7)形成的群中所含的肽,更优选(A-6)和(A-7)的肽,进一步优选(A-7)的肽。
    (1-3)关于(F)~(H)
    (F)~(H)中,序列号2的氨基酸序列,是编码碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2的氨基酸序列(全长416个氨基酸),在数据库中登记为入藏登记号P02812.3。
    (F)~(H)中,序列号2的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基,优选序列号2的氨基酸序列中的连续10个以上的氨基酸残基,优选连续15个以上的氨基酸残基,更优选连续20个以上的氨基酸残基,进一步优选连续22个以上的氨基酸残基,更进一步优选连续23个以上的氨基酸残基,尤其优选连续24个以上的氨基酸残基,特别优选连续25个以上的氨基酸残基。没有特别的上限规定,可以是序列号2的氨基酸序列的全长(416个残基)或超过其全长,例如为500个以下、400个以下、300个以下、200个以下、100个以下、90个以下、80个以下、70个以下、60个以下、50个以下、40个以下、30个以下。
    (F)~(H)中,序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中,优选上述5个以上的氨基酸残基中含有序列号2的氨基酸残基号17位~112位的至少一部分,更优选含有序列号2的氨基酸残基号59位~83位的至少一部分。进一步优选上述5个以上的氨基酸残基是序列号2的氨基酸残基号17位~112位中的连续5个以上的氨基酸残基,更进一步优选是氨基酸残基号59位~83位中的连续5个以上的氨基酸残基。序列号2的氨基酸残基号17位~112位是碱性脯氨酸丰富肽IB-1。上述5个以上的氨基酸残基,优选序列号2的氨基酸残基号59为~83位的氨基酸序列、序列号2的氨基酸残基号17~112位的氨 基酸序列、或序列号2的氨基酸序列,更优选序列号2的氨基酸残基号59位~83位的氨基酸序列或序列号2的氨基酸残基号17位~112位的氨基酸序列,进一步优选序列号2的氨基酸残基号59位~83位的氨基酸序列。
    (F)只要是包含序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽即可,优选由序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽。
    (G)只要包含序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽即可。(G)优选由序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (H)只要是包含与序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上的同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽即可。(H)优选由与序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上的同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (G)中,1个或者多个的氨基酸残基的突变,可以存在于氨基酸序列中的1个区域中,也可以存在于多个不同的区域中。术语“1个或多个”表示不较大地损害标记肽的功能或特性的范围?!?个或多个”是指例如“1个~41个”、“1个~35个”、“1个~30个”、“1个~25个”、“1个~20个”、“1个~15个”、“1个~10个”、“1个~7个”、“1个~5个”、“1个~3个”、“1个或2个”或“1个”。关于允许突变的氨基酸位置、置换的定义以及具体例子,与(A)中的说明相同。
    (H)中的同源性,与上述项目(1-1)中(C)涉及的说明相同。
    作为(F),例如可列举(F-1)~(F-15):
    (F-1)序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽;
    (F-2)包含序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号59位~83位的至少一部分的多肽;
    (F-3)由序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成,且上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号59位~83位的至少一部分的多肽;
    (F-4)包含选自序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号59位~83位的连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (F-5)由选自序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号59位~83位的连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽;
    (F-6)包含序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号59位~83位的多肽;
    (F-7)由序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号59位~83位构成的多肽;
    (F-8)包含序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸号17位~112位的至少一部分的多肽;
    (F-9)由序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成,且上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号17位~112位的至少一部分的多肽;
    (F-10)包含选自序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号17位~112位的连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (F-11)由选自序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号17位~112位的连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽;
