• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 11
    • 下载费用:30 金币  

    重庆时时彩龙虎有规律: 一种金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法.pdf

    关 键 词:
    一种 纳米 粒子 探针 比色 检测 流感病毒 H3N2 方法
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    摘要
    申请专利号:

    CN201510152842.3

    申请日:

    2015.04.01

    公开号:

    CN104714011A

    公开日:

    2015.06.17

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/569申请日:20150401|||公开
    IPC分类号: G01N33/569 主分类号: G01N33/569
    申请人: 东南大学
    发明人: 卫伟; 刘元建; 刘松琴
    地址: 211189江苏省南京市玄武区四牌楼2号
    优先权:
    专利代理机构: 南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204 代理人: 王艳
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201510152842.3

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2016.10.19|||2015.07.15|||2015.06.17

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法,包括以下步骤:1)单克隆抗体和甲型流感病毒的选??;2)金纳米粒子探针的合成;3)金纳米粒子探针和甲型流感病毒作用;4)观察并记录病毒溶液颜色变化情况;5)利用紫外–可见光谱仪和透射电镜对病毒溶液进行检测。本发明利用金纳米粒子探针在甲型流感病毒囊膜表面的组装后,溶液由酒红色变为蓝色,颜色变化明显,因此可利用比色法检测甲型流感病毒。本发明有效利用了纳米材料的特性,不需要借助精密仪器检测,简化了检测方法,极大地降低了病毒检测成本,本发明具有成本低、快速、简便、敏感且特异性好的优点。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法,其特征在于,包括以下步骤:
    1)单克隆抗体和甲型流感病毒的选??;
    2)金纳米粒子探针的合成;
    3)金纳米粒子探针和甲型流感病毒作用;
    4)观察并记录病毒溶液颜色变化情况;
    5)利用紫外–可见光谱仪和透射电镜对病毒溶液进行检测。

    2.  根据权利要求1所述的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法,其特征在于,所述单克隆抗体为甲型流感病毒H3N2血凝素鼠单克隆抗体。

    3.  根据权利要求1所述的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法,其特征在于,所述步骤2)金纳米粒子探针的合成步骤如下:取一EP管,加入0.5~1 mL,2 nmol/L金纳米粒子溶液,用0.l mol/L K2CO3调节溶液的pH值为8.2~9.2,加入0.1 mg/mL的单克隆抗体15~30 μL,在摇床上120~300转/分钟,37℃下温育1~2小时,然后加入10~20 μL 1%(m/v)BSA,37℃下温育0.5~1小时,最后将探针溶液在12200~13200rpm,4℃下离心20~30分钟,离心三次后复溶在200~500 μL PBS缓冲溶液中,4℃保存。

    4.  根据权利要求1所述的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法,其特征在于,所述步骤3)金纳米粒子探针和甲型流感病毒作用步骤如下:取金纳米粒子探针加入到甲型流感病毒溶液中,37℃下温育1~2小时后,对其溶液进行记录和紫外–可见光谱检测,取5~10 μL病毒溶液滴加到碳膜支持的铜网上,室温下放置1~3分钟后,用滤纸吸去铜网上剩余溶液,然后将铜网浸于1%~2%的磷钨酸钠溶液中1~3分钟后,取出,室温下自然晾干,透射电镜检测。

    5.  根据权利要求3所述的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法,其特征在于,所述PBS缓冲溶液为含有NaCl和KCl的pH 7.2~7.4的10 mmol/L的PBS缓冲溶液,所述NaCl初始浓度为136.89 mmol/L,KCl初始浓度为2.67 mmol/L。

    6.  根据权利要求1所述的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法,其特征在于,所述金纳米粒子直径为13纳米。

    7.  权利要求1所述的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法,其特征在于,所述甲型流感病毒H3N2在缓冲溶液中的终浓度为0~400 HAU。

    说明书

    说明书一种金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法
    技术领域
    本发明属于生物传感技术领域,具体涉及一种金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法,具体是指单克隆抗体功能化修饰到金纳米粒子表面后,特异性识别甲型流感病毒H3N2并组装到其囊膜表面,从而引起金纳米粒子的表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)峰发生红移,继而观测到溶液颜色变化。
    背景技术
    流行性感冒病毒,简称流感病毒,是一种造成人、狗、马、猪及禽类等患流行性感冒的RNA病毒。在世界各地,流感病毒感染是影响发病率和死亡率的一个重要因素。当禽流感和人类流感病毒同时感染中间宿主时,由于基因重组,极易产生新型流感病毒,危害社会。
    传统的流感病毒检测的主要方法有病毒培养分离、免疫学诊断、分子生物学诊断。病毒分离方法经过了很长时间的考验,检测结果更为可靠,灵敏,可以检测出极少量病毒,但存在操作程序繁杂、费用高、实验室安全级别要求高(必须在BSL-3级实验室进行),检测时间约需1~3周,耗时较长,在疫区大面积应用推广,大量样品检测方面存在较多限制条件。免疫学检测技术主要是基于抗原–抗体特异性结合反应的特性建立起来的,检测对象主要为血清样品。但是由于血清血凝抑制因子的干扰,可能会导致血凝抑制试验结果假阳性。分子生物学诊断在近几年得到了较快的发展,尤其是实时荧光定量PCR诊断技术已经成为流感实验室检测和快速诊断的国家标准。但由于检测手段繁琐,需要精密仪器,成本较高,限制了其在临床上的应用。
    近年来除了对传统检测方法的发展和完善,纳米技术作为一种新兴的流感病毒检测方法,正在受到人们的更多关注。随着科学技术的发展带动纳米技术的不断发展进步,有关金纳米粒子在生物检测领域的研究在不断展开与深入,取得了丰硕的成果与长远的发展。金纳米粒子具有独特的光学效应,利用金纳米粒子的SPR性质,当抗原抗体反应引起金纳米粒子聚集形成网络结构后,聚集体在相对较长的波长上对光进行吸收和散射从而使颜色转变为紫红色最后成为蓝色。利用此光学特性的变化,结合生物分子的高灵敏度和特异性,使得金纳米粒子在生物检测上具有广泛而重要的应用前景。
    因此开发一种简单、快速、准确、定量检测临床样本中的流感病毒新方法对于控制流感疫情的发生和蔓延具有重要意义。
    发明内容
    发明目的:本发明所要解决的技术问题是提供了一种金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法。本发明中针对金纳米粒子探针在病毒囊膜表面组装后光学性质发生明显变化,从而建立比色法检测甲型流感病毒,它具有原理简单、实验周期短、所用原料成本较低,并且实验结果用肉眼便可直接观测而无需任何大型仪器。
    技术方案:为了解决上述技术问题,本发明所采用的技术方案为:一种金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法,包括以下步骤:
    1)单克隆抗体和甲型流感病毒的选??;
    2)金纳米粒子探针的合成;
    3)将金纳米粒子探针和甲型流感病毒作用;
    4)观察并记录病毒溶液颜色变化情况;
    5)利用紫外–可见光谱仪和透射电镜对病毒溶液进行检测。
    其中,上述单克隆抗体为甲型流感病毒H3N2血凝素鼠单克隆抗体。
    其中,上述步骤2)金纳米粒子探针的合成步骤如下:取一EP管,加入0.5~1 mL,2 nmol/L金纳米粒子溶液,用0.l mol/L K2CO3调节溶液的pH值为8.2~9.2,加入0.1 mg/mL的单克隆抗体15~30 μL,在摇床上120~300转/分钟,37℃下温育1~2小时,然后加入10~20 μL 1%(m/v)BSA,37℃下温育0.5~1小时,最后将探针溶液在12200~13200 rpm,4℃下离心20~30分钟,离心三次后复溶在200~500 μL PBS缓冲溶液中,4℃保存。