    (F-12)包含序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号17位~112位的多肽;
    (F-13)由序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号17位~112位构成的多肽;
    (F-14)包含序列号2的氨基酸序列的多肽;以及
    (F-15)由序列号2的氨基酸序列构成的多肽。
    作为(G),例如可列举(G-1)~(G-15):
    (G-1)由序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-2)是序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且包含上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号59位~83位的至少一部分的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-3)是序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且由上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号59位~83位的至少一部分的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-4)包含选自序列号2的氨基酸序列中氨基酸残基号59位~83位的连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、取代或插入了1个或多个的氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-5)由选自序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号59位~83位的连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个的氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-6)包含序列号2的氨基酸序列的氨基酸残基号59位~83位的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-7)由序列号2的氨基酸序列的氨基酸残基号59位~83位的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-8)是序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且包含上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号17位~112位的至少一部分的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-9)是序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且由上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号17位~112位的至少一部分的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-10)包含选自序列号2的氨基酸序列中氨基酸残基号17位~112位的连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、取代或插入了1个或多个的氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-11)由选自序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号17位~112位的连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个的氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用的多肽;
    (G-12)包含序列号2的氨基酸序列的氨基酸残基号17位~112位的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-13)由序列号2的氨基酸序列的氨基酸残基号17位~112位的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (G-14)包含序列号2的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;以及
    (G-15)由序列号2的氨基酸序列中缺失、附加、取代或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    作为(H),例如可列举(H-1)~(H-15):
    (H-1)由与序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-2)是序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且包含与上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号59位~83位的至少一部分的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-3)是序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且由与上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号59位~83位的至少一部分的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-4)包含与选自序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号59位~83位的连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-5)由与选自序