    其中,上述步骤3)金纳米粒子探针和甲型流感病毒作用步骤如下:取金纳米粒子探针加入到甲型流感病毒溶液中,37℃下温育1~2小时后,对其溶液进行记录和紫外–可见光谱检测,取5~10 μL病毒溶液滴加到碳膜支持的铜网上,室温下放置1~3分钟后,用滤纸吸去铜网上剩余溶液,然后将铜网浸于1%~2%的磷钨酸钠溶液中1~3分钟后,取出,室温下自然晾干,透射电镜检测。
    其中,上述PBS缓冲溶液为含有NaCl和KCl的pH 7.2~7.4的10 mmol/L的PBS缓冲溶液,所述NaCl初始浓度为136.89 mmol/L,KCl初始浓度为2.67 mmol/L。
    其中,上述金纳米粒子直径为13纳米。
    其中,上述甲型流感病毒H3N2在缓冲溶液中的终浓度为0~400 HAU。
    本发明通过一种基于表面修饰甲型流感病毒H3N2血凝素(HA)鼠单克隆抗体的金纳米粒子探针特异性识别甲型流感病毒H3N2囊膜表面的血凝素,金纳米粒子组装到病毒囊膜表面,然后通过病毒囊膜表面金纳米粒子的SPR性质,比色法检测甲型流感病毒H3N2。制备了单克隆抗体修饰的金纳米粒子探针。由于每个流感病毒直径在80~120纳米,囊膜表面含有约500个血凝素,因此囊膜表面血凝素相邻之间约为8纳米,而金纳米粒子的直径为13纳米,大于血凝素相邻间距,因此病毒囊膜表面组装的金纳米粒子可以有效的产生SPR效应,金纳米粒子的SPR吸收峰从525纳米左右红移到600纳米左右,且525纳米处的SPR峰强度减弱,600纳米处的SPR峰强度增加,随着病毒浓度的增大,反应液颜色从酒红色逐渐变为深蓝色。因此本发明利用单克隆抗体的特异性和金纳米粒子的SPR性质,实现比色法检测甲型流感病毒H3N2。
    有益效果:与现有技术相比,本发明具有如下的特色及优点:
    (1)本发明利用金纳米粒子探针在甲型流感病毒囊膜表面的组装后,溶液由酒红色变为蓝色,颜色变化明显,因此可用比色法检测甲型流感病毒。
    (2)本发明有效利用了纳米材料的特性,不需要借助精密仪器检测,简化了检测方法,极大地降低了病毒检测成本,本发明具有成本低、快速、简便、敏感且特异性好的优点。
    附图说明
    图1显示了基于表面修饰甲型流感病毒H3N2血凝素(HA)鼠单克隆抗体的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的流程图;
    图2A显示了金纳米粒子的透射电镜图;从图中可以看出金纳米粒子粒径均一,分散性好;图2B显示了a线:金纳米粒子的紫外吸收光谱;b线:金纳米粒子探针的紫外吸收光谱;从图中可以看出,金纳米粒子探针相对金纳米粒子的紫外吸收光谱没有发生很大的变化,金纳米粒子探针在缓冲溶液中性质稳定;
    图3A显示了金纳米粒子探针和甲型流感病毒H3N2组装体的透射电镜图,标尺为50纳米;从图中可以看出金纳米粒子探针成功组装到甲型流感病毒H3N2囊膜表面;图3B显示了H3N2线:金纳米粒子探针和甲型流感病毒H3N2组装体的紫外吸收光谱;control线:金纳米粒子探针在缓冲溶液中的紫外吸收光谱;插图为对应溶液的数码照片;从图中可以看出,当溶液中有甲型流感病毒H3N2时,金纳米粒子探针的SPR吸收峰发生明显红移,对应溶液颜色由酒红色变为蓝色。
    图4显示了检测甲型流感病毒H3N2特异性的紫外光谱变化图和柱状图;A:在不同探针作用下,得到的紫外光谱图(a:金纳米粒子探针与甲型流感病毒H3N2作用;b:表面修饰BSA的金纳米粒子对比探针与甲型流感病毒H3N2作用;c:金纳米粒子探针),插图为对应溶液的数码照片;从图中可以看出只有单克隆抗体修饰的金纳米粒子探针可以特异性识别甲型流感病毒H3N2;B:金纳米粒子探针与不同流感病毒作用后的柱状图;插图为对应溶液的数码照片;从图中可以看出金纳米粒子探针特异性捕获甲型流感病毒H3N2,与其他流感病毒无明显作用。
    图5显示了定量检测甲型流感病毒H3N2的紫外光谱变化图。A:在不同量的甲型流感病毒H3N2作用下,得到的紫外光谱图(甲型流感病毒H3N2的浓度:(a) 0、(b) 10、(c) 20、(d) 40、(e) 60、(f) 80、(g) 100、(h) 200、(i) 400 HAU);B:紫外吸收对比强度与甲型流感病毒H3N2浓度的拟合曲线;插图:紫外吸收对比强度与甲型流感病毒H3N2浓度之间的线性关系;从图中可以看出甲型流感病毒H3N2在10 HAU到80 HAU呈良好的线性关系。
    具体实施方式