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号59位~83位的连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-6)包含与序列号2的氨基酸序列的氨基酸残基号59位~83位的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-7)由与序列号2的氨基酸序列的氨基酸残基号59位~83位的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-8)是序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且包含与上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号17位~112位的至少一部分的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-9)是序列号2的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且由与上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号2的氨基酸残基号17位~112位的至少一部分的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-10)包含与选自序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号17位~112位的连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-11)由与选自序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号17位~112位的连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-12)包含与序列号2的氨基酸序列的氨基酸残基号17位~112位的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-13)由与序列号2的氨基酸序列的氨基酸残基号17位~112位的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (H-14)包含与序列号2的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;以及
    (H-15)由与序列号2的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (1-4)关于(I)~(J)
    (I)~(J)中,关于序列号2的氨基酸序列,如上述项目(1-3)的说明所述。
    (I)~(J)中,序列号2的氨基酸序列中的具有各自的突变的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,优选序列号2的氨基酸序列中的连续10个以上的氨基酸残基,优选连续15个以上的氨基酸残基,更优选连续20个以上的氨基酸残基,进一步优选连续22个以上的氨基酸残基,更进一步优选连续23个以上的氨基酸残基,尤其优选连续24个以上的氨基酸残基,特别优选连续25个以上的氨基酸残基。没有特别的上限规定,可以是序列号2的氨基酸序列的全长(416个残基)或超过其全长,例如为500个以下、400个以下、300个以下、200个以下、100个以下、90个以下、80个以下、70个以下、60个以下、50个以下、40个以下、30个以下。
    (I)中,只要是包含序列号2的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个的氨基酸的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽即可。(I)中,优选由序列号2的氨基酸序列 中缺失、附加、置换或插入了1个或多个的氨基酸的氨基酸序列中的连续5个以上的氨基酸残基构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (J)只要是包含与序列号2的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽即可。(J)优选由与序列号2的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (I)中的1个或多个氨基酸残基的突变,与上述项目(1-3)中(G)涉及的说明相同。
    (J)中的同源性,与上述项目(1-1)中(C)涉及的说明相同。
    作为由(F)~(J)组成的群中选出的肽,优选由(F-2)~(F-13)、(G-2)~(G-13)和(H-2)~(H-13)组成的群中所含的肽,更优选由(F-6)、(F-7)、(G-6)、(G-7)、(H-6)和(H-7)组成的群中所含的肽,进一步优选从(F-7)、(G-7)和(H-7)组成的群中选出的肽,更进一步优选(F-7)。
    (1-5)关于(K)~(M)
    (K)~(M)中,序列号3的氨基酸序列是编码碱性唾液脯氨酸丰富蛋白1的氨基酸序列(全长392个氨基酸),在数据库中登记为入藏登记号P04280.2。
    (K)~(M)中,序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,优选序列号3的氨基酸序列中连续6个以上的氨基酸残基,更优选序列号3的氨基酸序列中连续7个以上的氨基酸残基,没有特别的上限规定,可以使序列号3的氨基酸序列的全长(392个残基)或超过其全长,例如为500个以下、400个以下、300个以下、200个以下、100个以下、90个以下、80个以下、70个以下、60个以下、50个以下、40个以下、30个以下、20个以下、10个以下。
    (K)~(M)中,序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中,优选上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号275位~392位的至少一部分,更优选含序列号3的氨基酸残基号337位~343位的至少一部分。进一步优选上述5个以上的氨基酸残基为序列号3的氨基酸残基号 275位~392位中连续5个以上的氨基酸残基,更进一步优选为序列号3的氨基酸残基号337位~343位中连续5个以上的氨基酸残基。序列号3的氨基酸残基号275位~392位是碱性肽IB-6(Basic peptide IB-6)。优选上述5个以上的氨基酸残基是序列号3的氨基酸残基号337位~343位的氨基酸序列、序列号3的氨基酸残基号275位~392位的氨基酸序列或序列号3的氨基酸序列,更进一步优选为序列号3的氨基酸残基号337位~343位的氨基酸序列或序列号3的氨基酸残基号275位~392位的氨基酸序列,进一步优选序列号3的氨基酸残基号337位~343位的氨基酸序列。
    (K)只要是包含序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基的多肽即可,优选由序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽。
    (L)只要是包含序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽即可。(L)优选由序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (M)只要是包含与序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽即可。(M)优选由与序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (L)中,1个或多个氨基酸残基的突变可以存在于氨基酸序列中的1个区域内,也可以存在于多个不同的区域内。术语“1个或多个”表示不较大地损害标记肽的功能或特性的范围?!?个或多个”可举例“1个~39个”、“1个~35个”、“1个~30个”、“1个~25个”、“1个~20个”、“1个~15个”、“1个~10个”、“1个~7个”、“1个~5个”、“1个~3个”、“1个或2个”或“1个”。关于允许突变的氨基酸的位置、置换的定义以及具体例子,与(A)中的说明相同。
    (M)中的同源性与上述项目(1-1)中(C)涉及的说明相同。
    作为(K),可列举(K-1)~(K-15):
    (K-1)由序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽;
    (K-2)包含序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号337位~343位的至少一部分的多肽;
    (K-3)由序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成,且上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号337位~343位的至少一部分的多肽;
    (K-4)包含选自序列号3的氨基酸序列中氨基酸残基号337位~343位的连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (K-5)由选自序列号3的氨基酸序列中氨基酸残基号337位~343位的连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽;
    (K-6)包含序列号3的氨基酸序列中氨基酸残基号337位~343位的多肽;
    (K-7)由序列号3的氨基酸序列中氨基酸残基号337位~343位构成的多肽;
    (K-8)包含序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号275位~392位的至少一部分的多肽;
    (K-9)由序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成,且上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号275位~392位的至少一部分的多肽;
    (K-10)包含选自序列号3的氨基酸序列中的氨基酸残基号275位~392位的连续5个以上的氨基酸残基的多肽;
    (K-11)由选自序列号3的氨基酸序列中氨基酸残基号275位~392位的连续5个以上的氨基酸残基构成的多肽;
    (K-12)包含序列号3的氨基酸序列中氨基酸残基号275位~392位的多肽;
    (K-13)由序列号3的氨基酸序列中氨基酸残基号275位~392位构成的多肽;
    (K-14)包含序列号3的氨基酸序列的多肽;以及
    (K-15)由序列号3的氨基酸序列构成的多肽。
    作为(L),例如可列举(L-1)~(L-15):
    (L-1)由序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-2)是序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且包含上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号337位~343位的至少一部分的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-3)是序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且由上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号337位~343位的至少一部分的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-4)包含选自序列号3的氨基酸序列中的氨基酸残基号337位~343位的连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-5)由选自序列号3的氨基酸序列中的氨基酸残基号337位~343位的连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-6)包含序列号3的氨基酸序列的氨基酸残基号337位~343位的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-7)由序列号3的氨基酸序列的氨基酸残基号337位~343位的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-8)是序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且包含上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号275位~