    下面通过具体的实施例和附图对本发明进一步说明,应当指出,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干变型和改进,这些也应视为属于本发明的?;し段?。
    本实验中用到的试剂和仪器:
    甲型流感病毒(H3N2 IAV,H1N1 IAV,H2N2 IAV),乙型流感病毒(Yamagata, Victoria),甲型流感病毒H3N2血凝素(HA)鼠单克隆抗体(mAb),牛血清蛋白(BSA),氯金酸(HAuCl4·3H2O),柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O),磷钨酸钠(PTA),紫外分光光度计(Shimadzu UV–2450, Kyoto,Japan),透射电镜(JEM–2010,Hitachi,Japan),混合涡旋仪(IKA German),离心机(Eppendorf German),数码相机(Canon IXUS 115,Japan)。
    实施例1:
    基于表面修饰甲型流感病毒H3N2血凝素(HA)鼠单克隆抗体的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的分析方法,检测步骤是:
    探针合成步骤:取一EP管,加入1 mL,2 nmol/L金纳米粒子溶液,用0.l mol/L K2CO3调节溶液的pH值为8.2,加入0.1 mg/mL的单克隆抗体30 μL,在摇床上120转/分钟,37℃下温育2小时。然后加入20 μL 1%(m/v)BSA,37℃下温育30分钟。最后将探针溶液在13200 rpm,4℃下离心20分钟,离心三次后复溶在200 μL PBS缓冲溶液中,4℃保存。此溶液作为探针溶液。
    取一EP管,加入1 mL,2 nmol/L金纳米粒子溶液,加入20 μL 1%(m/v)BSA,37℃下温育30分钟。然后将探针溶液在13200 rpm,4℃下离心20分钟,离心三次后复溶在200 μL PBS缓冲溶液中,4℃保存。此溶液作为对比探针溶液。
    原理验证步骤:50 μL,10 nmol/L探针溶液加入到400 HAU 200 μL甲型流感病毒H3N2溶液中,充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应2小时后,取5 μL病毒溶液滴加到碳膜支持的铜网上,室温下放置3分钟后,用滤纸吸去铜网上剩余溶液,然后将铜网浸于1%的磷钨酸钠溶液中3分钟后,取出,室温下自然晾干,透射电镜检测。实验结果见图3A:金纳米粒子探针成功组装到甲型流感病毒H3N2的囊膜表面。同时将病毒溶液去扫描紫外–可见光谱,对比病毒加入前后的溶液颜色变化。实验结果见图3B:control线为探针溶液的紫外吸收谱,H3N2线为病毒加入后溶液的紫外吸收谱,H3N2线相比control线的SPR吸收峰从525纳米红移到650纳米左右,同时对应溶液由酒红色变为蓝色。结果显示金纳米粒子探针成功组装到甲型流感病毒H3N2的囊膜表面,从而引起金纳米粒子的SPR峰发生红移,对应溶液颜色由酒红色变为蓝色。
    特异性检测步骤:在含有400 HAU 200 μL甲型流感病毒H3N2溶液的两个EP管中,分别加入50 μL,10 nmol/L探针溶液和对比探针溶液。充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应30分钟,然后将两EP管中溶液去扫描紫外–可见光谱,同时对比溶液颜色。实验结果见图4A:将含有探针溶液的紫外吸收数据与对比探针溶液比较,探针溶液的紫外吸收峰发生明显红移,且溶液颜色明显变紫,对比探针溶液无明显变化。将50 μL,10 nmol/L探针溶液分别加入到400 HAU 200 μL的不同流感病毒溶液(H2:H3N2 IAV,H1:H1N1IAV,H3:H2N2 IAV,Yamagata,Victoria)中,充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应30分钟,然后将产物溶液去扫描紫外–可见光谱,同时对比溶液颜色。实验结果见图4B:金纳米粒子探针特异性捕获甲型流感病毒H3N2,与其他流感病毒无明显作用。结果显示探针溶液对甲型流感病毒H3N2的检测效果很好。