392位的至少一部分的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-9)是序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且由上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号275位~392位的至少一部分的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-10)包含选自序列号3的氨基酸序列中的氨基酸残基号275位~392位的连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-11)由选自序列号3的氨基酸序列中的氨基酸残基号275位~392位的连续5个以上的氨基酸残基中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-12)包含序列号3的氨基酸序列的氨基酸残基号275位~392位的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-13)由序列号3的氨基酸序列的氨基酸残基号275位~392位的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (L-14)包含序列号3的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;以及
    (L-15)由序列号3的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    作为(M),例如可列举(M-1)~(M-15):
    (M-1)由与序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列构成的,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-2)是序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且包含与上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号337位~343位的至少一部分的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-3)是序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且由与上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号337位~343位的至少一部分的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-4)与选自序列号3的氨基酸序列中的氨基酸残基号337位~343位的连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-5)由与选自序列号3的氨基酸序列中的氨基酸残基号337位~343位的连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-6)包含与序列号3的氨基酸序列的氨基酸残基号337位~343位的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-7)由与序列号3的氨基酸序列的氨基酸残基号337位~343位的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-8)是序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且包含与上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号275位~392位的至少一部分的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-9)是序列号3的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,且由与上述5个以上的氨基酸残基中包含序列号3的氨基酸残基号275位~392位的至少一部分的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-10)包含与选自序列号3的氨基酸序列中的氨基酸残基号275位~392位的连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-11)由与选自序列号3的氨基酸序列中的氨基酸残基号275位~392位的连续5个以上的氨基酸残基有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-12)包含与序列号3的氨基酸序列的氨基酸残基号275位~392位的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-13)由与序列号3的氨基酸序列的氨基酸残基号275位~392位的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;
    (M-14)包含与序列号3的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽;以及
    (M-15)由与序列号3的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (1-6)关于(N)~(O)
    (N)~(O)中,关于序列号3的氨基酸序列,如上述项目(1-5)的说明所述。
    (N)~(O)中,序列号3的氨基酸序列中具有各自突变的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,优选连续6个以上的氨基酸残基,更优选连续7个以上的氨基酸残基。没有特别的上限规定,可以是序列号3的氨基酸序列的全长(392个残基)或超过其全长,例如为500个以下、400个以下、300个以下、200个以下、100个以下、90个以下、80个以下、70个以下、60个以下、50个以下、40个以下、30个以下、20个以下、10个以下。