    定量检测甲型流感病毒H3N2步骤:将50 μL,10 nmol/L探针溶液和不同量的甲型流感病毒H3N2 (0、10、20、40、60、80、100、200、400 HAU)充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应30分钟,反应结束后,将产物溶液去扫描紫外–可见光谱。分析得到紫外吸收图谱,绘出甲型流感病毒H3N2线性图。实验结果见图5:甲型流感病毒H3N2在10 HAU到80 HAU呈良好的线性关系,检测限是7.8 HAU。注:反应总体积为250 μL。
    实施例2:
    基于表面修饰甲型流感病毒H3N2血凝素(HA)鼠单克隆抗体的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的分析方法,检测步骤是:
    探针合成步骤:取一EP管,加入500 μL,2 nmol/L金纳米粒子溶液,加入10 μL,0.l mol/L K2CO3,充分摇匀后,加入15 μL,0.1 mg/mL的单克隆抗体,在摇床上300转/分钟,37℃下温育2小时。然后加入10 μL 1%(m/v) BSA,37℃下温育1小时。最后将探针溶液在12200 rpm,4℃下离心30分钟,离心三次后复溶在200 μL PBS缓冲溶液中,4℃保存。此溶液作为探针溶液。
    取一EP管,加入500 μL,2 nmol/L金纳米粒子溶液,加入10 μL 1%(m/v) BSA,37℃下温育1小时。然后将探针溶液在12200 rpm,4℃下离心30分钟,离心三次后复溶在200 μL PBS缓冲溶液中,4℃保存。此溶液作为对比探针溶液。
    原理验证步骤:50 μL,10 nmol/L探针溶液加入到400 HAU 200 μL甲型流感病毒H3N2溶液中,充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应1小时后,取5 μL病毒溶液滴加到碳膜支持的铜网上,室温下放置3分钟后,用滤纸吸去铜网上剩余溶液,然后将铜网浸于2%的磷钨酸钠溶液中1分钟后,取出,室温下自然晾干,透射电镜检测。实验结果:金纳米粒子探针成功组装到甲型流感病毒H3N2的囊膜表面。同时将病毒溶液去扫描紫外–可见光谱,对比病毒加入前后的溶液颜色变化。实验结果:探针溶液的SPR吸收峰从525纳米红移到650纳米左右,同时对应溶液由酒红色变为蓝色。
    特异性检测步骤:在含有512 HAU 200 μL甲型流感病毒H3N2溶液的两个EP管中,分别加入100 μL,5 nmol/L探针溶液和对比探针溶液。充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应1小时,然后将两EP管中溶液去扫描紫外–可见光谱,同时对比溶液颜色。实验结果见图4A:将含有探针溶液的紫外吸收数据与对比探针溶液比较,探针溶液的紫外吸收峰发生明显红移,且溶液颜色明显变紫,对比探针溶液无明显变化。将100 μL,5 nmol/L探针溶液分别加入到512 HAU 200 μL的不同流感病毒溶液(H2:H3N2 IAV,H1:H1N1 IAV,H3:H2N2 IAV,Yamagata,Victoria)中,充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应1小时,然后将产物溶液去扫描紫外–可见光谱,同时对比溶液颜色。实验结果见图4B:金纳米粒子探针特异性捕获甲型流感病毒H3N2,与其他流感病毒无明显作用。结果显示探针溶液对甲型流感病毒H3N2的检测效果很好。
    定量检测甲型流感病毒H3N2步骤:将100 μL,5 nmol/L探针溶液和200 μL不同浓度的甲型流感病毒H3N2 (0、20、40、80、160、200、300、400 HAU)充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应1小时,反应结束后,将产物溶液去扫描紫外–可见光谱。分析得到紫外吸收谱图,绘出甲型流感病毒H3N2线性图。实验结果见图5:甲型流感病毒H3N2在40 HAU到200 HAU呈良好的线性关系,检测限是37.8 HAU。注:反应总体积为300 μL。
    实施例3:
    基于表面修饰甲型流感病毒H3N2血凝素(HA)鼠单克隆抗体的金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的分析方法,检测步骤是:
    探针合成步骤:取一EP管,加入1 mL,2 nmol/L金纳米粒子溶液,用0.l mol/L K2CO3调节溶液的pH值为9.2,加入0.1 mg/mL的单克隆抗体30 μL,在摇床上200转/分钟,37℃下温育2小时。然后加入20 μL 1%(m/v)BSA,37℃下温育1小时。最后将探针溶液在13200 rpm,4℃下离心20分钟,离心三次后复溶在200 μL PBS中,4℃保存。此溶液作为探针溶液。
    取一EP管,加入1 mL,2 nmol/L金纳米粒子溶液,加入20 μL 1%(m/v)BSA,37℃下温育30分钟。然后将探针溶液在13200 rpm,4℃下离心20分钟,离心三次后复溶在200 μL PBS中,4℃保存。此溶液作为对比探针溶液。
    原理验证步骤:50 μL,10 nmol/L探针溶液加入到400 HAU 200 μL甲型流感病毒H3N2溶液中,充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应1小时后,取10 μL病毒溶液滴加到碳膜支持的铜网上,室温下放置1分钟后,用滤纸吸去铜网上剩余溶液,然后将铜网浸于1%的磷钨酸钠溶液中3分钟后,取出,室温下自然晾干,透射电镜检测。实验结果:金纳米粒子探针成功组装到甲型流感病毒H3N2的囊膜表面。同时将病毒溶液去扫描紫外–可见光谱,对比病毒加入前后的溶液颜色变化。实验结果:探针溶液的SPR吸收峰从525纳米红移到650纳米左右,同时对应溶液由酒红色变为蓝色。
    特异性检测步骤:在含有512 HAU 200 μL甲型流感病毒H3N2溶液的两个EP管中,分别加入50 μL,10 nmol/L探针溶液和对比探针溶液。充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应1小时,然后将两EP管中溶液去扫描紫外–可见光谱,同时对比溶液颜色。实验结果见图4A:将含有探针溶液的紫外吸收数据与对比探针溶液比较,探针溶液的紫外吸收峰发生明显红移,且溶液颜色明显变紫,对比探针溶液无明显变化。将50 μL,10 nmol/L探针溶液分别加入到512 HAU 200 μL的不同流感病毒溶液(H2:H3N2 IAV,H1:H1N1 IAV,H3:H2N2 IAV,Yamagata,Victoria)中,充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应1小时,然后将产物溶液去扫描紫外–可见光谱,同时对比溶液颜色。实验结果见图4B:金纳米粒子探针特异性捕获甲型流感病毒H3N2,与其他流感病毒无明显作用。结果显示探针溶液对甲型流感病毒H3N2的检测效果很好。
    定量检测甲型流感病毒H3N2步骤:将100 μL,5 nmol/L探针溶液和200 μL不同浓度的甲型流感病毒H3N2 (0、30、60、90、120、150、300、400 HAU)充分混匀后,在37℃恒温水浴锅中反应1小时,反应结束后,将产物溶液去扫描紫外–可见光谱。分析得到紫外吸收谱图,绘出甲型流感病毒H3N2线性图。实验结果见图5:甲型流感病毒H3N2在30 HAU到150 HAU呈良好的线性关系,检测限是28.4 HAU。注:反应总体积为250 μL。
    上述仅为本发明优选的实施例,并不限制于本发明。对于所属领域的技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施例来举例说明。而由此方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的?;し段е?。

    关于本文
    本文标题:一种金纳米粒子探针比色法检测甲型流感病毒H3N2的方法.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-5890675.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
  • 快三包胆投注方法 逆袭分分彩计划软件下载 大乐透30期走势图 江西时时软件手机版 时时彩稳赚刷量的方法 pk10七码精准计划群 大小倍投稳赚方案图片 彩票对刷套利稳赚不赔 大发pk10走势图 时时彩后三包胆怎么玩 香港内部三肖碼 幸运飞艇下载 澳门赌 财神爷计划软件手机 重庆时时官网开奖软件 腾讯分彩计划软件下载