    (N)中,只要是包含序列号3的氨基酸序列中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽即可。(N)中,优选由序列号3的氨基酸序列 中缺失、附加、置换或插入了1个或多个氨基酸的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (O)只要是包含与序列号3的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽即可。(O)优选由与序列号3的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中连续5个以上的氨基酸残基构成,能够用作高血糖风险判定用标记的多肽。
    (N)中的1个或多个的氨基酸残基的突变,与上述项目(1-5)中的(L)涉及的说明相同。
    (O)中的同源性,与上述项目(1-1)中(C)涉及的说明相同。
    作为选自(K)~(O)形成的群的肽,优选选自(K-2)~(K-13)、(L-2)~(L-13)和(M-2)~(M-13)形成的群中所含的肽,更优选选自(K-6)、(K-7)、(L-6)、(L-7)、(M-6)和(M-7)形成的群中所含的肽,进一步优选选自(K-7)、(L-7)和(M-7)形成的群的肽,更进一步优选(K-7)的肽。
    (2)本发明的抗体或适体
    本发明的抗体或适体,是与上述本发明的高血糖风险判定用标记肽结合的抗体或适体。
    通过使用本发明的抗体或适体,可以测定上述本发明的高血糖风险判定用标记肽的量或其有无,能够进行高血糖风险的判定。即,使本发明的抗体或适体作用于从受试者采集到的生物样品时结合于抗体或适体的上述标记肽的量,高于使本发明的抗体或适体作用于从健康者采集到的生物样品时结合于抗体或适体的上述标记肽的量时,可判定高血糖风险高。
    抗体或适体可通过常规方法制作。
    使用本发明的抗体或适体测定标记肽的量或其有无时的例子如下所示。首先通过物理吸附、使用官能团的共价键合等公知的方法使抗体或适体吸附于微孔板等的载体后,根据需要稀释生物样品后添加进行培养。接着添加结合有荧光发光物质、化学发光物质或酶的2次抗体进行培养。检测是在添加各基质后,通过测量由荧光或化学发光物质或酶反应引起的可见光进行评价判定。
    本发明的高血糖风险判定用标记肽是以从具有高血糖风险的受试者采集到的生物样品中可检测到的水平存在的肽。因此,以本发明的标记肽的存在为指标,可以判定高血糖风险。
    (3)本发明的微阵列
    本发明的微阵列是将结合于上述本发明记载的高血糖风险判定用标记肽的抗体或适体固定而成的微阵列。
    微阵列是指在载体(基材)上将能够与要测定的物质结合的物质排列固定的装置的总称。作为微阵列的载体的材料,可以是玻璃等无机材料、硝酸纤维素等有机材料的任一种。作为微阵列的载体的形状,可以是膜、珠、板的任一种。
    本发明的微阵列,可以将上述项目(2)说明的抗体或适体固定于载体而制造。固定时,可以使用微阵列点样仪、测位仪(スポッター)等仪器。
    通过使用本发明的微阵列,可以测定上述本发明的高血糖风险判定用标记肽的量或其有无,从而能够判定高血糖风险。即,当使从受试者采集到的生物样品与本发明的微阵列作用时与微阵列上的抗体或适体结合的上述标记肽的量,高于使从健康者采集到的生物样品与本发明的微阵列作用时与微阵列上的抗体或适体结合的上述标记肽的量时,则判定高血糖风险高。
    使用本发明的微阵列的标记肽的量的测定例如下所示。首先,微阵列上,在被固定的抗体或适体中添加生物样品,使其结合生物样品中的标记肽,接着添加与荧光发光物质、化学发光物质或酶结合的2次抗体进行培养。检测是在添加各基质后,测量由荧光或化学发光物质或酶反应引起的可见光即可。
    (4)本发明的判定方法
    本发明的高血糖风险的判定方法,是测定从受试者采集到的生物样品中本发明的高血糖风险判定用标记肽的量或其有无的方法。
    在根据高血糖风险判定用标记肽的量判定高血糖风险时,通常进行与参考值的比较。作为参考值,例如,可列举从健康者(优选用本发明的判定方法以外的方法事先确定确实为健康者)采集到的生物样品中的该标记肽的量, 从高血糖患者(优选用本发明的判定方法以外的方法确定确实为高血糖患者)采集到的生物样品中的该标记肽的量,其中,优选前者。
    参考值为健康者的数值时,当从受试者采集到的生物样品中的高血糖风险判定用标记肽的量低于从健康者采集到的生物样品中的该标记肽的量时,判定高血糖风险高。
    参考值为高血糖患者的数值时,当从受试者采集到的生物样品中的高血糖风险判定用标记肽的量等同于或低于从高血糖患者采集到的生物样品中的该标记肽的量时,判定高血糖风险高。
    本发明的判定方法中,从受试者采集到的生物样品中,上述高血糖风险判定用标记肽的量低于从健康者采集到的生物样品中的该量时,判定高血糖风险高。另一方面,从受试者采集到的生物样品中的上述高血糖风险判定用标记肽的量等同于或高于从健康者采集到的生物样品中的该量时,判定高血糖风险低。
    作为生物样品,例如可列举唾液、血液(全血、血浆、血清等)、尿、泪等体液。其中优选非侵袭性且能随时采集的生物样品,更优选唾液。唾液,作为在家进行判定用的检测体也是适宜的。唾液有非刺激性唾液和刺激性唾液,优选刺激性唾液。刺激性唾液可通过咀嚼石蜡口香糖(パラフィンガム)容易地获取。通过使用唾液,容易定期地掌握血糖状况,能够降低高血糖症、糖尿病等疾病的患病率,维持健康,因此优选。
    本发明的判定方法中,高血糖风险判定用标记肽的量的测定,也可以通过例如使用上述抗体或适体的免疫测定法、使用上述微阵列的免疫测定法、质谱分析法、RIA(放射免疫分析法)、ELISA(酶联免疫吸附法)、ECLIA(电化学发光免疫测定法)等。关于使用抗体或适体的免疫测定法,如项目(2)中所说明的那样。关于使用微阵列的免疫测定法,如项目(3)中所说明的那样。
    通过质谱分析法测定时,可利用各种质谱分析装置。作为质谱分析装置,例如可列举GC-MS、LC-MS、FAB-MS、EI-MS、CI-MS、FD-MS、 MALDI-MS、ESI-MS、HPLC-MS、FT-ICR-MS、CE-MS、ICP-MS、Py-MS、TOF-MS等,可以使用这些的任一种。
    判定中,可以将2个以上的高血糖风险判定用标记肽的量作为变量进行多变量分析。作为多变量分析,例如可列举逻辑回归分析、多元回归分析、主成分分析、独立成分分析、因子分析、判别分析、数量化理论、聚类分析、联合分析和多维尺度构成法(MDS),其中优选逻辑回归分析。
    本发明的判定方法,适于评价关于受试者的高血糖性的体质。本发明的判定方法,由于可以评价受试者的高血糖患病风险的有无,因此也可用于预防医学。进一步地,对有高血糖风险的受试者进行高血糖的治疗或预防措施时,向高血糖或伴随高血糖的疾病(高血糖症、糖尿病等)的患病风险降低的方向发展,相应地标记肽的量也下降。因此,通过在进行治疗或预防措施的同时,测定标记肽的量或其有无,例如按照以下的方式,也可以进行治疗或预防措施的评价判定:
    高血糖的治疗或预防措施的判定方法:对高血糖的受试者或具有高血糖风险的受试者进行高血糖的治疗或预防措施之后,
    (1)从上述(A)~(O)组成的群中选出的高血糖风险判定用标记肽的量低于从健康者采集到的生物样品中的该量时,或者,
    (2)受试者中的上述高血糖风险判定用标记肽的量等同于或低于从高血糖患者采集到的生物样品中的该量时,判定上述治疗或预防措施是有效的。
    进一步地,另外,例如按照以下的方式,本发明的肽也可以成为用于判定药剂的投与效果等的治疗或预防效果的生物标记:
    对于高血糖的药剂的治疗或预防效果的判定方法:对高血糖的受试者或具有高血糖风险的受试者投与药剂之后,
    (1)从上述(A)~(O)组成的群中选出的高血糖风险判定用标记肽的量低于从健康者采集到的生物样品中的该量时,或者,
    (2)受试者中的上述高血糖风险判定用标记肽的量等同于或低于从高血糖患者采集到的生物样品中的该量时,判定上述药剂对于高血糖是有效的。
    同样地,本发明的判定方法,例如按照以下的方式,作为判定高血糖治疗用的药剂的给药效果等的治疗或预防效果的方法也是有用的:
    高血糖治疗用的药剂的治疗或预防效果的判定方法:对高血糖的受试者或具有高血糖风险的受试者投与高血糖治疗用的药剂之后,
    (1)从上述(A)~(O)组成的群中选出的高血糖风险判定用标记肽的量低于从健康者采集到的生物样品中的该量时,或者,
    (2)受试者中的上述高血糖风险判定用标记肽的量等同于或低于从高血糖患者采集到的生物样品中的该量时,判定上述药剂对于高血糖是有效的。
    本发明的肽,例如按照以下的方式,作为抑制高血糖的方法、高血糖的治疗方法或预防方法进行应用也是有用的:
    包含以下的工序的抑制受试者的高血糖的方法:
    测定受试者中的上述〔1〕记载的高血糖风险判定用标记肽的量;
    将用于抑制上述〔1〕中记载的高血糖风险判定用标记肽的表达的1种以上的化合物的有效量投给该对象,从而使受试者体内表达的该肽量变化,使高血糖的受试者的血糖值下降的方法;以及
    (1)受试者中的(A)~(O)组成的群中选出的高血糖风险判定用标记肽的量低于从健康者采集到的生物样品中的该量时,或者,(2)受试者中上述高血糖风险判定用标记肽的量等同于或低于从高血糖患者采集到的生物样品中的高血糖风险判定用标记肽的量时,将用于抑制该上述〔1〕中记载的高血糖风险判定用标记肽表达的1种以上的化合物的有效量投给该对象,从而使受试者体内的表达的该肽量变化。
    用于抑制高血糖风险判定用标记肽的表达的化合物,只要能抑制高血糖风险判定用标记肽的表达,其化学结构、分子量等的结构就没有特别限定。上述化合物可以是1种以上,也可以是2种以上。上述化合物,可以作为包含药理学上能允许的载体的组合物投给受试者。上述化合物或组合物的有效量,只要是能抑制受试者中高血糖风险判定用标记肽的表达的量即可。
    (5)本发明的试剂盒
    本发明的高血糖风险判定用试剂盒包含上述抗体或适体、或者上述微阵列。
    本发明的试剂盒进一步优选包含口香糖。由此,容易采集作为生物样品的刺激性唾液??谙闾侵灰遣杉碳ば酝僖和ǔJ褂玫目谙闾?石蜡口香糖等)即可。
    [实施例]
    实施例1
    唾液中各肽片段的表达量比较
    <评价方法>
    (1)唾液样品采集
    从具有以下的特征的受试者采集刺激性唾液(通过咀嚼石蜡口香糖进行唾液分泌促进的唾液)。
    高血糖患者组:空腹时血糖在110mg/dL以上和/或血红蛋白在5.8%以上(n=8)
    健康者组:空腹时血糖不足110mg/dL且血红蛋白不足5.8%(n=32)
    (2)根据代谢组分析进行唾液中成分的详尽分析
    将采集到的唾液经离心分离除去夹杂物,将上清液供给于LC-MS(Positive/Negative)、CE-MS(Positive/Negative)。根据Rt值、Ms值鉴定唾液成分。
    <评价结果>
    根据唾液代谢分析的结果确认到由序列号1的氨基酸序列中的氨基酸残基号25~39的氨基酸序列构成的肽,由序列号2的氨基酸序列中的氨基酸残基号59~83的氨基酸序列构成的肽以及由序列号3的氨基酸序列中的氨基酸残基号337~343的氨基酸序列构成的肽的峰,在高血糖组中显著下降。根据蛋白质数据库检索的结果判定,序列号1的氨基酸序列为半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN的氨基酸序列,序列号2的氨基酸序列为碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2的氨基酸序列,序列号3的氨基酸序列为碱性唾液脯氨酸丰富蛋白1的氨基酸,上述各肽为各自的片段。各受试者组的各肽的峰强度如图1~图3以及表1~3所示。各组的显著性差异检定结果如表1~3所示。各表中的*表示检定的结果有显著性差异。
    [表1]
    表1半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN肽(序列号1)片段的峰强度的平均值和显著性差异检定结果(Wilcoxon检定)

    [表2]
    表2碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2(序列号2)片段的峰强度的平均值和显著性差异检定结果(Wilcoxon检定)

    [表3]
    表3碱性唾液脯氨酸丰富蛋白1(序列号3)片段的峰强度的平均值和显著性差异检定结果(Student’s-t检定)

    如图1和表1所示,半胱氨酸蛋白酶抑制剂-SN肽片段的峰强度,高血糖患者组相比于健康者组,有显著性差异,显示下降。该情况表明,低于健康者组的峰强度的22.6时,可判定为高血糖风险高。
    如图2和表2所示,碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2肽片段的峰强度,高血糖患者组相比于健康者组,有显著性差异,显示下降。该情况表明,低于健康者组的峰强度的42.4时,可判定为高血糖风险高。
    如图3和表3所示,碱性唾液脯氨酸丰富蛋白1肽片段的峰强度,高血糖患者组相比于健康者组,有显著性差异,显示下降。该情况表明,低于健康者组的峰强度的105.4时,可判定为高血糖风险高。






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